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中医药信息（ Information on Traditional Chinese Medicine)
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201 8 年 7 月第 &5 卷第 4 期
Vol.&5 ， N o .4 ， Jul.2018
龙牙肝泰肢嚢抗肝纤维化的药效学研究
张玉昆 1 ，冯月男 1 ，卞敬琦 1 ，迟文成 2 ，隋雨桐2，
姜广坤!，牛雯颖!，姜庆辉"，李陆军2!
(1.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨15_;2.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑 龙 江 哈 尔 滨 150040)
摘 要 ：目 的 ：探 讨 龙 牙 肝 泰 胶 囊 对 肝 纤 维 化 大 鼠 的 影 响 及 其 作 用 机 制 。 方 法 ：采 用 5 0 % 的 CC l油 剂 连
续 灌 胃 给 药 的 造 模 方 法 制 备 肝 纤 维 化 大 鼠 模 型 ，共 8 周 ，每 周 2 次 。 同 时 进 行 药 物 干 预 8 周 ，每 周 5 次 ，
末 次 给 药 2 h 后 ，乙 醚 麻 醉 ，腹 主 动 脉 取 血 ，测 定 血 清 中 谷 草 转 氨 酶 （ AST) 、谷 丙 转 氨 酶 （ ALT) 、透 明 质
酸 （ HA) 、层 黏 连 蛋 白 （ LN) 、 W 型 胶 原 （ C ) ) 、 m 型 前 胶 原 （ PC $ $ 水 平 ；取 肝 脏 组 织 部 分 液 氮 冷 冻
( -70°C保 存 ），测 定 TIMP-1 &MMP- 1 水 平 ，另 一 部 分 10% 福 尔 马 林 固 定 进 行 病 理 学 检 查 。 结 果 ：与 模
型 组 比 较 ，龙 牙 肝 泰 胶 囊 各 剂 量 组 血 清 中 AST、 ALT水 平 均 极 显 著 性 降 低 （！ < 0.01) 。 龙 牙 肝 泰 胶 囊 高
剂 量 组 能 极 显 著 性 降 低 肝 纤 维 化 大 鼠 血 清 中 HA、 LN、 C ) 水 平 （！ < 0. 01 ) ，显 著 性 降 低 PC $ 水 平 （！ <
0. 05) ; 龙 牙 肝 泰 胶 囊 中 剂 量 组 能 极 显 著 性 降 低 肝 纤 维 化 大 鼠 血 清 中 HA 水 平 （！ <0. 01) ; 龙 牙 肝 泰 胶
囊 低 剂 量 组 能 显 著 性 降 低 肝 纤 维 化 大 鼠 血 清 中 HA水 平 （！ < 0. 05) 。 龙 牙 肝 泰 胶 囊 高 剂 量 组 肝 纤 维 化
大 鼠 肝 组 织 中 TIMP - 1 水 平 显 著 性 降 低 （！ <0. 05) 。 龙 牙 肝 泰 胶 囊 高 剂 量 组 肝 纤 维 化 大 鼠 肝 组 织 中
MMP - 1 水 平 极 显 著 性 升 高 （！ < 0. 01 ) 。 病 理 检 查 表 明 ，龙 牙 肝 泰 胶 囊 高 剂 量 组 大 鼠 肝 细 胞 排 列 整 齐 ，
界 限 清 晰 ，细 胞 核 呈 圆 形 ，无 胞 质 融 合 ，无 肝 细 胞 坏 死 变 性 。 结 论 : 龙 牙 肝 泰 胶 囊 对 肝 纤 维 化 大 鼠 具 有 较
好 的 治 疗 作 用 。
关 键 词 ：龙 牙 肝 泰 胶 囊 ; 肝 纤 维 化 ；纤 维 化 标 志 物 ；药 效 学
中图分类号 ： R285.5 文献标识码 :A 文章编号 = 1002 - 2406 (2018 $04 - 0052 - 03
