【原】图解流式 | 第9期. 流式荧光染料你知多少？

在之前的流式图解中，我们主要学习了流式数据的圈门分析逻辑，以及尝试解读文献中的流式图，以及两大通道（散色光通道和荧光通道），那么接下下的问题就是如何进行流式抗体的选择，你可能会说按照文献中的货号进行购买即可，但是试剂可能没有现货（需要3-4周的订货时间），可能你的实验同时需要检测其他一种或多种蛋白，则需要订购其他不同荧光染料的流式抗体确保没有重复的染料选择，这时候就需要你具备一定流式染料选择的能力，可以在现有条件下依旧能推动实验的进行，不受等待试剂到货的折磨（p.s相信很多同学都有类似的体验），本期主要举例来图解流式染料种类。

合成的有机物/有机小分子

合成的有机小分子类的染料主要是由不同的荧光物质，如罗丹明、花菁类等，以及其他新型合成的小分子荧光染料，且大多含有苯环或杂环并带有共轭双键，此类染料的特点，可依据化学原理改良其结构，开发多种染料产品用于流式检测。

蛋白

主要为来源于藻类和植物中的藻胆蛋白（PE/APC/PerCP）和多种颜色的荧光报告蛋白，如下表所示。

有机聚合物

Brilliant violet系列，是最为常见的有机聚合物类染料代表，如BV421、BV480、BV750等，是更加明亮的荧光，更适用于弱表达蛋白的检测。

半导体纳米

主要为Qdots（如Qdot705等），eFluor NC。

复合荧光染料

复合荧光染料主要是由供体和受体两种不同的荧光素分子构成。如PE-Cy5、PE-eFluor 610、PerCP-eFluor710等，其原理较为复杂，感兴趣的同学可以进一步了解利用荧光共振能量转移现象实现的流式抗体染料开发，此处不过多展开。除此之外，还包括上述提及的有机聚合物，如BV480、BV605等。

以上标红部分是最为常见的流式抗体染料，基本能满足1-3种应用流式技术检测的蛋白，我们也可以通过流式抗体公司如BD、Biolegend等官网进一步了解染料信息，如下图所示，为Biolegend公司提供的染料家族信息。至于如何选配荧光染料，则需要进一步根据其表达含量，实验目的（主要观察的蛋白或抗原类型）等决定，将在下期进一步图解染料的选择原则与技巧。