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随着我国检验技术的发展，生化试剂已成为化学试剂的一大类。目前，我国共有诊断试剂生产企业400多家，共生产商品2000多种 。现阶段由于各厂家的生产规模、技术水平和产品质量参差不齐，且生化试剂受热、受潮、受光后，试剂中的某些组分易分解、失活，于是造成生化类试剂保存期较短，储存条件也比较苛刻。然而，基层医院由于业务量较小，试剂开瓶后往往需要较长时间才能使用完。为了分析试剂在开瓶后放置在全自动生化分析仪中的时间长短对检测结果的影响[1]，本文搜索了相关文献资料对部分生化体外诊断试剂开瓶稳定性研究，旨在在对生化试剂的临床使用提供必要的参考。 1.总蛋白试剂盒（TP） 张力心的研究探讨对检测结采的影响，为总蛋白试剂的临床使用提供必要的参考。试剂前7d的检测结果基本无变化;一周后，检测结果随时间的增加开始逐渐减小;到21d时，检测结果的相对偏差达到约10%的临界点,说明该TP试剂的开瓶有效期为21d。分析原因，由于 TP试剂盒采用双缩脲反应原理，蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构类似的肽键，碱性条件下，双缩脲可与Cu生成紫色的络合物，NaOH在反应中的作用为营造碱性的反应环境。当试剂开瓶后置于生化仪后，空气中的 CO,会不断溶入试剂，中和其中的 NaOH，使试剂的 pH 值下降，从而影响紫色络合物的生成、导致检测结果的降低[1]。2.丙氨酸氨基转移酶试剂盒 张力心的研究探讨对检测结采的影响，为丙氨酸氨基转移酶试剂的临床使用提供必要的参考。试剂开瓶21d后，检测结果无变化，相对偏差较小，说明开瓶时间对试剂检测结果的正确度基本无影响。但将放置21d后的试剂进行线性范围检验时发现，该试剂盒的线性上限由 800 U/L 下降至 300 U/L，线性范围变小。分析原因，可能是由于试剂中的 NADH组分的保存温度为-20℃，易被空气中的氧气氧化，从而导致底物浓度不足，线性范围变小[1]。张力心的研究探讨对检测结采的影响，为肌酐检测试剂的临床使用提供必要的参考。试剂盒的检测结果随开瓶时间的增加而逐渐变大，相对偏差在 15d时接近 10% 的临界点。分析原因，该肌酐检测试剂盒采用苦味酸法，在碱性条件下，肌酐与苦味酸生成橘红色的苦味酸-肌酐复合物，NaOH 在反应中的作用为提供碱性的反应环境，使血清样本中的肌酐和其它干扰物质与苦味酸的反应速度不同，从而准确的测定肌酐。当试剂开瓶后置于生化仪后，空气中的 CO, 与试剂中的 NaOH 反应，使试剂的抗干扰能力下降，测试结果为肌酐与干扰物浓度之和，因此试剂盒放置时间越长。检测结果偏大越明显[1]。 施琛的研究探讨对酶法二氧化碳试剂盒进行临床使用开瓶后三种不同定标方式进行评价。二氧化碳定标后的开瓶稳定期为6d，但若进行每日两点定标或每日一点定标，可连续使用20d，且质控良好。由此可见，酶法但试剂二氧化碳在临床使用时可采用每日两点定标或每日一点定标进行定标，延长试剂的使用周期，保证临床结果的可可靠性[2]。刘冰等人的研究探讨验证试剂生产商提供的二氧化碳酶法试剂稳定性与校准周期的真实性，以保证检测结果的准确性。：二氧化碳试剂在开瓶后，测定结果会有下降的趋势，而不同厂家的试剂这种下降趋势有明显差异。A公司试剂在开瓶30 d后，测定值下降在10％左右，而H公司试剂在开瓶10 d后测定偏差就超出10％的的范围。说明A公司试剂开瓶稳定性与说明书标示值相符，为30 d，H公司试剂开瓶稳定性与说明书标示值有差异，仅为10 d。而两者标示的校准周期均为7 d，有参考意义。在实际工作中，应根据本实验室条件即检测系统来确定校准周期。A公司二氧化碳试剂开瓶稳定性可达30 d，校准周期在未更换试剂批号的情况下，可在标示的时间基础上适当延长；而H公司二氧化碳试剂开瓶稳定性仅为10 d，与标示的30 d相差较大，校准频率应比A公司试剂高。说明不同厂家试剂间的开瓶稳定性存在很大的差异，因此，实验室应在自身条件下，对商品试剂盒标示的开瓶稳定性和校准周期进行验证，并做好室内质控，以保证为临床提供准确可靠的检验结果[3]。段爱军，段爱华的研究探讨研究碱性磷酸酶(alka1ine phosphatase，ALP)试剂开瓶后的稳定性，为实验室合理购买试剂包规格提供依据。厂商说明书指出ALP开瓶后2～8℃可保存14 d。本研究结果发现，试剂开瓶2 d内样品测量结果差异无统计学意义，随着样品开瓶时间的延长，测量结果显著下降，可能与试剂暴露空气中的时间不同、实验室环境温湿度不同有关。