|
具门第一章概述 菌种是食用菌生产的根本。菌种性状的优劣直接影响到生产的成败和丰歉。因此，凡食用菌培植人员，都必须认真做好菌种的培育工作。 所谓菌种培育，就是选择和培育优良菌株，其目的无非是取代或改革原有菌种，以提高其产品的产量和质量，并使之不断适应工艺改革的需要。 培育菌种，需要一定的设备和技术条件。 缺乏制种设备和技术的单位或个人，可向我校购买母种或原种，然后扩大培育生产种，也可以直接购买生产种来进行生产。 第二章 菌种的分类 一、母种:耳(菇)在成熟时落下的孢子或耳(菇)体组织在琼脂培养基上萌发分离的菌丝在生产上称为母种。 但母种不能直接做为生产种使用，原因是成本太高，还必须扩大成原种，再转为生产种。才可使用。 二、原种:将母种菌丝扩接到锯木屑或代锯木屑培养基上，适温培养25-40天后，成长的菌丝体，叫做原种。原种还必须通过扩大，才能应用于生产上。" 三、生产种:原种再接到锯木屑培养基上或代锯木屑培养基上扩大繁殖培养，由此发育而成的菌丝体，叫做栽培种。可以直接应用到生产上。 第三章 制种所需的主要设备和工具 1 、接种箱或接种室: 接种箱:是一种可以严密关闭的小箱子，它的体积小，容易消毒，结构简单，经济实用，只花一些木料，纤维板，玻璃等，就可以制成。接种箱的两边，各留两个直径12公分的圆洞，洞口上订上套布，以便两手伸人箱内操作，有条件的单位或个人，箱内可安紫外线灭菌灯一支，箱体不宜过大或过小，过大操作不方便，不便于挪动，过小则接种瓶数太少，一般为长1.5米，宽0.8米-0.9米为宜。 接种室:是一间可以严密关闭的小房子，与接种箱的作用一样，接种室应设在向阳、干燥之处，面积不宜过大，一般5-7平方米为宜。接种室外面应设有一个小缓冲室。门不能对开，要安装有拉门，室内的墙壁和地面要清洁光滑，便于消毒，室内要装有电灯和紫外线灭菌灯。 本接种箱和接种室比较，虽然接种箱接种数量不多，操作不太方便，但其结构简单，体积小，容易消毒，人在箱外操作，不致于吸入有毒气体，夏季接种，不感到闷热，目前生产上，多数都用接种箱接种。当然如果经济条件许可,而且很有必要时，建造接种室,对于工厂化,大规模生产更加有利。 2、消毒灭菌锅:目前使用的消毒锅有高压蒸汽灭菌和常压灭菌锅两种。高压蒸汽灭菌，具有时间短，效果好和省燃料等优点，但投资大。它分手提式，立式和卧式几种(市场均有出售)手提式的容量小，适于试管培养基、无菌水和一些器具消毒之用。立式和卧式的容积大，一次可消毒750毫升的菌种瓶数十瓶或几十瓶。一般用于原种和生产种培养基的消毒，如生产规模大，还要建常压灭菌灶。 3、恒温室与恒温箱: 恒温箱:制作母种和少量原种时使用。所占面积小，可用恒温箱进行培养。它可用木料自制，简易的恒温箱，其规格90-120厘米，宽80-100厘米，分成3-5层，每层相隔30厘米，安上热力丝或250瓦红外线灯，在箱的一角安装一台恒温调节器，箱的顶端插入一支温度计，可以随时观察箱内温度。 恒温室:它是温度恒定的小房子，在菌种数量多时，必须用恒温室进行保温，其大小要视菌种生产量的数量而定。一般340厘米见方的房间为理想。室内安装3-6盏250瓦的红外线灯，架层40厘米，如有条件，也可安装一台恒温调节器，使其自动调温。一般一间房层数为6层的恒温室，可放750毫升的菌种瓶3000左右。 4、电冰箱:用于菌种的保存和安全越夏。有在基内菌丝分离时，将分离材料在冰箱中冷冻一段时间，可以把虫害和其它杂菌杀死。 5、标准天平或工业天平:用于称量各种实验样品和培养料。 6、温度计:用于测定恒温箱、冰箱、恒温室或灭菌灶的温度。 7、干湿温度计:用于测定培养室的温、湿度变化情况。 8、试管:用于制备斜面培养基，分离培养母种。规格20x200毫米、18x180毫米、21x200毫米、15 x150毫米。 9、三角烧瓶及烧杯:用于制备母种。 目 10、培养皿:用于制备平板培养基，分离培养菌种。常用规格为9-10厘米。 11、量筒或量杯:用于量取溶液或蒸馏水。