doi: 10.19656// cnki. 1002 -2406.180115
肝纤维化是诸多致病因素导致肝细胞发生坏死、
凋亡及炎症反应时，肝内纤维结缔组织异常增生与沉
积的病理过程，是慢性肝病重要的病理特征，也是进一
步向肝纤维化发展的主要中间环节[1]。当前研究结
果认为，肝炎病毒、血吸虫感染、酒精损伤、药物代谢、
胆汁淤积、化学中毒、代谢障碍等均可引起肝纤维化。
大量研究表明，肝星状细胞（ HSC)的活化与细胞外基
质（ ECM)代谢失衡是肝纤维化的重要机制，已经证实
ECM来 源 于 HSC， HSC活化后分泌大量 ECM，造成
ECM代谢失衡，进而形成肝纤维化。
龙牙偬木又名辽东偬木，为五加科植物龙牙偬木
基金项目 ： 黑龙江省应用技术研究与开发计划项目（ No. GC12 C104 )#全
国中药特色技术传承人才培训项目 （ 2015 )#黑龙江中医药大
学校基金 “ 面上项目 ” （ No. 201739)
作者简介 :张玉昆 （ 1985 - ) , 男 ，实验师，主要研究方向：中药药理学。
通讯作者 :李陆军！（ 1971 - ) , 男 ，中药学硕士，主要研究方向：中药制
剂的工艺设计及质量标准。
收稿日期 =2017 - 07 -0 4
修回日期 :2017 -0 8 -0 1
[> % = e= a (Miq . )Seem .]的干燥根皮及莲皮[2]。龙
牙肝泰胶囊是将龙牙偬木根、茎皮粉碎成粗粉，加
9 0 % 乙醇加热回流提取等工艺制成的胶囊剂，龙牙肝
泰胶囊作为纯中药制剂，上市近 1 5 年，患者群累计超
过 5 0 0 万人。对患者群用药效果进行统计分析发现，
龙牙肝泰胶囊对病毒性肝损伤、酒精性肝损伤有显著
的保肝护肝作用，对脂肪肝、肝纤维化、肝腹水等病症
与其他药物配合使用有明显的治疗改善作用[3-4]。本
实验旨在观察肝纤维化模型大鼠血清中谷草转氨酶
(A S T )、谷丙转氨酶( A L T )、透明质酸（ H A )、层黏连蛋
白（ L N )、）型胶原（ C ) ) 、$ 型前胶原（ P C $ ) 、肝组
织病理组织学检查的改变以及肝脏组织中金属蛋白酶
抑制剂（ TIM P - 1 )、基质金属蛋白酶（ M M P - 1 )水平，
探讨龙牙肝泰胶囊抗肝纤维化的作用机制，为临床用
药提供指导。
1 材料与仪器
1 . 1 药品与试剂
葵花护肝片（阳性对照药物，黑龙江葵花药业股
份有限公司）#龙牙肝泰胶囊（实验受试药物，黑龙江
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久久药业有限责任公司）# AST''ALT测定试剂盒（南京
建成生物工程研究所）；大鼠血清2人、6(、〇 和 ？(]$
酶联免疫试剂盒（南京安培化工科技有限公司）#
TIMP - 1、MMP - 1 试剂盒（上海森雄科技实业有限公
司）#四氯化碳( C C l，分析纯，沈阳化学试剂厂）。
1.2 实验动物
SD雄性大鼠，体质量160 ~ 180 g，室温饲养，自由
进食。由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心（黑
龙江中医药大学 GLP)提供，动物合格证编号 ：SCXK
(黑$200804001。
1.3 实验仪器
分析天平（梅特勒）#魅力2000全自动生化分析
仪;博塞全自动酶标仪 ;moticcm 3000显微摄影成像系
统（美国 motic公司 ） ；Image - pro plus6. 0 病理图像分
析系统。
2 实验方法
2.1实验分组
取 SD大鼠6 0 只，按体质量随机分为龙牙肝泰胶
囊高、中、低剂量组，正常对照组（空白组），纤维化组
(模型组），葵花护肝片对照组（阳对组），每 组 10只，
