（团队论文）苗期草莓炭疽病病原菌多样性及对甲基硫菌灵的抗性检测

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由炭疽菌属真菌（Colletotrichum spp.）引起的草莓炭疽病是草莓生产中一种毁灭性的真菌病害，它在整个草莓生长周期中均可进行为害，尤其是在草莓苗期和移栽期。在适宜的温湿度环境条件中，草莓苗受Colletotrichum spp.侵染，可以发生50-80%的死苗率。

1 苗期草莓炭疽病的典型症状

Colletotrichum spp.可以侵染草莓植株的所有组织。Colletotrichum spp.侵染草莓苗，在叶柄上形成褐色的、纺锤形的凹陷状病斑，叶柄呈现不健康的深红色；在根茎部形式红褐色的溃疡病斑；逐渐引起茎基腐；严重时，整个草莓植株呈萎蔫状，最后死亡。

图1 苗期草莓炭疽病的田间典型症状

2 苗期草莓炭疽病菌的分子鉴定

从150株草莓病样中分离获得具有炭疽菌典型菌落形态特征的真菌共105株,联合acting (ACT),calmodulin (CAL),chitin synthase (CHS-1), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)等4个基因和 internal transcribed spacer (ITS)进行系统发育树分析，105株Colletotrichum spp.都属于胶孢炭疽复合种C. gloeosporioides complex，其中5个菌株属于C. aenigma，37个菌株属于C. fructicola，7个菌株属于C. gloeosporioides，56个菌株属于C. siamense。

图2 苗期草莓炭疽病病原菌系统发育树分析

3 病原菌形态特征

从田间草莓病苗上分离到的4类Colletotrichum spp.在PDA（土豆葡萄糖琼脂培养基）平板上的菌落形态相似，4类炭疽菌在PDA上的菌落呈灰色、橄榄绿或白色，可形成橘黄色的分生孢子堆，分生孢子无色透明、无隔膜，呈圆柱状，两端钝圆或一端稍尖，可见1个油球。

图3 4类Colletotrichum spp.的菌落形态和显微结构

4  对甲基硫菌灵的抗性及LAMP法检测

传统区分剂量法测定105株Colletotrichum spp.中99个菌株对甲基硫菌灵表现为高水平抗性，2个菌株表现为中等水平抗性，4个菌株表现为敏感；基于β-Tubulin基因上198位密码子突变 [密码子GAG→GCG，氨基酸glutamate(E)→alanine(A) ]设计的LAMP检测体系（E198A-LAMP），检测到95个菌株为阳性菌株，10个菌株为阴性菌株。经测序验证， 95个阳性菌株在β-Tubulin基因的198位密码子由GAG突变成GCG，导致氨基酸突变；10个阴性菌株中，6个菌株β-Tubulin基因的200位密码子由TTC突变成TAC，氨基酸从phenylalanine(F) 变成tyrosine(Y)，另外4个菌株的β-Tubulin基因未发生密码子突变。

 表1 苗期草莓炭疽病菌对甲基硫菌灵的抗性监测及分子机制.

图4 LAMP法检测苗期草莓炭疽病对甲基硫菌灵的抗性水平和抗性分子机制

总结

草莓炭疽病是草莓苗圃中一种重要的真菌病害，主要由C. aenigma,C. fructicola,C. gloeosporioides,C. siamense 4种炭疽菌引起，它们在形态特征上较为相似。苗期草莓炭疽病对甲基硫菌灵的抗性水平高且频率高，建议田间不再使用甲基硫菌灵、多菌灵等苯并咪唑类杀菌剂防治炭疽病，可考虑使用苯醚甲环唑、戊唑醇等其他类别杀菌剂防治该病害。

文章题目：Diversity and Resistance to Thiophanate-Methyl of Colletotrichum spp. in Strawberry Nursery and the Development of Rapid Detection Using LAMP Method

作者：吴鉴艳，胡硕丹，叶博洋，胡小然，肖文斐，余红，张传清