规格有200毫升、500毫升、1000毫升等几种。 12、漏斗:制备培养基时，用于过滤或装管。18、酒精灯:用于接种操作时灭菌消毒。 14、吸管:用于吸取和稀释孢子液。常用为1毫升、5 毫升。 15、注射器:用于吸取平菇孢子液使用。 16、菌种瓶:用于培养原种和栽培种，广口玻璃瓶容量为750毫升，口径为3-5厘米。罐头瓶可以用于平菇生产种的制作。 17、棉花:用于试管或菌种瓶的瓶塞。18、铝锅:用于蒸煮琼脂培养基。 19、接种刀和接种针:用于菌种的分离，移植操作。20、消毒脱脂棉花、纱布、解剖刀、镊子、剪刀、小木架、手套、钢钩、滑石粉等其他工具。 第四章 母种培养基的成份制作和灭菌 无论是银耳、平菇、黑木耳、猴头的母种培养基，一般都是琼脂、马铃薯培养基。其成份: 马铃薯200克琼脂20克 葡萄糖20克 水1000毫升。制法:将马铃薯洗净去皮，(发芽的把芽眼挖掉)称200克，切成薄片，放入铝锅中，加水煮沸30分钟，捞起，用6层纱布过滤取汁。称琼脂20克，用剪刀剪碎，加入马铃薯液中，继续加热，并用筷子不断搅动，使踪脂不断溶化，再加水至1000毫升，然后加入葡萄糖，稍煮几分钟后，用六层纱布过滤一次，趁热分装试管内，装量为试管的五分之一处，随印毫上棉塞，立放于小箱或小筐内，分装时，注意不要使培养基沾在试管壁上和口上。以免发生杂菌感染。 试管的棉塞要求塞的松紧适度，并与试管壁紧密相接，以防止棉塞脱落而使杂菌进人，棉塞通常要塞入三分之二，留三分之一在外面，以便拔出。 灭菌:装管后的培养基，要及时进行高温灭菌，试管培养基的灭菌，因数量少，以采用手提式高压灭菌锅进行灭菌，且消毒彻底。使用前，必须彻底检查消毒锅的安全阀、放汽阀、压力表、喷汽管是否符合使用要求，并确定锅内的水量，以防烧干，发生事故。灭菌时，将试管每十支捆成一捆，外边用牛皮纸包上，垂直放于锅内进行消毒灭菌。在1-1.2公斤/厘米2的压力下，保持30分钟，然后把消毒锅取下，待压力表自动降到“0”时，再打开锅盖，将试管取出，斜放在桌子上的小木板上，使斜度达试管长度的二分之一或三分之二，冷却后即成了固体斜面培养基。 第五章 银耳菌种的培育 银耳菌种的培养包括:母种的分离和提纯，原种的培养和生产种的扩大，现分述如下: -、母种的分离和提纯:银耳母种分离的方法，有孢子分离法和基内菌丝分离法。前一种属有性繁殖，分离相当复杂，菌种不易退化，因孢子个体差异大，菌种变异也大，不能直接扩大生产，还要几次筛选才能使用。后一种属无性繁殖，分离方法简单，菌种纯度不高，容易退化，不能转代太多，现将两种分离方法介绍如下: (一)孢子分离法: ①培养基成分制作和灭菌(同第四章)。 ②种耳的来源:根据我地区的情况，野生的种耳不容易得到，都是采取用袋栽或瓶栽的银耳作为种耳。 ③种耳的选择:选种耳是一项十分细致的工作，在幼长到3-5厘米左右时，可从中选出50-70朵生活力强。生长最快，朵形大，色泽白，耳片大而厚，无病虫害的作为种耳，集中排列在一起，编上号码，仔细观察生长情况再选出13-15朵，重新编上号码，观察生长情况，最后选出最优良的3-5朵，作为种耳。 ④种耳采集的时间:种耳选出后，待孢子成熟进行乐集，一般是在出耳后12-15左右，在这时若在种耳底部铺上一块塑料布，经一天后，用手摸薄膜，有润滑感，这表明孢子已开始散落下来，(一般孢子弹射的时间为1-2天)此时即可将种耳移到接种箱内进行分离。 ⑤种耳的表面消毒:因种耳表面和基部还带有大量杂菌，因此要首先经过表面消毒，灭虫处理，方法是，将种耳的瓶或袋，用75%的酒精表面擦洗2-4遍，移入装有敌敌畏或乐果的容器中，放置24小时(不能将种耳浸在药液中)以便杀死附在耳基底部和周围的杂菌和害虫。 ⑥孢子采取:将经过消毒的烧杯4只、不绣钢钩、接种针、剪刀、镊子、无菌水、无菌纱布、酒精灯、75%酒精装有经灭菌的琼脂培养基三角瓶3-5个，试管10-20支，以及种耳一起放入接种内，用甲醛每米³10毫升,高锰酸钾每米*8克,混合汽化消毒30-40分钟。 