食品微生物检验培养皿灭菌

【2】培养皿干热灭菌的温度是多少啊？

1）http://bbs.foodmate.net/thread-309654-1-1.html

    160-170℃，2个小时即可搞定！依据吗，很简单，一则教科书上都是这么弄的，二则实践证明也是如此。

  3＃  我知道按照 中国药品检验标准操作规范2005版的是160°干热灭菌2小时，如果250°，30分钟行不?

   我们都是干热灭菌的，160-170度就够拉，你用得着开那么高吗，250啊，太高拉 

    GB 27405-2008 实验室质量控制规范--食品微生物检测.pdf 

  8＃我们实验室的器皿类都是用的干热灭菌法做的，一般的是在180度二个小时灭菌的。我们做过验证的效果还蛮好的。

12＃不管多少度，建议：

1.校准干燥箱

2.做灭菌效果验证，用枯草芽孢杆菌黑色变种（Bacillus subtilis var. niger）ATCC 9372菌片即可。

附消毒技术规范相关章节

灭菌与消毒器械消毒功效鉴定试验

2.1.5.1  干热灭菌柜

2.5.1.1.1  目的

    测定干热灭菌柜(下简称灭菌柜)对细菌芽孢的杀灭效果，以验证其灭菌性能是否符合设计规定。

2.1.5.1.2  试验器材

    (1) 枯草杆菌黑色变种( ATCC 9372 )芽孢菌片。染菌载体( 10mm × 10mm，以不锈钢片或玻片为代表，必要时可随灭菌对象，增用或改用其他载体)。菌片上细菌芽孢在 160℃±2℃ 条件下，存活时间 ≥3.9 min，杀灭时间 ≤19 min，D 值为 1.3min～1.9min。

    (2) 营养肉汤培养基(见：附 A )。

    (3) 活菌培养计数所需器材(见 2.1.1.2 )。

    (4) 使用说明书中规定灭菌柜可以处理的物品( 装填灭菌柜，使达满载要求 )。

    (5) 多点温度测定仪。

2.1.5.1.3  柜内温度测定

    将温度测定仪的多个探头，分别放于灭菌柜的各层内、中、外不同部位。在柜内摆放模拟的常规处理物品，至使用说明书规定灭菌时的最高量(满载)。关闭柜门，开启电源，按灭菌柜设计程序进行灭菌。每 3 min，记录各点的温度。试验重复 3 次，计算各点不同时间的平均温度，并在试验报告中以图表列出。

2.1.5.1.4  灭菌试验

    (1) 根据试验要求，制备枯草杆菌黑色变种芽孢悬液和芽孢样片。

    (2) 每次试验取 2 个菌片为一组，平放于无菌平皿内，勿重叠。加盖，分置于灭菌柜的各层，内、中、外不同部位。试验时，灭菌柜内除菌片样本外，还应满载以模拟的常规处理物品。

    (3) 关闭柜门，开启电源，按灭菌柜设计程序进行灭菌。灭菌完毕，取出平皿，将菌片取出接种于含 5.0ml 营养肉汤培养基试管中，置 37℃ 培养箱内作定性培养。72h 后观察结果。

    肉汤管混浊者表示有菌生长，判为阳性; 肉汤管澄清者表示无菌生长，继续培养至第 7d，若仍无菌生长，判为阴性。

    对难以判定的肉汤管，取其中 0.2ml 悬液接种营养琼脂平板，用灭菌 L 棒涂抹匀，置37℃ 培养箱中培养。48 h 后涂片染色，在显微镜下观察菌落形态，或进一步做其他试验，以判断生长者是否为试验菌。若有非试验菌污染，应查找原因重新进行试验。

    (4) 测试中，应同时设立定性和定量阳性对照组(菌片对照)与阴性对照组(培养基对照)。

(5) 定量阳性对照组，以同批试验用菌片放在室温下，待试验组灭菌接种后，立即将该菌片 2 片分别移入含 5.0mlPBS试管中，各振荡 80次洗涤。按 2.1.1.3 所示方法进行活菌培养计数。

    (6) 定性阳性对照组，以同批试验用菌片放在室温下，待试验组灭菌接种后，立即将试验菌片 2 片，分别接种于 5.0ml 营养肉汤培养基，放入培养箱中作定性培养，观察细菌生长情况。

(7) 阴性对照组，以空白样片 2 片，分别接种于 5.0ml 营养肉汤培养基，同时将未接种过的营养肉汤培养基放入培养箱中作定性培养，观察有无细菌生长。

    (8) 试验重复 5 次。

    (9) 在 5 次试验中，每次试验中阳性对照菌片的回收菌量均应达5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性阳性对照组，细菌生长良好；阴性对照应无菌生长。阳性或阴性对照若有不符合上述要求的结果，试验作废，重新进行。

2.1.5.1.5  评价规定

    (1) 在 3 次测定温度的试验中，各点平均温度均达设计要求。

(2) 在 5 次灭菌试验中，各次试验定量阳性对照的回收菌量均达 5×105cfu/片～5×106cfu/ 片；定性阳性对照组，细菌生长良好；阴性对照组样本应无菌生长。所有试验菌片均无细菌生长时，可判为干热灭菌合格。

2.1.5.1.6  注意事项

    (1) 干热灭菌效果检测，应使用枯草杆菌黑色变种芽孢，不得使用嗜热脂肪杆菌芽孢，因在干热条件下，前者对干热的抗力较后者为强。

    (2) 灭菌柜柜室容积和加热装置的变化，均可影响消毒效果，故在这方面的设计有所变动时，杀菌效果应重新测定。

    (3) 灭菌效果观察，样本检测稍有污染即可将灭菌成功的结果全部否定，故试验时必须注意防止环境的污染和严格遵守无菌操作技术规定。

    (4) 柜室内满载与非满载，结果差别较大，故正式试验时必须在满载条件下进行。

   16＃我看过的资料上说：干热灭菌160度 ， 2小时 ；  180度  1小时。为保险 我实际操作中是采用170度 2小时

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