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今天小编分享荧光素标记牛血清蛋白BSA,一起看看吧: 制备过程：
称取FIIC 及HSA ,分别溶解于(BS(pH 9.60)中,搅拌,将FITC溶液缓慢滴入HSA溶液,避光反应5 h ,其间用0. 1 molL-1碳酸钠溶液维持反应的pH在9.0～9.5之间。反应毕,反应液对PBS透析、过Sephadex G50层析柱LKB仪检测蛋白(流速0.5 ml min')。收集LKB记录仪上DY流出峰及柱上DY荧光带所共同对应的流出液,紫外法测定流出液中蛋白含量(入=280 nm)及荧光素含量,以标准曲线法定量,按公式"计算产物分子中 FrIC 与HSA 结合的摩尔比F ^/P)。FIC-HSA标记物制成冻干制品,分装,0℃保存。 由图谱可知,FITC的入ex = 500 nm ,入em = 520 nm;标记后FITC-HSA的入cx = 512 nm ,入em = 528 nm ,zd激发波长与发射波长均发生红移,使荧光的stokes位移有所降低。为了减少蛋白分子的散射干扰,增大 stokes位移,可选取扫描光谱上主峰两侧的某一波长进行测定。由图2可见,500 nm处FITC-HSA的激发光谱基本无干扰,故选用500 nm 作为激发波长,发射波长选取530 nm ,对系列浓度的FITC-HSA进行测定,FITC-HSA浓度与荧光强度之间具有良好的线性关系(r =0.9991)。说明选定的激发与发射波长可行。 荧光素FITC呈现明亮的黄绿色荧光。其量子产率高,荧光寿命长,有较好的光稳定性和低温度系数,广用于杂交探针、Edman降解蛋白质测序及抗体的标记。 相关内容： 花菁染料CY7标记氨基CAS:1650635-41-8 NOTA-NHS-ester酯化大环螯合剂 水溶性荧光染料Sulfo-Cy5 COOH DBCO-NHS蛋白点击试剂 温馨提示：rx仅用于科研，不能用于人体，小编RL2023.2 |
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