操作人员先用2%来苏尔洗手凉干，然后再用75%的酒精洗手凉干，擦上滑石粉，戴上手套，再用75%的酒精洗手，趁湿伸入接种箱内，先擦工作面玻璃，点燃酒精灯，把无菌水分别倒入3个烧杯中，顺序排好，再将75%的酒精倒入另一个烧杯中，用剪刀在种耳上，剪取一块母指大小的耳片，用镊子夹住，放在75%的酒精中浸洗5-10秒钟，然后迅速移入第一个烧杯中，浸洗一分钟，再移入第二个第三个烧杯中，各浸洗一分钟，用无菌纱布把附在耳片表层的水吸干，然后挂在钢钩上并迅速挂入三角瓶内(耳片应距三角瓶培养基约2厘米左右)为了选优，可多挂几个瓶子。 种耳挂瓶后，把三角瓶移入23-25℃的温度中培养24小时，三角瓶培养基上可看到雾状的孢子后，移入接种箱内，取出耳片和钢钩，(操作按无菌操作 要求)塞 上棉塞，再移人温室中培养2-3天后，在培养基表面上就可以看到白色，糊状，边缘光滑的银耳菌落，此时把三角瓶移入无菌箱内，用接种针挑取少许孢子，将它移接于经消毒的马铃薯琼脂培养基上进行扩大培养。 (二)孢子的稀释和提纯: ①提纯的目的:由于种耳在孢子弹射过程中，尽管操作如何的严密，总是难免混有其它杂菌来影响孢子纯度，为了获得纯度较高的银耳孢子，必须根据银耳的形态特征采取稀释提纯来得到较优良的银耳芽孢。 ②提纯稀释孢子的办法，稀释孢子是一种很细致的工作，具体方法:取5个三角瓶，编上1、2、8、4、5顺序号，各放入直径0.3毫米的玻璃珠20-30粒，再倒人10毫升蒸馏水，塞上棉塞，取直径9厘米的培养皿若干个，各倒人马铃薯琼脂培养基0。3厘米，用纱布扎紧，迮同三角瓶，一起放入手提式高压锅内进行消毒时间30分钟，冷却备用。 取出经培养成熟的银耳芽抱试管一支，连同已冷却的三角瓶，培养皿，接种针，经消毒的1毫升吸管等，一起放入接种箱内，进行汽化消毒，30分钟后即可操作，用接种针挑取少许银耳芽孢，放入1号三角瓶内，轻轻摇动1分钟，待孢子分散后，用吸管吸1毫升，注入第二个三角瓶内，按此法作完5个三角瓶，最后用吸管在第五个三角瓶内吸1毫升悬浮液注入培养皿内，用纱布包紧，轻摇培养皿，使孢子悬浮液均匀分布于培养皿表面，再翻转培养皿，移入23-25℃的恒温下培养，3-5天后，可以看到在培养基表面上有边缘整齐，光滑中间凸起银耳孢子出现。这就是纯的银耳孢子，然后再在接种箱内移接到新的试管培养基上，进行扩大培养，在22-24℃的温度下，培养20-30天，发现有菌丝出现，在移入新的培养基上，进行移管培养，使进一步提纯。 (三)香灰菌丝的分离: 分离香灰菌丝一般都是从袋栽的或瓶栽的菌丝体进行分离。其方法是取栽培的培养基一个，去掉耳基先用75%的酒精将袋或瓶擦几遍，连同接种工具和经消毒的斜面试管培养基，一起放入接种箱内，进行汽化消毒，时间30分钟后，操作人员进行操作，用接种刀把瓶子或袋子底部打破，这时左手拿住试管底部，用右手的母指食指和中指夹住接种针，小指和无名指夹住试管棉塞，在酒精灯火焰上方拔出，把接种针先在火焰上方烧红，放在试管培养基上蘸一下，令其冷却，然后，用接种针从中取出米粒大小的菌丝，迅速通过火焰，移人试管中，塞上棉塞，移人23-25℃温度下培养，经5-7天，培养基底部变黑，再经过3-5次反复提纯，即可获得纯的香灰菌丝母种。 (四)银耳母种和香灰母种的混合:选由芽孢萌发的银耳菌丝母种试管一支，与琼脂培养基试管若干支，连同接种工具放入接种箱内，采用母种试管移接法，挑取一块小米粒大小的银耳菌丝移接于琼脂培养基试管中央塞上棉基，移人23-25℃恒温箱中，培养6-8天，菌丝长至黄豆大小时，再连同香灰母种一起移进接种箱内，接入香灰母种，然后移入22-24℃的温度下培养，2-3天后接种块上出现浓白色的粗短菌丝团。12-15天左右，白毛团的上方出现红、黄色水珠时，说明母种已培养成熟，即可进行原种扩大，每支试管只能移接1-2瓶原种。 二、基内菌丝分离法:就是从袋栽或瓶栽银耳子实体基部分离出新菌丝的方法。