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酒精使用障碍（Alcohol use disorder, AUD）是一种慢性脑部疾病，其特征是消极、负性的情感状态（负性情绪）、过量的酒精摄入。目前对于AUD共病负性情绪患者的治疗手段及策略十分有限。 溶血磷脂酸（LPA）是甘油磷脂信号分子的重要成员，主要由溶血磷脂酰胆碱（LPC）在溶血磷脂酶D的水解作用下生成，并通过G蛋白偶联受体LPA1-6发挥重要的调控作用；LPA-LPA1信号在中脑边缘系统和背侧间脑传导系统中表达丰富，调节兴奋/抑制性神经递质的动态平衡。 外侧缰核（Lateral habenula，LHb）可调节多巴胺能和血清素能系统，是连接前脑和中脑单胺能神经核团的一个重要枢纽。LHb核团内的谷氨酸传递系统功能增加与AUD共病负性情绪至关重要。 基于以上研究背景，中山大学医学院付饶副教授团队于2023年4月14日在Neuropsychopharmacology杂志发文，揭示了外侧缰核中的LPA-LPA1信号参与调节与AUD相关的负性情绪状态。
该研究建立了间歇性进入两瓶选择性范式饮酒（Intermittent access to 20% ethanol two-bottle free choice drinking, IA2BC）模式的Long-Evans大鼠模型，慢性饮酒8周后对大鼠进行48小时急性酒精戒断（Post-EtOH）；通过一系列行为学测试明确LE大鼠表现出明显的焦虑及抑郁样改变；使用免疫荧光染色、分子生物学技术明确了与皮层和海马组织相比，LHb内LPA的主要生成酶-ATX（Enpp2）的表达量明显增高，提示LHb是LPA的主要来源核团；ATX信号（ATX与NeuN、vGlut2共标）主要定位于LHb谷氨酸能神经元的细胞膜，且ATX的表达在Post-EtOH大鼠LHb中增多，在细胞膜上的分布从点状变为片状，表达范围增大；明确Post-EtOH大鼠LHb中，LPA代谢紊乱，表现为ATX/Enpp2的蛋白/mRNA水平显著增加，水解酶LPPR4/PRG-1水平显著降低；LPA1和LPA3受体较Naïve大鼠表达增多。
通过免疫组化技术，发现Post-EtOH大鼠LHb神经元强表达c-Fos，且c-Fos与ATX的共标率可达65.25%±3.50%；分子生物学实验发现：PKC激酶γ亚型在LHb中表达丰富，且在Post-EtOH大鼠LHb表达进一步升高；同时测量AMPAR受体亚基组分的mRNA水平，得到GluA1增多、GluA2减少，GluA1/GluA2比值增高，提示神经元内钙信号传导增强；western blotting结果显示Post-EtOH大鼠LHb内的βCaMKII-AMPAR信号分子表达增强，GluA1亚基ser831位点发生磷酸化调控。内源性免疫共沉淀技术，发现LPA1与p-GluA1ser831存在相互作用，但LPA3未与p-GluA1ser831发生互作，提示在LHb内LPA1受体与βCaMKII-AMPAR信号间存在相互作用。皮尔森相关性分析得到LPA1的表达与大鼠在高架十字迷宫（EPM）测试中进入开放臂的次数呈显著负相关，PKC-γ的表达与大鼠在基线期的酒精摄入呈显著正相关；提示LPA1和PKC-γ在AUD共病负性情绪中的重要地位。
最后，采用脑立体定位手术，LHb原位微注射LPA-LPA1/3受体拮抗剂或PKC-γ抑制剂，均能下调PKC-γ、βCaMKII、AMPAR信号分子的表达水平，减少酒精大鼠的负性情绪行为和神经元的兴奋性，降低酒精消耗量。LHb原位注射外源性18:1 LPA可以激活LPA-LPA1/3受体，上调PKC-γ、βCaMKII、AMPAR信号分子的表达水平，增强神经元的兴奋性，诱导Naive大鼠产生AUD共病负性情绪表型。但是外源性LPA不能加重Post-EtOH大鼠的负性情绪及酒精消耗量。 总之，LHb内“LPA-LPA1-PKC-γ/βCaMKII-AMPAR-GluA1ser831磷酸化-神经元兴奋性增强”信号分子机制，在AUD共病负性情绪发病机制中和病理进程中有着重要的作用；LPA1和PKC-γ可作为防治AUD共病负性情绪疾病的分子靶标。
 https://www./articles/s41386-023-01582-8 |
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