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诊断病理学杂志 2009 年 2 月第16 卷第1 期 在显微镜下进行病理读片, 是病理医师工作中的重要内容之一。显微镜观察和记录的结果是临床诊断的科学依据。正确标准的使用显微镜, 观察和记录读片结果才具有科学性。众所周知, 显微镜的成像首先是由物镜对标本放大成像, 然后由目镜一次放大被人们肉眼观察到。所能呈现图像的视野大小是由目镜的视场数决定的。需要说明的是, 本篇所阐述的观察和记录, 仅限于通过目镜的显微镜观察和记录。不经目镜观察的其他光路采集记录图像, 如 CCD、数码相机、由软件操作采集图像等另述。 显微镜目镜的视场数( field number, FN) 不同, 镜下能看到的视野大小就不同, 不同的面积区域对镜下阳性率计数有影响, 我们应该了解目镜视数与视场面积的关系。视场数小能看到的视场面积就小, 反之, 视场数大则能看见的视场面积就大。 01 目镜视场数的标识 显微镜设计和生产具有国际化标准, 在显微镜的目镜上都会标识视场数, 如奥林巴斯 BX50 型显微镜, 目镜视场数22( 22 数值前的英文和数字标识是目镜分类名和倍率) 。 02 实际视场和计算公式 在标本平面上, 显微镜能够观察到的区域( 圆形区域) 叫做实际视场, 也称视野。用以下公式计算可得知面积大小。
一般显微镜产品, 都有其标准配置。如奥林巴斯显微镜BX51, 标准配置视场数 22 的目镜, 如果使用 40 物镜观察,其视场面积计算如下:
那么, 我们可以确定当前观察用显微镜的视场面积是0.24 mm² 需要说明, 虽然各显微镜生产厂家不同型号的显微镜有其标准配置, 但是, 我们只需要识别显微镜目镜上的标识就可以知道显微镜的视场面积。 03 物镜倍率 物镜是用于显微镜成像的重要光学部件。生物显微镜常用物镜倍率有 4X 、10X 、20X 、40X 和100X 。病理学计数常用的高倍物镜是指 40X 。 04 中间倍率 直接通过目镜观察无需考虑中间倍率。 中间倍率是指加在光路中的 CCD 接口、摄影目镜以及CCD 元件等的倍率。因为现在使用的显微镜大都是无限远成像系统, 附加有荧光观察、本差观察、微分干涉观察等, 元件不会改变倍率, 不需要考虑。 05 常用目镜下的视场面积 最常用目镜视场数是 22。各显微镜制造商相继设计生产有视场数是 25 的宽视场目镜, 视场数是 26.5 的超宽视场目镜。也有视场数是 18、20 的较小视场数的目镜。 笔者将常用目镜分别在高倍( 40 X) 物镜下观察时, 计算其面积如表1 所示, 方便显微镜使用者参考。 表 1 常用视场数目镜在 40 物镜下视场面积
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