具体方法是从出耳早，出耳率高，无病虫害的栽培室中，选择生活力最强的数十朵，进行变温培养，增加菌丝体的生活力，经培养几天后，待子实体直径达4厘米时即可作为分离用的母体，再从中选出最理想的一朵，用刀子割掉子实体，放于0℃的冰箱或有乐果敌敌畏的溶器中24个小时，以便杀死害虫，然后用75%酒精擦洗四基和袋瓶外边的杂质，连同接种工具，母种培养基等一切工具放入接种箱内,进行汽化消毒时间30分钟后用接种刀挖去耳基下面1.5厘米的老菌根，将露出的白色菌丝,用接种针挑取米粒大小的一块，迅速移人母种试管培养基的中央，轻轻地脱掉接种针，塞上棉塞，一次可接种100-200支试管，接种后放入23-25℃的温室中培养，2-3天，分离物的边缘，可看到白色菌丝，5-7天白色菌丝萌发蔓延,7-10天布满整个培养基表面，出现祸黑色分泌物，10 -15天，接种块扭结团出现红、黄色水珠，再经过2-3次提纯，即可进行原种扩大。 三、原种的扩大培养: 为满足菌种生产的需要，应选出优良的，纯度较高的母种进一步扩大为原种。 (一)原种培养基配方和制作: 配方: 干木屑 100斤 干木屑 100斤 麦麸 35斤 细米糠 30斤 石膏粉 3.7斤 黄豆粉 5斤 硫酸镁 0.35斤 石膏粉 2斤 磷酸二氢钾0.35斤 白 糖 1.5斤 白糖 1.3斤 硫酸镁 0.5斤 旦白栋 0.6斤 (水 125-145斤 水 135-140斤 制法:先称取木屑、麦皮、石膏粉，混合拌匀，再称取白糖、硫酸镁、磷酸二氢钾、旦白栋，用开水化开，记下用水数，用总水量减去开水数，再称出所加的水，把两种水混合，加入木屑混合料中，翻抄几遍，用细筛子筛两遍，结团的打碎再过筛，使整个料物全部均匀，湿度以手抓起培养料捏紧能成团，落下会散开为准，PH值为5.4-5.8。然后装入透明的750毫升菌种瓶中，用压脚压实表面成凹形，装量为瓶高的三分之二，装瓶结束后，用布或棉花把沾在瓶壁内外的培养基擦净，塞上棉塞，棉塞不宜过大和过小，过紧瓶内氧气不足，菌丝生长不好，过松，杂菌容易感染。 棉塞制作:先取若干大小的适中的棉花，放在左手的掌心，再把碎棉花集中放在成块棉花的中央，然后用右手把四周杂乱的棉花集中扭成一个组头。把纽头放在瓶口上边，边旋转边塞进瓶口，这样就形成上下底都光滑的棉塞。 (二)原种培养基的灭菌:原种培养基的灭菌和母种培养基的灭菌要求一样严格，因体积大，数量也多，一般用立式和卧式的消毒锅灭菌，在压力1.4公斤/厘米2下,灭菌2个小时。灭菌工作完毕后，不能直接放气，先熄灭热源，使其自然冷却，约20分钟，再打开锅盖，使蒸气把棉塞烘干取出培养基，冷却备用。 (三)原种移接:选出已培养成熟的母种试管若干支，消过毒的锯木屑培养基，接种工具，一起放入接种箱内进行气化消毒30分钟，按操作要求进行工作，用左手拿住母种试管，右手拿住接种针在酒精灯上方一寸左右的地方，拔掉棉塞，再用接种针在母种的白毛团四周划一圈，以便把 香灰菌丝体隔开，然后用接种针，在白毛团的中央一钩迅速离开母种试管，悬在空中，左手迅速把母种试管放下，换上原种瓶，靠近酒精灯，用右手小指和无名指夹住棉塞，轻轻拔出，迅速将右手接种针上的母种接入原种培养基中央，塞上棉塞，一支母种试管只能接一瓶原种，照此法，接完所有的培养基。 注意:操作人员思想要高度集中，动作要熟练，迅速准确，特别在母种离管后，要防止接种针上的母种丢落，而造成接种失败。在整个过程中，拔棉塞，母种接入瓶内等动作，都不能离开酒精灯。 3 (四)原种培育:原种接种后，放入24-26℃的恒温室中培养，2-3天后，在母种块边缘会出现白色粗短的菌丝，这时把温度恒定在28-25℃，空气相对湿度绝对保持70%以下，每4小时通风一次，时间20-30分钟，每天检查一次，若发现有感染的，要及时清理出去，4-7天，每天检查一次，每3小时通风一次，时间20分钟，还要保持室内干燥。 7-10天温度22-24℃，空气相对湿度70%左右，每天通风8-10次，时间20分钟。两天检查一次。这时要把瓶子散开，距离2厘米，10-15天，温度保持20-22℃，空气相对湿度70%左右。