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细胞蜡块技术开展，可提高浆膜腔积液细胞诊断的准确率，弥补传统细胞学细胞量少、厚薄不均匀、缺乏组织形态结构、无法做免疫组化鉴别来源等缺陷。如：细胞块结合免疫组织化学检测、胸腔积液细胞块技术、可明显增加细胞密度并展现细胞细微形态结构，能很好解决这一难题。同时，根据细胞学形态，结合免疫组化标记，可对肿瘤来源的确定、肿瘤分类和靶分子的活性分析提供有用信息，尤其适用于肿瘤晚期难以取得活检标本的患者，必要时还可用细胞蜡块行分子病理检测，为肿瘤的靶向治疗提供依据。  图1 常用固定剂  细胞蜡块制作注意事项 1. 固定剂的选择：10%中性福尔马林; 2. 蜡块质量关键：白膜层的富集; 3. 血性样本重点在于富集白膜层，物理分离白膜层与红细胞，而不再破红，如破红需在固定后; 4. 注意包埋面。 ·应用·   图8 细胞块的制作步骤 图为新鲜胸水，离心后新鲜细胞块及制作后的石蜡细胞块。  图9 肺腺癌细胞免疫细胞化学染色结果(×400) 图A、B为NapsinA及TTF1阳性染色结果。  图10 细胞淋巴瘤免疫细胞化学染色结果(×400) 图A、B为CD20及CyclinD1阳性染色结果。 凝块和刮擦方法： 可以藉由细针抽吸方式吸取样本置于载玻片上以获得细胞蜡块。此方式易使样品干燥/凝结; 将材料从载玻片上刮下并用拭镜纸包裹，置于包埋盒中，加入中性缓冲福尔马林后于病理学实验室进行组织处理。 02 BBC细胞块固定方法 使用细针抽取1 ml BBC细胞蜡块固定液冲洗非涂层试管样品，将试管倒置在适当的滤纸上，待流体排出后，将纸张刮掉一个小区域。然后于组织病理学实验室中进行常规样本处理。 03 血浆凝血酶细胞块制备 这是最常用的细胞蜡块制作方法。通过添加离心细胞悬浮沉淀物制备细胞蜡块。将细胞物质浸入血浆和凝血酶凝块中（图1）。将20ml样品加入到falcon管中，并以1650rpm离心10分钟。离心后，去除上清液。沉淀物中加入0.5ml血浆和两滴3％曙红水溶液并振荡混合。接下来，添加0.25-0.5ml重新组成的凝血酶，并快速搅拌溶液，凝块将在30-60秒内形成。将凝块置于含有福尔马林的包埋盒中。然后在组织病理学实验室中进行常规处理样本。  图1. 血浆凝血酶细胞块制备 04 火棉胶袋细胞蜡块制作程序 该方法将适当细胞液在火棉胶袋中进行更充分的细胞蜡块制备（图2和3）。 火棉胶袋管的制备：将适量火胶棉试剂倒入15毫升玻璃管，让火棉胶在管中放置10-15分钟，将火棉胶倒回试剂瓶中，倾倒时振荡管子，将试管倒置在试管架中，使其保持约30分钟直至干燥。干燥后，用蒸馏水填充管子。如果袋子不够干燥，管子看起来不透明，袋子即不能使用，应该丢弃，在使用前去除蒸馏水。火棉胶袋可存放长达一周。 火棉胶袋中细胞蜡块的制备：使用分注器将样本移到火棉布袋中。将火棉胶袋试管2500rpm离心10分钟。小心吸去上清液。使用镊子，将胶棉袋的边缘装配在管子的唇缘。使用镊子将袋子从管子中取出，然后在颗粒上方系上棉线，用剪刀剪掉多余的胶棉袋和绳子，将剩余的袋子放入组织包埋盒中，并将包埋盒子放入装有10％中性缓冲福尔马林的样品杯中，进行组织病理实验室常规处理样本。  图2. 火棉胶袋细胞蜡块制作  图3. 火棉胶袋细胞蜡块制作 05 Shandon Cytoblock方法 该技术是藉由手动制备细胞蜡块产品，使用带有包埋盒和试剂的试剂盒，将包埋盒置于中性缓冲福尔马林中进行组织病理实验室常规样本处理，通过细胞离心机浓缩细胞而制成。 该技术取代了耗时且昂贵的琼脂和凝血酶技术，并且需要无磷固定剂，例如Zinc Formal-Fixx，Formal-Fixx或Glyo-Fixx（福尔马林替代品），或省略马林固定步骤在处理机上处理的样本。也可以在快速活检程序上操作。 06 HistoGel方法 该技术优先用于单独散布的细胞学样本，该方案包括浓缩细胞步骤且轻易切取细胞蜡块表面。该技术可常用于宫颈ThinPreps细胞蜡块制备，且易取得分散的异常个体细胞。 