选用适当的培养基并在适当的培养条件下时以对样品中的活菌或菌落（如菌落形成单位)计数。水溶性或可在水中制成悬浮液的固体样品（如土样、面粉、奶粉
、糖），可以在称取样品后，加入无菌水配制成稀释液，并按以下介绍的方法计数;有些固体物质(包括一些食品，如奶酪、肉等)需要在无菌水中
浸泡后得到悬浮液，一般使用的稀释液包括蛋白胨水稀释液，蛋白胨盐稀释液和25%的Ringer氏溶液。在平皿中加入已知量的悬浮液或其稀
释液，倒入融化的琼脂。琼脂凝固置于温箱中培养后计数。应该选择平板菌落数小于300的平板计数。需要时可以采用双平行或三平行平板。下面
介绍关于液体样品的标准计数方法。对于不同的物质或产品，操作步骤有所不同。样品的混合在进一步检测前，须将样品充分混匀。对于液体样品，
如果瓶中的液体没有完全充满，可以在30cm的范围内振动瓶子25次混匀。如果样品的瓶子是满的，快速将瓶子翻转N次彻底混匀,然后倒出约
1/4的内容物，再按上述方法摇动25次。稀释液的制备(1)取一支lmL的吹吸移液管顶将移液管的尖部垂直插人样品液面下不到3cm的位
置，采用安全移液方式，吸取到lmL刻度后吹掉，反复10次。吸取lmL液体，移液管尖 贴住瓶颈，使管外壁的液体流下。将移液管置于第一
管稀释液中，移液管尖部靠在试管内壁，稀释液液面以下2?3cm处，让移液管中液体流出，移液管不能接触稀释液，将移液管静置使残余的液滴
全部流出，并用吹吸球轻轻吹出管内液体。用完的移液管放入 装有灭菌液的容器中^第一个试管标记为1/10或10-1.(2)取一只新的移
液管，放人第一个稀释度的试管中，吸取到约lmL的刻度后放出，反复吹吸10次使内容物混匀(或在手中转动试管）。试管的尖部不要低于液面
2?3cm。然后移取1mL稀释液到第二管稀释液中，如上所述，使移液管中液体流出。同样，如上步所述，移液管放入装有灭菌液的容器中。并
标记稀释试管为1/100或10-2。(3)取另一只新的吸管和稀释管，采用同样的方法稀释到1/1000或10-3.(4)根据预测样品
中可能存在的细菌数，采用相同的操作步骤可以进一步稀释到10-4、10-5等需要的稀释度。假定按多数细菌的体积大于l^m3计箅，则细
菌团的计数不可能大于1012/mL。腐败的肉类表面的细菌数约为lOVcm2，河水的细菌数约为104?106/mL。平板的制备(1)
取一支新的移液管，放人最高稀释度的试管中（如10-3)，吹吸10次后混匀稀释液,取lmL稀释液,移液管尖部接触试管壁放去多余的液体
，移人平皿中。移液管尖部接 触平板壁，静置知，使管壁的液体慢慢流下，并用吹吸球轻轻吹出管内液体c(2)使用同一支吸管从10-2稀释
度的试管中吸取lmL稀释液移取到平板中，注意 在移取前先吹吸液体3次清洗移液管内部并将稀释液混匀。(3)同样的方法从10-1和原液
中移取lmL液体到平皿中：(4)另外一种更快的方法是在稀释的同时移取溶液。即通过吹吸10次将液体混匀后，移取lmL液体到平皿中，然
后再移取lmL到另一个有稀释液的试管中。倒平板(1)每个平板中加入10mL融化的琼脂培养基并迅速往复摇动和转圈晃动5?l0s使培养
基与接种物充分混合。严格的操作方法是往复摇动5次，顺时针转动5次，与第一次运动方向垂直摇动5次，逆时针转动5次。用这种方法能保证样
品充分分散，操作时注意不要让琼脂溅到平皿的盖上。注意：从稀释样品至倒培养基的时间不能超过30min(—般为15?30min)，因为
长时间放置可能会造成稀释液中悬浮的细菌死亡、增长或菌落的分离。(2)待平板冷却,翻转后置于适当的温度培养。注意平皿的标识必须正确。
花点时间研究如何标识平皿很有必要。使用代码标识可以避免混淆，但过多的书写标记会浪费时间，可以使用不同颜色的记号笔以减少目录。为了尽
快达到温度平衡,在培养箱中叠放的平板不能超过六个。注意：在整个操作过程中要避免污染。移液管使用前快速通过酒精灯外焰灼烧；样品瓶或试
管在拿掉塞子及重新盖上前，都要将口部在火焰上灼烧；平皿盖开口尽量小，只要能倒人培养基即可；倒琼脂培养基前，将瓶壁或试管壁擦干；拿掉塞子后（或在再次盖上瓶塞之前)要灼烧瓶颈部。 |
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