当我们选择到了适合的感受态细胞,我们又怎么使用转化它呢? 转化是指某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞DNA,而使它的基因型和表现型发生相应变化的现象。细菌细胞转化是非常常见且简单的分子实验,除了最传统的化学转化外,还有电穿孔转化的方法。 一、电转化 电转化原理十分简单,当电流穿过细胞的时候,会在细胞膜上形成临时的孔洞,那么携带负电的质粒DNA在这个电势场中会被移动,而后恰好穿过孔洞,进入细胞。这个过程和电泳类似,DNA分子移动来移动去,最后掉进了细胞里。 二、化学转化 正常的大肠杆菌细胞与CaCl2 溶液混合后,许许多多的Ca2+(钙离子)附着在细胞膜表面,带正电的钙离子们有助于引导和辅助带负电的DNA质粒与细胞膜结合。当质粒DNA穿膜进入细胞的时候,正电钙离子也很好的掩盖了DNA的负电性,使得通过憎水性磷脂层的过程更加容易。使质粒进入细胞的方法是短暂42°C的热击。 |
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