将样品以3000rpm离心5分钟，倒出上清液，沉淀物留在管中，HistoGel（HG）通过在微波以中等功率熔化5至15秒而液化，足够的HG来覆盖沉积物（约0.5ml）并与沉淀物混合使HG固化（室温下2到3分钟或使用冷却块时更快），由管壁加入10％中性福尔马林剂将固化的HG沉淀物从管底部移出，并置于包埋盒的滤纸中进行组织病理学实验室常规处理样本，切取石蜡块时应小心，因组织碎片可能正好在蜡块表面。 07 组织凝固物凝块法 该方法在细针抽吸针尖端的内腔形成凝块。然后将凝块直接转移到福尔马林中进行固定，这样可防止诊断样本丢失。使用组织凝块法制备细胞蜡块，利用21号/ 22号抽血空针，抽取样本，而不是使用注射器将材料排到盐水中制备蜡块。 当样本离开针尖时，将其收集到预切片的滤纸上，针尖以圆周运动方式引导形成锥形组织和血液混合物凝结。将凝块在滤纸上稍微风干，确保凝固物是固体且细胞元素不会分散在液体介质。 将样品包裹在薄纸中并放入包埋盒子和福尔马林容器中，然后在组织病理实验室中进行常规样本处理。 08 福尔马林或酒精蒸气法 使用福尔马林或酒精烟雾固定样本。该方法不需要额外的设备和试剂，材料是从细针抽吸中排出，在通用样本容器内部形成小凝块，翻转盖子，将一张薄纸球推入容器底部，将约2ml福尔马林加入容器中并浸入薄纸中。如果使用酒精，则将两个异丙醇拭子放置容器的底部。 将容器置于室温并倒置至少6小时，这时样品已经被福尔马林或酒精蒸气固定并变成固体，加入福尔马林将其盖子取下以打破样本和盖子之间的吸力。样本放入包埋盒中，一旦从盖子上取下，就需加入福尔马林，然后在组织病理实验室中进行常规样本处理。 09 用于细胞颗粒或组织碎片的细胞块技术 （使用百分比95酒精）。这种常用的方法使用酒精离心样品，该样本已预先固定于酒精溶液中。 将50 mL的患者样品倒入标记的试管中，存放等分（如有必要）进行辅助测试，用固定剂（95％酒精）或溶解剂（例如CytoLyt）样本持续离心10分钟（2500转/分钟）。倒出上清液彻底震荡涡旋样本（确定是否需要）。 第二次离心以溶解血液量多或硬化/致密细胞颗粒样本。添加等分试样95％酒精与样本，调匀再次离心。完全倒出酒精。此时，根据细胞颗粒的大小，择最合适的方法。如果是细胞蜡块颗粒非常小和/或沉积物很少或不能很好地包埋，则使用替代技术，如HistoGel或琼脂。使用刮刀从锥形管中取出细胞沉淀，宽度须适当，放入组织包埋盒中，于组织包埋盒底部放入海绵，固化良好的细胞颗粒物没有必要使用太大的海绵。 将适当大小的拭镜纸放在蓝色的海绵上，将细胞蜡块置于拭镜纸上，以包埋盒为中心，取第二张拭镜纸以45度角放置在细胞蜡块的顶部，再于第二张拭镜纸顶部放置第二块海绵，中间有一个孔，牢固地将包埋盒卡入到位，并将包埋盒放入福尔马林中，然后在组织病理实验室中进行常规样本处理。  图5. 用于细胞颗粒或组织碎片的细胞块技术 - 方法1 参考文献 1. 张丽华,王雪晴, 王国庆,等.细胞蜡块在晚期腺癌诊断和肺腺癌个体化治疗中的应用价值[J]. 临床与实验病理学杂志,2014,30(2):166-170. 2. KimbrellHZ, Gustafson K S, Huang M, et al. Subclassification of nonsmall cell lung cancer by cytologic sampling: a logical approach with selective use of immunocytochemistry[J]. ActaCytol, 2012, 56(4):419-424． 3. 罗丽花, 张婉仪, 肖靖华. 细胞块联合免疫组化在胸腔积液诊断中的应用[J]. 临床与临床与实验病理学杂志,2015,31(8):904-907. 4. 王双双,孙怡,赵苏苏, 等. 胸水细胞蜡块在晚期肿瘤诊断及肺腺癌EGFR/ALK/ROS1检测中的应用[J].临床与病理杂志,2020,40(5):1159-1163. |
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