每2小时通风-次，时间20分钟，培养室如能保持在22℃全天可以通风。 15天后保持18-20℃，保持室内干燥、清洁，加强通风量，增加光照强度。18-25天，在培养基表面出现粉红色的水珠，然后出现子实体，说明原种已培养成熟即可扩接生产种。 四、生产种的扩大和培养: 由于原种的数量还比较少，但成本也高，所以必须再扩大培养为栽培种，才能广泛应用于生产上，栽培种的制作方法和原种基本相同。 1、培养基配方:课卜 干木屑 100斤 干木屑 100斤 麦 麸 37斤 麦 麸 80斤 石膏粉 3.5斤 石膏粉 2斤 硫酸镁 0.4斤 白糖 1.5斤 磷酸二氢钾 0.4斤 过磷酸钙 .11斤 白糖 1.4斤 黄豆粉 2斤 旦白栋 0.7斤 水 125-145斤 水 140斤 制法和原种培养基一样，灭菌:由于数量之多，一般都是用常压灭菌灶灭菌，把瓶子横放在灭菌灶内，在100℃时，保持10个小时。灭菌后，要轻轻把盖子揭开，排出蒸气防止棉塞受潮。 2、接种:培养基灭菌后，待温度下降到30℃以下时连同原种，接种工具一起放入接种箱内进行汽化消毒，按照栽培拌种的方法，在酒精灯上，拔掉棉塞，倒出积水，瓶口永远不离灯头，拿接种铲刮掉瓶壁和表面上的杂物，刮出的杂物放在小黑碗内，如有小耳，也要轻轻刮掉，用接种铲在瓶内深切一公分，然后把它轻轻压碎，如米粒大小，再往下挖1.5公分的香灰菌丝，二者充分拌匀，拌好后松料2.5公分为宜，菌种拌好后，放在小木架上，用接种铲取蚕豆大小放在栽培种培养基中间，一瓶原种可扩生产种40瓶，按此法作完所有的培养基。 3、培养:栽培种接种后，移入培养室中培养，温度25℃，12小时后，菌种定植在培养基上，2-3天后，接种块上可以看到白色纤细的菌丝在萌发，这时保持室内干燥卫生，空气相对湿度保持70%以下每天检查一次，发现感染，要及时清理出去。7天以后，瓶面菌丝向下伸3-4厘米，菌丝变的粗短，似羽毛状，香灰菌丝逐渐增粗，出现蓝色，草绿色和黑褐色的细纹，接种块逐渐变成珠形扭结团，由于菌丝不断增多增粗，瓶内温度也不断增高，因此要把瓶子散开，间隔2厘米，通风降温，每4小时通风一次，时间30分钟，温度保持22℃左右，湿度70%以下，每2天检查一次，发现感染者，要及时清理。 7-12天菌丝向下延伸5-6厘米，12-15天出现白色颗粒，出现白色水珠红色黄色，15-18天菌丝接近到底有浓白芽孢出现，并逐渐扭结，18-20天后出现子实体原基，继而出现子实体，黄红水珠变浓，随着培养时间的增长，子实体由紫色变为白色，并逐渐增大，证明栽培种已经培育成熟，即可用于生产上。 五、对生产种优劣的鉴别: 适龄菌种 春秋 15-28天 28-35天 A 夏季 适令13-25天 老令25-30天 菌龄鉴别 冬季 18一32天 32-40天 B适宜菌种质量鉴别:春秋两季正常情况下，15-18天菌丝尚未到底，菌丝发展边缘清晰，芽孢浓白有吐水现象(白水或黄水)18-23天，菌丝到底，有黄红水珠或浓黄红水珠出现，有紫色子实体出现。23-28天有浓黄红积水，子实体丰满，由紫色变为白色。 C老化菌种菌令的鉴别:春秋35天以后 夏季30天以后冬季40天以后 ①有重红或黑色积水(水胶质) 老化菌种质②培养基的香灰菌丝从底部向上逐渐消 D 失，有时出现微黄或黄色。 量的鉴别:③长有丰满子实体的银耳原基会明显和 培养基分开。 六、菌种的保藏: 一般都是遵照干燥低温冷冻减少氧气的宗旨。 A斜面低温保存法，是最简单最常用的方法，斜面培养母种成熟后，存放4-6℃低温保存2-3月转代一次，为减少水分蒸发，管口可用蜡封。此法适于所有食用菌。 B液体石蜡保存法，所有食用菌都可按此法保存，时间可达三年之久，每年转管一次，用此法不必放在冰箱内。石蜡也叫矿油，是一种导泻剂，医药商店都有出售，用前先放入三角瓶内，加上棉塞，高压灭菌2次后，用吸管吸入试管内高出斜面尖端1厘米，塞上棉塞，棉塞与管口平，再用石蜡封口，使用时，不必倒出石蜡，只要接种工具从斜面上取一小块菌丝，在无菌水中洗干净，即可接种。 