ALP试剂为碱性，长时间暴露于空气中时易吸收二氧化碳而降低试剂pH值，导致测定结果偏低。IFCC ALP参考测量程序明确要求每天分析前应对测量试剂进行脱气，避免PH值发生改变、影响测量结果[4]。7.马怀安，等人的研究探讨观察冰冻混合血清六种酶（ALP、ALT、AST、GGT、CK、LDH）在室温（22~25℃）与冷藏（2~8℃）条件下的短期稳定性。该研究对六种酶同时采用直线作为经验模型， 即斜率b应为0 或者接近0 的方法观察，结果发现，ALP、CK、GGT、ALT、AST五种酶无论采用经验模型法，还是采用双因素方差分析统计学方法观察结果具有一致性， 即GGT与AST最稳定，在室温与冷藏状态下30d内稳定；ALT酶最不稳定， 无论在室温还是冷藏状态下， ALT活性在8 h 内是稳定性可以接受， 1 2 h 后活性逐渐衰减；22-25 ℃ 贮存条件下， 30d 内混合血清ALP值是稳定的；2 -8 ℃ 贮存条件下，在7d 内ALP 是稳定的， 第12d之后， A L P 酶活性衰减明显；2 2 - 2 5 ℃ 贮存条件下， C K 在1 d 内酶活性是稳定的，1d之后酶活性逐渐衰减；2- 8 ℃ 贮存条件下， 30d 内混合血清C K 酶活性是稳定的。对LDH 根据双因素方差分析统计学方法， 在2 2 ~ 2 5℃ 贮存条件下， 30d 内酶活性稳定与经验模型法观察结果不太一致， 应扩大时间点， 继续观察。2 ~8 ℃ 贮存条件下， 双因素方差分析统计学方法观察因P 值恰好在0.05附近，采用经验模型法观察可能更加直观有效[5]。国内一些学者[1-3]对试剂开瓶后对检测结果的影响进行了研究，为基层工作改进检验质量提供了有益的参考。然而，上述研究时间跨度长且未考虑校准品、样品以及校准品、样品分装等因素，在一定程度上影响对试剂质量的客观评价。有报道[5]同步设计研究酶学物质的短期稳定性，在重复性条件下评价不同储存时间的血清酶活力，取得理想的效果。我们尝试引入评价试剂开瓶后的质量，同步设计测量在重复I生条件下进行，减少了时间点上的离散性，从而提高了稳定性研究的“分辨率”[4]。 体外诊断试剂稳定性是指产品在生产企业规定的条件下储存，在规定的时间内保持其性能特性的能力，主要包括实时稳定性、运输稳定性、开瓶稳定 性、冻融稳定性、机载稳定性、复溶稳定性（冻干产品）等。稳定性作为评价体外诊断试剂保持产品性能的重要指标,对产品的研发、生产、运输、保存和使用等环节具有重要意义,通过稳定性研究可以评价和调整产品组方、工艺、包装材料等，确定产品的 保存期限和开封后保存期限,明确产品的运输、储存 和开封后的保存条件，并可在产品保存期限和储存 条件等发生变更时，验证变更后的产品稳定性[6]。 当试剂中含有碱性物质时，长时间放置于生化分析仪中，空气中的二氧化碳会逐渐消耗掉试剂中的碱性成分，从而影响检测结果的正确度。因此对此类试剂，每次使用之后应该盖紧瓶盖，避免接触空气。由于生化分析仪的试剂盘的温度范围一般为5℃~15℃，因此，当试剂中含有NADH之类的对温度敏感的组分时，试剂使用后应放置在2℃到8℃冰箱中储存，并尽快使用。否则试剂在检测高值样本时，结果的正确度将不能保证。试剂开瓶7d左右，检测前应重新校准，以提高检测结果的正确度[1]。 总之，基层医院应根据工作量购买合适人份的试剂盒，以保证试剂在稳定期内用完，减少了不必要的浪费，保证了结果的准确性与精密度。此外，一些基层单位为了避免浪费，将旧试剂加入新试剂，采取这种方法应慎重，虽然校准通过，质控品结果在控，但其测量结果仍存在不足，因试剂质量发生改变将影响测量方法的线性[4]。参考文献： [1]张力心.浅议生化类体外诊断试剂开瓶稳定性[J].中国卫生标准管理,2016,7(1):135-136. [2]施琛.酶法测定二氧化碳试剂开瓶稳定性的调查.[J].中国医药指南,2013年4月第11卷,第10期. [3]刘冰,黄华翠,陈静.二氧化碳酶法试剂开瓶稳定性与校准周期的验证.[J].基层医学论坛,2013年5月第17卷13期. [4]段爱军,段爱华.碱性磷酸酶试剂开瓶的稳定性研究.[J].南通大学学报（医学版）2015:35(3). [5]马怀安,王清涛,徐静,贾慧敏,王金英,童清.六种冰冻混合血清酶学的短期同步稳定性研究.[J]中国医药导刊,2009年第11卷第4期. [6]仉琪,曹学芬,李耀华.体外诊断试剂稳定性研究的影响因素和评价要求.[J].中国生物制品学杂志2022年5月第35卷第5期.
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