共6 组。
2 . 2 模型建立与给药方案
每日上午8 时左右，除空白组外，其余各组动物，
按 1 ml/kg体质量灌胃给予油剂 C C l，将 CC l与橄榄
油等比例混合配成50%的油剂 C C l，每周灌胃2 次，
每周称重，按体质量调整给药剂量;空白组按1 ml/kg
体质量灌胃给予橄榄油，持续8 周。每日下午15时左
右给予药物干预，每周5 次，持续8 周。各组给药剂量
分另1 J为:低剂量组42 mg/kg，中剂量组84 mg/kg，高剂
量组168 mg/kg，阳对组545 mg/kg;模型组与空白组
按 10 ml/kg 量给 生 。
2.3指标检测
末次给药2 h 后，乙醚麻醉，腹主动脉取血，
3 000 r/min离心制备血清，测定血清中谷草转氨酶
(AST)、谷丙转氨酶( ALT)、透明质酸（ HA)、层黏连蛋
白（ LN) 、）型 胶 原 （ C) ) 、$ 型前胶原( PC$ ) 水平，取
肝脏组织部分液氮冷冻（- 7 0 °C 保存），测定 TIM P - 1 、
M M P - 1 水平，另 一 部分用 1 0 % 福尔马林固定进行病
学 。
2 . 4 统计学处理
采用 S P S S 1 6 . 0 软件对各组数据结果进行 f 检验，
结果用均值加减标准差的形式表示， ！ $ 0 . 0 5 表示具
有统计学差异。
3 结果
3 . 1 龙牙肝泰胶囊对肝纤维化大鼠肝功能的影响
实验结果表明，模型组与空白组比较，大鼠血清中
A S T 、 A L T 水平极显著性升高（ ！ < 0 . 0 1 );龙牙肝泰胶
囊各剂量组、阳对组与模型组比较，血清中 A S T 、 A L T
水平均极显著性降低( ！ < 0 . 0 1 )。结果见表 1 。
表 1 龙 牙 肝 泰 胶 囊 对 肝 纤 维 化 大 鼠 血 清 中 A S T &
A L T 水 平 的 影 响 （（± .
组 & 剂量（ m g/kg) AST(U /L) ALT( U /L)
空白组 10 - 109. 82 ± 1 6 .53 33.44 ± 11.43
组 9 - 243.24 ±24. 64 m 92.39 ±15.58 m
组 9 545 164.53 ±19.55"" 68.65 ±9.25""
高剂量组 10 42 142.18 ±12.31"" 56.24 ±10.64""
中剂量组 9 84 162.94 ±18.92"" 69.46 ±9.73""
低剂量组 9 166 177.20 ±19.22"" 81.11 ±11.27""
注:与模型组比较，!<0. 01;与空白组比较，AA! <0.01
3. 2 龙牙肝泰胶囊对大鼠血清中肝纤维化标志物的
影响
实验结果表明，模型组与空白组比较，血清中肝纤
维化标志物中 H A 、 L N 、 C ) 、 P C $ 水平均极显著性升
高（ ！ < 0 . 0 1 )。与模型组比较，高剂量组、阳对组，能
极显著性降低肝纤维化大鼠血清中 H A 、 L N 、 C ) 水平
(! < 0 . 0 1 )，显著性降低 P C $ 水平( ！ < 0 . 0 5 );中剂量
组能极显著性降低肝纤维化大鼠血清中 H A 水平，显
著性降低 L N 、 C ) 水平（ ！ < 0 . 0 5 )，对 P C $ 水平有降
低的趋势，但差异无统计学意义( ！ > 0 . 0 5 );低剂量组
能显著性降低肝纤维化大鼠血清中 H A 水 平 （ ！ <
0 . 0 5 )，对 L N 、 C ) 、 P C $ 水平有降低趋势，但差异无统
计学 。 结 2 。
表 2 龙 牙 肝 泰 胶 囊 对 肝 纤 维 化 大 鼠 血 清 中 H A 、 L N 、 C ) 、 P C $ y z S { | ( ( ± .
