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案例：一个兔单克隆中和抗体的诞生 兔源抗体以其高亲和力和多样性而熟知，这使其成为检测分析中研究试剂的有用来源。过去，兔单克隆抗体是使用杂交瘤技术生产；然而，目前是由更强大的单B细胞培养和分子克隆方法驱动。
（单B细胞兔单抗开发流程） 对于单B细胞抗体开发的理解，我们以一个客户开发项目为案例来给大家展示参考看看：基于单B细胞抗体开发平台，研发一个阻断型中和兔单抗的过程（由于隐私原因，靶标A相关详细信息不作披露）。 第一阶段：抗原制备 该项目抗原靶标A为分泌型胞外蛋白，有明确的受体蛋白B，考虑后期对于重组蛋白A的活性质控测试，以及后续中和抗体的阻断检测筛选需要，所以选择真核哺乳细胞重组表达系统，同时分别表达靶标A蛋白和其受体蛋白B，并基于Elisa进行互作检测验证。
（靶标A及受体B蛋白SDS-PAGE&Elisa互作检测数据） 第二阶段：免疫及阳性B细胞筛选 通过第一阶段获得的靶标A抗原重组蛋白对兔子进行免疫，包括免疫途径、佐剂和加强免疫策略。在第三、四次免疫后，将对兔血清进行分析（血清将基于抗原ELISA检测进行评估），以确定应答动物。由确定的阳性应答兔子提供PBMC和脾脏来进行B细胞的差异化筛选富集和培养，然后对培养上清进行Elisa检测验证，确定阳性B细胞克隆，再进行竞争性Elisa检测筛选中和抗体克隆。
（靶标A阳性B细胞Elisa检测及中和抗体竞争Elisa筛选部分数据） 第三阶段：阳性单B细胞抗体序列及结构分析 针对二阶段单B细胞培养上清检测结果，挑选25个优选中和抗体克隆完成抗体基因序列扩增，同时测序进行分析。
（靶标A的25个阳性抗体可变区序列框架） 基于获取的抗体可变区序列信息，构建抗体结构模型，并预测抗体和靶标A的结合模型，基于靶标A和其受体B的互作模型，并综合阶段3的检测数据，选择合适克隆。
（左：靶标A与其受体B互作模型；右：阳性克隆抗体与靶标A的结合模型） 第四阶段：抗体重组表达、鉴定 从25个优选中和抗体克隆中挑选1个克隆进行重组表达，及二次中和检测验证。
（靶标A的中和抗体重组表达检测验证） 至此，一个针对靶标A的中和型重组兔单抗便完成开发及交付。 |
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