七、杂菌感染的原因: 培养基消毒不彻底，菌种不纯混有杂菌，接种工作不认真，培养室消毒不彻底。接种人员消毒不彻底。 第六章 平菇菌种的制作和培育 平菇菌种的培育，也包括母种的分离，原种扩大生产种扩大培养三个环节。 一、母种的分离: 平菇母种分离有两种:一是孢子发芽培养法，另一种是组织分离法，孢子发芽培养法,是用平菇孢子进行繁殖的，也叫有性繁殖，通过孢子有性过程培养成的翡丝，是经过双亲结合具有双重遗传性，生活力强，质量好，产量高。 组织分离法是平菇子实体上分割某一组织，然后进行培养繁殖从而获得的菌丝，这种方法称无性繁殖，用这种方法培养出来的菌丝，生活力较弱，种性容易简便，菌丝发育也快，适用快速生产。 (一)配方与制作:配方: ①马铃薯200克 琼脂20克 葡萄糖20克水1000毫升 ②黄豆粉40克葡萄糖20克 琼脂20克水1000毫升 作法与银耳试管培养基一样，消毒灭菌也相同。 (二)种菇的选择:优质的平菇菌种，来源于优良的种菇选的时时一般在12月上旬或一月上中旬的第一、二批菇中挑选,因为这时气温适宜,菌丝生活力强，平菇生长健壮，能正常成熟，种菇应从菌丝生长健壮，无杂菌，无病虫害，出菇均匀，平菇长势好的菌床选取，挑选的对象是菌伞厚，菇形园洁白，菌柄粗壮的单生菇，插上标 签，经常观察。到种菇快要成熟时，用小镜子观察，将成熟还没有开伞的，菌膜薄而拉的紧采下来，采收要适时，过早过晚都不行，过早，种菇未成熟，孢子不易落下或萌发，若过迟，菌膜已破裂，菌褶外露，容易污染杂菌，用酒精消毒时，也会杀死孢子。因此要正确掌握种菇的成熟度。及时采收，以保证质量。 (三)采收和培养孢子:种菇采集后，切去带泥的根部，用清水洗净，放入接种箱内，浸在75%的酒精中消毒一分钟，然后再在盛有无菌水的烧杯中洗2-3遍，用纱布把菇体表面吸干，迅速地把种菇插入孢子收集器的三角架上，并在纱布上倒入少量的无菌水，以满足种菇开伞落孢子时所需的湿度。然后用纱布将整个孢子收集器包好，放在恒温下(20-22℃)培养两天左右即可落下孢子。采集孢子时要把孢子收集器移人接种箱内，同时把培养基试管，5毫升注射器和接种工具，一起放入接种箱内。进行汽化消毒。然后进行操作，轻轻摇动培养器，使孢子均匀分布水中，斜放片刻，稍沉淀，用针头吸取下层孢子液2-3毫升，再吸无水菌2-3毫升，把孢子进一步稀释，接着把培养基试管棉基轻轻拔松，把针头从试管壁处插入轻按针筒，注射1-2滴孢子液。顺培养基试管流入斜面，注射后，塞上棉塞，放入23-25℃恒温下培养，并经常检查，发现杂菌感染要立即拿出，一般培养9-12天后，就能看见散发的菌丝。 (四)分离和培养母种: 平菇孢子萌发后，可从绿豆大小菌丝中挑选出菌丝浓壮整齐白色，生势强的单个菌落移植到另外的试管中间，挑孢子时，培养基要挑的薄，否则接种块发黄衰老。接种后的试管放在20-22℃下培养，温度逐渐降低，才能促使菌丝健壮，当菌丝长到蚕豆大小时，温度降到14-16℃，菌丝长到斜面的一半时，温度下降到12-14℃经过逐渐降温，培养出来的母种，菌丝粗短、洁白、整齐，生活力强。当菌丝快要长满斜面时，就挑选生长最优良的，移殖到新的试管中，每支试管可接30-50支，一般扩接2-3次。 在培养期间，培养室一定要空气新鲜，空气相对湿度70%以下为宜。 (五)组织分离法: 选取肥厚，菌柄短而粗，无病虫害的种菇，在无菌箱内，用75%的酒精进行表面消毒后，用消过毒的小刀在菌盖中央纵切开一条缝，用手掰开，用接种针在菌柄和菌盖的交接处，取豆粒大小的菌丝体组织，接人试管内，放入20 -25℃的温度下培养，一般培养20天后，菌丝布满整个培养基表面，即可用于扩大培养。 二、原种扩大培养: 1、配方: 棉籽壳 100斤 木屑 100斤 玉米芯 100斤 石膏粉 2斤 石膏粉 2.5斤 石膏粉 2.5斤 A白糖1.3斤 B白糖1.3斤C白糖 1.3斤 磷酸二氢钾0.5斤 磷酸二氢钾0.5斤 磷酸二氢钾0.7斤 水 130斤 140斤 水140-150斤 2拌料:和银耳原种的拌料方法一样。 