组 n 剂量（ m g/kg) HA( ng/m l) LN ( ng/ ml) C D ( ng/m l) PC $ ( ng/m l)
空白组 10 - 8 8 .3 2 ± 2 5 .8 2 119.34 ± 19.36 5 5 .7 2 ± 1 3 .0 3 19.71 ± 2 .1 6
组 9 - 191.68 ±47. 42 aa 182.69 ±38.42 aa 105.24 ± 2 3 .5 9 AA 30.04 ±4. 38 aa
组 9 545 103.39 ±28.11"" 125.92 ±25.76"" 61.38 ±10.24"" 25.86 ± 3.57"
量组 10 42 9 9 .8 2 ± 2 4 .5 1 "" 127.29 ±24.39"" 58.76 ±11.02"" 24.36 ± 3.64"
中 量组 9 84 124.36 ±37.33"" 145.61 ±34.02" 78.05 ±15.38" 26.41 ± 3 .8 4
低 量组 9 166 146.34 ±40.21" 148.60 ±30.73 86.83 ± 22.50 26.45 ± 3 .5 0
注:与模型组比较，! < 0 .0 1 ， ! < 0. 0 5 ;与空白组比较， AA! < 0.01
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3 . 3 龙牙肝泰胶囊对肝纤维化大鼠肝组织中
T IM P - 1 、 M M P - 1 水平的影口向
实验结果表明， 组空白组比较，大鼠肝脏组
织中 T IM P - 1 水平显著性升高（！ < 0 . 0 5 );阳对组、高
剂量组与模型组比较，大鼠肝组织中 T IM P - 1 水平显
著 低 （！ < 0 . 0 5 $;中、低量组大鼠肝组织中
T I M P - 1 有降低的趋势，但无统计学意义。模型
组与空白组比较，大鼠肝脏组织中 M M P - 1 水平极显
著 低(！ < 0 . 0 1 ); 组 组比较，肝纤维化
大鼠肝组织中 M M P - 1 水平显著性升高（！ < 0 . 0 5 $;
量 组比较，肝纤维化大鼠肝组织中 M M P - 1
极显著 （！ < 0 . 0 1 $;中、低量组与模型组
比较，肝纤维化大鼠肝组织中 M M P - 1 有 趋
势， 无统计学意义（！ > 0 . 0 5 )。结 3 。
表 3 龙牙肝泰胶囊对肝纤维化大鼠肝脏组织中
TIM P - 1 &MMP - 1 水 平 的 影 响 （ （ ± .
组 & 剂量（ mg/Mg) TIMP - 1 ( n / m l ) MMP - 1 ( n / m l )
空白组 10 - 45.56 ±12.38 11.82 ± 4.05
组 9 - 58.62 ±11.84 a 6.07 ±3.56 aa
组 9 545 46.39 ±10.50" 11.53 ±5.15"
高剂量组 10 42 47.34 ±9.49" 1 3 .1 8 ± 5 .6 3 ""
中剂量组 9 84 51.57 ±12.08 8.42 ± 3.7 9
低剂量组 9 166 56.74 ±13.89 7.08 ±3.01
注 ：与模型组比较， < 0 .0 1 ， < 0 .0 5 ; 与空白组比较， aa! <
0 .0 1 ， '' ！ < 0 .05
3 . 4 龙牙肝泰胶囊对肝纤维化大鼠肝脏组织病理学
的影响结果
空白组:细胞排列整齐，界限清晰，细胞核正常，无
胞质融合，无纤维化，无炎性细胞，见图 1 。
组:细胞排列紊乱，细胞 细胞核界限不清
晰，细胞核固缩，胞 融 合 ，呈现脂 ，局部出现纤
维化，呈弥 病变，散在许多血细胞及炎细胞，见
图 2 。
阳对组:细胞排列基本整齐，细胞核成圆形，肝细
胞无变性坏死，少见炎性细胞，见图 3 。
量组:细胞排列整齐， 晰，细胞核呈圆
形 ，无胞质融合，无肝细胞坏死变性，见图 4 。
中剂量组:细胞排列略有紊乱，胞 量融合，
胞浆呈疏松，见炎性细胞及变性细胞，见图 5 。
