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产品介绍： 碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,以下简称AP)分子量140,000Da,在分子生物学和蛋白质研究中的主要应用是从DNA中去除5'-磷酸基团或作为免疫分析（如ELISA）的报告系统。在免疫分析测试中，酶通常与特定的一级或二级抗体结合，其活性用显色（或发光）底物检测。 本试剂盒可以帮助实验者快速实现AP与抗体的偶联。 基本原理： 本试剂盒利用抗体和AP上游离的伯氨基（-NH2），采用定向对接偶联技术将抗体分子与AP共价偶联，主要特点： ü 试剂盒组分齐全，操作简单，只要按照操作步骤进行便可得到高品质AP偶联抗体； ü 本试剂盒所配置的AP为高纯度，高活性酶，催化发光/显色效率更高； ü 本试剂采用定向偶联技术，AP酶和抗体都不会发生自连，保证偶联物的特异性和均一性； 试剂盒已经提供材料：
其他需要自备试剂材料： ² 待标记的生物分子； ² 移液器及吸头； ² 去离子水。 试剂盒储存 试剂盒抗体修饰试剂放在-20˚C，其余组分放在2-8℃可保存6个月以上。 试剂盒操作流程： 1.抗体的修饰 1）向抗体修饰试剂干粉中加入200ul DMSO,充分混匀; 2）取待标记抗体（纯度>90%），浓度调整到 2mg/ml左右为宜，按照每mg抗体加入 30μl 抗体修饰试剂溶液，轻轻混匀，在室温下避光搅拌反应 90分钟；【如果抗体量太少，抗体修饰试剂溶液加入量不少于0.5ul】 3）反应完毕后，将其转入30KMWCO超滤管，用标记缓冲液超滤5-10次（每次12000rpm 1min），每次管芯内液体体积不超过原体积1/4为宜，最后一次超滤完成，管芯内液体即为修饰的抗体。 2.活化AP与抗体偶联 1）将修饰抗体与活化AP溶液，按照质量比8:1比例（每1mg修饰抗体对应125ul活化AP溶液,）混合，室温避光反应1小时； 2）标记好的抗体分装，加入适当保护剂，-20℃保存备用。 注意事项： 1）本试剂盒中抗体修饰试剂和活化AP溶液为高活性试剂，请-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿冻存。 2）试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒，会使液体或干粉试剂粘到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理，以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。 3）抗体修饰试剂需现用现配，干粉溶解后不能长期保存； 4）使用本试剂盒标记抗体，其抗体特异性要高，纯度不低于90%，最好使用单克隆抗体，溶液环境不含游离氨基，最好为PBS溶液；标记前抗体需去除NaN3和BSA，抗体的透析、浓缩和浓度测定等操作都会造成抗体量的损失，因此标记前准备抗体时需根据具体情况考虑最适的抗体量； 5）由于抗体修饰后所带的基团容易被重新氧化，因此修饰后抗体需尽快与活化的AP进行偶联； 6）本试剂盒中的超滤管为特殊处理的，可有效避免酶失活和蛋白吸附损失，市面超滤管可能会对标记效率造成影响。 7）本试剂盒中部分试剂为高活性试剂，对皮肤和身体有一定的危害，请全程戴手套操作；DMSO属微毒类，对人体皮肤有渗透性，对眼有刺激作用，使用时避免与皮肤、眼睛和粘膜接触。 |
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