3、装瓶灭菌:培养料混合均匀后，马上装瓶，边装边压把瓶装满后，用一个上粗1.5厘米下粗1厘米的小木棒在瓶中间打一洞穴到瓶底或接近瓶底。塞上棉塞,进行灭菌，在1.4公斤/厘米2压力下保持2小时。然后取出培养基，冷却后备用。 4、接种:选出已培养成熟的平菇母种试管和接种工具和原种培养基一同放入接种箱内，进行汽化消毒30分钟后，进行工作，左手拿住母种试管，右手的母指、中指和食指夹住接种针，在酒精灯上方，把棉基拔掉，用接种针在斜面试管中央分开，再用接种针把菌丝和培养基分开，挑取放入培养基瓶中间，进行扩大培养，一支试管可扩原种1-2瓶。 5、培养:原种接好以后，放入20-22℃温度下培养，8-5天后把温度降到18-20℃待菌丝长到底后，即可作为生产种的扩大。在整个过程中，空气相对混度70%以下室内要保持干燥卫生。 三、生产种的培育 1、培养基的成分与制作 棉籽壳 100斤 锯木屑100斤 白糖 1.4斤 白糖 1. 4斤 石膏粉 2.5斤 石膏粉 2.5斤 硫酸镁0.25斤 硫酸镁0.2 5斤 磷酸二氢钾0.25斤 磷酸二氢钾0。25斤 制作方法与原种培养基相同，把料充分拌匀。 2、装瓶和灭菌:把料装入广口瓶或罐头瓶内，边装边压，中间打洞，上边用牛皮纸包上放入常压锅内进行灭菌，在100℃时保持10个小时即可达到灭菌的目的灭菌结束后，把培养基取出，放到消过毒的地板上进行冷却30℃以下就可以接种。 3 、接种:取灭好菌的培养基和成熟的原种，工具一齐放在接种箱内，进行气化消毒，30分钟后，开始工作，用接种铲，把上边的1厘米去掉，取蚕头大小一块接另一培养基中央，按此法作完所有的培养基。放入20-25℃的温度下培养，经20-30天，培养的菌丝布满整个培养基，即可用于生产上。 第七章 猴头菌种的制作与培养 一、母种(斜面试管) A培养基的制作:马铃薯200克葡萄糖20克琼脂20克木屑500克(阔叶树)麦皮250克水1000毫升先把木屑500克麦皮250克放入干净的钢精锅内加水1000毫升，煮沸30分钟用8层纱布过滤取汁，滤汁加水1000毫升把马铃薯去皮挖芽眼切片放入锅内煮沸约20分钟再用4层纱布过滤取汁，补水到1000毫升，再将葡萄糖琼脂加入加热，待其全部溶化，趁热分装试管内每管装量为管的一，每七支捆成一捆，用牛皮纸包好，放于 锅内灭菌，在压力上升到1.4公斤/厘米2时,保持30分钟，出锅后摆成斜面。冷却后，将斜面放置25-30℃的条件下培养1-2天，检查是否有红、绿、黄、黑色出现,有重复灭菌，无即可接种。 B菌种的分离: 1、组织分离法:首先选择球大，七、八成熟，颜色米黄色，用无菌刀刮去猴刺，放入无菌箱，用75%酒精进行表面消毒，然后将子实体撕成两半，用灭过菌的镊子或接种针挑取球心组织一小块(麦粒大小)迅速放入科面培养基的中央塞上棉塞。 2、孢子分离法:在接种箱内，用接种针挑取1-2根猴毛，贴在试管内斜面上方的瓶壁上，切勿触及培养基，然后塞上棉塞。 注意:接种箱使用前要严格消毒灭菌，在开紫外线灯的同时，还要用米高锰酸钾8克，甲醛每米*10毫升混合汽化，80分钟后开始工作，工作前用75%的酒精擦手，工具要在火焰上方烤。菌种分离后，放于22-25℃的温度下培养3-4天，有白色菌丝长出，发现杂菌，及时清理，菌丝布满全管即是成熟(大约15-18天)。 无论用扩大母种和原种均要幼令的菌种，即菌丝尚未长满斜面生长处于高峰期的菌种。 二、原种培育: 原料配方:木屑玉米芯或棉籽壳100斤 麦皮10斤石膏粉1斤 白糖1斤 加水130斤。 拌料后装入罐头瓶内，每瓶大约装干料四两，用薄膜包严扎紧，进行灭菌100℃时保持8-10小时冷却后即可接种一只试管母种可接原种5-10瓶(把试管母种分割成5-10块)每瓶挑入一块，放入25℃的条件培养20-25天左右，菌丝即可长到底。即告成熟再按原种培育法，即可获得栽培种每瓶原种可扩接50-60瓶生产种。 