低剂量组:细胞排 齐， ，细胞核大多
呈圆形，局部纤维化及少量血细胞，见图 ； 。
图 1 空白组 H E染色图 (400 x ) 图 2 模型组 H E染色图 (400 x )
图 3 阳对组 H E染色图 ( 4 0 0 x ) 图 4 高剂量组 H E染色图 (400x)
图 5 中剂量组 H E染色图 (400 x ) 图 6 低剂量组 H E染色图 (400 x )
4 讨 论
肝纤维化是肝脏组织大量胶原沉着富集为特点的
病变，多数肝纤维化 中，都伴着肝细胞的 、
、坏死 等 病理改变[5]。 C C - 中所致肝纤维
化与临床肝纤维化形成的过程极为 ，主要包括过
氧化反应、肝组织酶的活化、炎症反应 等 。 反应均
引起细胞 ，肝细胞代谢 。病生理指标表现
为谷丙转氨酶( A L T )、谷草转氨酶（ A S T )水平的升高、
肝纤维化标志物 H A 、 L N 、 C ) 、 P C $ 。这
一 系 的改 肝星状细胞（ H S C )的化与细胞外
基质（ E C M )代谢 密 关。当 量 的 E C M 产生
时，会被金属蛋白酶抑制剂（ M M P )降解，同时基质金
属蛋白酶（ T I M P )又能抑制 M M P 的活性，所以， M M P
T I M P . 的 稳定是保护肝细胞正常的前
[6]。
龙牙肝泰胶囊内容物是龙牙偬木醇提物，主要成
是皂苷， 后的苷 齐墩 为主。研究发现，
龙牙偬 有抗炎、抗 、保肝、护 肝 药 理
m ]。 为 中 药 ，龙 肝 已在市场
销售 1 5 年，降酶保肝 显著，对肝纤维化、脂 肝 、
肝硬化疗效显著。本实 肝纤维化大 肝
功能、肝纤维化标志物、病 肝组织中
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中医药信息 （ Information on Traditional Chinese Medicine)
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M M P - 1 与 T I M P 等指标的系统性研究可以发现，龙牙
肝泰胶囊对肝纤维化大鼠有明显的治疗作用，其作用
机制可能与维持肝细胞的稳定性、降低肝细胞损伤、各
型胶原的累积、稳 定 H S C 的活化、使金属蛋白抑制剂
与基质金属蛋白酶处于动态平衡等相关。肝纤维化致
病因素与形成过程还尚未完全明确，故对龙牙肝泰胶
囊的药理作用与临床适用证的增加也有待进一步研究
。
参 考 文 献 ：
[ 1 ] 姚东升，孙明瑜，刘 平 ，等 ? 黄芪汤治疗肝纤维化的研究进展 [ J ] .
山西中医学院学报， 2012 ， 1 3 (3 ):1 4 6 -1 4 8 .
[ 2 ] 中国科学院 ? 中国植物志 [ M ] # 5 卷 ? 北京：中国科学出版社，
1979:325 -3 2 6 .
[ 3 ] 张彦文 . 龙 ^ 肝泰胶囊治疗非酒精性脂肪肝 ? 例的临床观察 [ J ] ? 中
医药信息， 2014,31 (1$:91 -9 2 .
[ 4 ] 张彦文 ?龙牙肝泰胶囊治疗中晚期肝癌临床疗效观察 [J ] ? 中医药
学报， 2013 ， 4 1 (3 ):1 5 6 - 157.
[ 5 ] 周程艳，艾凌艳，王美，等 ?杜仲多糖抗肝纤维化作用的实验研究 [J ].
中草药， 2011 ， 4 2 (2 ):3 2 4 -3 2 9 .
[ 6 ] 李紫琼，郑勇 .T IM P s和 M M Ps与肝纤维化研究进展 [ J ] . 实用肝
脏病杂志， 2007 ， 10 (5$:355 -3 5 8 .
[ 7 ] 张家鑫，田瑜，孙桂波，等.龙牙德木皂苷类成分及药理活性研究
进展 [ J ] . 中草药， 2 0 1 3 ,4 4 (6 ):7 7 0 -790?
[8 ] 王丽岩，肖洪彬，王鸣慧 . 辽东德木叶总皂苷抗急性肝损伤的实验
研究 [ J ] ? 中医药信息， 2 0 0 9 ,2 6 (2 ):2 9 -3 0 .
