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一、过滤 如果血清中出现大量的沉淀物，血清将很难过滤。一般说来，因为在血清生产时后已经经过100nm或者40nm的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养的血清。在实验室中没有必要再过滤处理血清，在大规模的细胞培养中往往将血清直接加到培养基中一起过滤。 我们在这里为大家列举了几条我们应该如何避免血清中产生沉淀？ 1.解冻时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一； 2.分装冻存时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡）； 3.切勿由-20℃直接至37℃水浴锅解冻，较大的温差，易造成蛋白质凝结而发生沉淀； 4.切勿将血清置于37℃过长时间，否则可能使之浑浊，其中一些不稳定的组分也会因此受到影响，最终降低血清的品质； 5.血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤； 6.若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且保持摇晃均匀。温度过高、时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 二、污染 磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起争端。研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定血清被污染了。并且当研究者将血清样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点，因此就更加确认是血清被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商确认，但终确定血清没有被污染而只是沉淀。 例如在胎牛血清中： 沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于胎牛血清自身中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在胎牛血清解冻后，也会存在于胎牛血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不会影响胎牛血清本身的质量。若执意相要去除这些絮状沉淀物，可以将胎牛血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。 此外：为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。 |
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