第八章 黑木耳的制种与培养 一、母种(斜面试管) A、培养基的制作: ①同第四章 ②麦皮 100克 蔗糖 20克 硫酸镁 3克 琼脂 20克 水1000毫升 制法:称取新鲜麦皮100克，加水煮沸20分钟，用6层纱布过滤取汁，加入剪碎琼脂，用文火煮至琼脂全部溶化后，再加水至足量，并加入蔗糖和硫酸镁，充分搅拌均匀后，用6层纱布再过滤一次，趁热分装于试管中，装量为试管长度的一，塞好棉塞。每十支绑成一捆，用牛皮纸包扎棉塞端。放于高压锅内灭菌,在1.1公斤/厘米2压力下保持30分钟，出锅后摆成斜面，冷却凝固后，将斜面放置25-30℃的条件下培养1-2天。检查是否有黄、绿、黑、红颜色出现。有，重复灭菌;无，即可用于接种。 B、菌种的分离: 1、组织分离法:选择耳片舒展、肉质肥厚，耳大的一朵木耳，(在七、八成熟时采下)，置入接种箱内，先用75%酒精泡1分钟，然后分别在无菌水里洗2-3遍，再用无菌纱布吸干表面上的无菌水，用剪刀剪取黄豆大的耳片与斜面培养基的中间，放人24-26℃温度进行扩大培养。 2、孢子分离法:在接种箱内，把消毒后的种耳同银耳。悬挂法用钢钩挂入装有灭好菌具有3毫米深的培养基的三角瓶内，塞上棉塞，放入23-25℃温度下培养1-2天左右，在种耳表面上看到有白色，糊状的孢子。再在无菌箱内把钢钩和种耳去掉，在22-25℃温度下，培养5-7天后，用接种针在接种箱内，挑取一点放入斜面培养基中间，进行扩大培养。 C母种培养: 菌种分离后，放于23-25℃的温度下，培养3-4天可以看到有白色菌丝长出，发现 红、绿、黑、黄 及时 陶 汰。随后菌丝逐渐增加，一般15-18天左右，菌丝即可布满整个培养基表面。再马上转入移管培养，进一步提纯，一般经过2-3次提纯，即可用于原种扩接。 二、原种扩大培养; 1、培养基制取: 成份:棉籽壳或木屑100斤 石膏粉 2.5斤 白糖 1.3斤 硫酸镁 0.2 5斤 120-140斤 制作:称取木屑或棉籽壳、石膏粉适量使之混合均匀,然后把白糖、硫酸镁用开水化开，记下数量，再称去凉水数量(总水减开水数)使整个混合水充分混合均匀，倒入干培养料中，搅拌均匀。 2、装瓶、灭菌: 培养料拌好后，马上装入750毫升的广口瓶中，边装边压，装满后在瓶中间打一个洞穴，到底或接近到底，然后用牛皮纸或棉塞把口封好，放入高压灭菌锅进行高温消毒,在1.4公斤/厘米*压力下，保持2小时，取出培养基放在消好毒的地板上，使之冷却。 3、接种:选择已培养成熟的黑木耳母种试管和接种工具，连同已灭菌原种培养基一起移入接种箱内进行汽化消毒30分钟。用接种针挑取斜面培养基的菌丝(可少带琼脂)与培养基表面，塞上棉塞，放入24-26℃温度下培养。每支试管母种可接1-2瓶原种。 4、培养:原种接好后，放入24-26℃温度下，培养2-8天后，在接种块看到有白色菌丝在萌发;7天后，菌丝从菌种表面下伸2-3厘米，这时要经常检查发现杂菌感染及时清除，保持室内空气新鲜，空气相对湿度在70%以下。一般经20-30天恒温培养菌丝布满整个培养料，即可用于扩大生产种。 三、生产种扩大: 1、培养基成份: 棉籽壳或锯木屑100斤 白糖 1。4斤 石膏粉 2.7斤0 硫酸镁 0.3斤 磷酸二氢钾 0.3斤 120-140斤 制法与原种相同。 2、装瓶灭菌: 培养基拌好后，可以装入罐头瓶中，装好后在瓶中间也打洞穴，用牛皮纸或塑料薄膜把口扎好，放入常压灭菌锅内进行高温消毒，在100℃温度下保持10个小时，然后取出培养基，放入消好毒的地板上，冷却后备用。 3、接种、培养:把黑木耳原种、接种工具、已灭菌的生产种、培养基移入接种箱内，汽化消毒30-40分钟。用接种铲在菌种表面轻刮1厘米，然后在酒精灯火焰区用接种铲取蚕豆大小的菌种，放入培养基中间。用此法把瓶内菌种全部接完。移入24-26℃温度下培养，一般20-30天菌丝全部到底，(培养方法同原种培养)即可用于扩大生产。每瓶原种可扩接50-60瓶生产种。 |
|
|