玉屏风散对支气管哮喘小鼠白细胞介素-10
和血管细胞黏附分子-1表达的影响
何 炜 ，冷 蓓 峥 ，揭志军
( 复旦大学附属上海市第五人民医院 ， 上 海 2 0 0 2 4 0 )
摘 要 ：目的 :建 立 气 道 变 态 反 应 性 小 鼠 模 型 ， 观 察 玉 屏 风 散 对 支 气 管 哮 喘 小 鼠 白 细 胞 介 素 - 1 0 (IL - 1 0 )和
血 管 细 胞 黏 附 分 子 - 1 (V C A M - 1 )表 达 的 影 响 ， 探 讨 玉 屏 风 散 对 哮 喘 的 治 疗 机 制 。 方 法 :4 0 只 B a l W / c
小 鼠 随 机 分 成 对 照 组 、 模 型 组 、 布 地 奈 德 组 和 玉 屏 风 散 组 。 应 用 O V A ( 卵 蛋 白 ） 诱 导 炎 症 模 型 。
R T - P C R 法 测 定 肺 组 织 V C A M - 1 和 I L - 1 0 的 m R N A 水 平 ， E L I S A 法 测 定 肺 泡 灌 洗 液 （ B A L F )的 I L - 1 0
水 平 。 结 果 :模 型 组 、 布 地 奈 德 组 和 玉 屏 风 散 组 的 I L - 1 0 m R N A 表 达 与 对 照 组 相 比 均 明 显 增 加 ， 有 显 著
性 差 异 （ ！ < 0 . 0 5 )。 玉 屏 风 组 ， 布 地 奈 德 组 V C A M - 1 m R N A 的 表 达 与 模 型 组 相 比 明 显 降 低 ， 有 显 著 性
差 异 （ ！ 〈 0 . 0 5 )。 玉 屏 风 散 组 B A L F 的 I L - 1 0 水 平 与 对 照 组 、 模 型 组 相 比 显 著 升 高 （ ！ < 0 . 0 5 )。 结 论 :
玉 屏 风 干 预 后 ， 支 气 管 哮 喘 模 型 小 鼠 I L - 1 0 水 平 升 高 ， 并 显 著 降 低 V C A M - 1 等 黏 附 分 子 含 量 ， 达 到 治
疗 哮 喘 的 目 的 。
关 键 词 ： 玉 屏 风 散 ''白 细 胞 介 素 - 1 0 ;血 管 细 胞 黏 附 分 子 - 1 ;支 气 管 哮 喘
中 图 分 类 号 ： R 2 8 5 . 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 ： 1 0 0 2 - 2 4 0 6 ( 2 0 1 8 ) 0 4 - 0 0 5 5 - 0 4
doi： 1 0 . 1 9 6 5 6 / j . c n k i. 1 0 0 2 - 2 4 0 6 . 1 8 0 1 1 6
$fect of Yupingfeng San on Expressions of IL -10 and VCAM - 1
in Mice with Bronchial Asthma
H E W e i , L E N G B e i z h e n g , J I E Z h i j u n
( The Fifth Peoples Hospital of Shanghai Affiliated to Fudan University， Shanghai 2 0 0 2 4 0 ， China )
Abstract ： O b je c tiv e ： T o e x p lo re th e th e r a p e u tic m e c h a n is m o f Y u p in g fe n g S a n o n a s th m a b y o b s e rv in g th e
e f e c t o f tliis fo r m u la o n IL - 1 0 a n d V C A M - 1 ( v a s c u la r c e ll a d h e s io n m o le c u le - 1 ) in m ic e w ith b r o n c h ia l
a s th m a . M e th o d s : 4 0 B a l b / c m ic e w e re ra n d o m ly d iv id e d in to th e b la n k c o n tro l g r o u p ， th e m o d e l g r o u p ，
基金项目 ： 闵行区卫生局基金（ No. 2010MW04)
作者简介 :何炜 （ 1973 - ) ，男 ，副主任医师，主要研究方向 :支气管哮喘，慢性阻塞性肺病。
收稿日期 ： 2017 - 0 9 -2 0
修回日期 ： 2 0 1 7 - 1 0 - 1 5
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