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今天小编整理并分享关于6个可以分离蛋白质的方法: 鸡卵白蛋白是一种常见的蛋白质，可以通过多种分离方法进行提取和纯化。以下是几种常用的鸡卵白蛋白分离方法： 1.沉淀法：这是最简单的方法之一，通过加入酸或碱来改变鸡卵白蛋白的电荷，使其沉淀或溶解。然后，通过离心或过滤等方法将蛋白质分离出来。这个方法适用于初步的分离，但通常不适用于高度纯化的要求。 2.凝胶过滤色谱：凝胶过滤色谱是一种基于分子大小的分离方法，通过将样品通过具有特定孔径的凝胶柱，较小的蛋白质分子会进入凝胶内部，而较大的鸡卵白蛋白分子会在柱外被排除。这可以用于分离不同大小的蛋白质。 3.离子交换色谱：离子交换色谱是一种基于蛋白质电荷的分离方法。鸡卵白蛋白是带负电荷的蛋白质，因此可以通过阳离子交换树脂分离。根据蛋白质的电荷和亲和性，可以使用不同的离子交换树脂来分离和纯化。 4.亲和层析：亲和层析是一种利用生物分子之间特定的亲和性相互作用来分离蛋白质的方法。对于鸡卵白蛋白，可以使用亲和树脂或分子来捕捉和纯化这种蛋白质。例如，可以使用亲和树脂，其表面上固定了鸡卵白蛋白的特定配体，如亲和树脂上的亮氨酸。 5.电泳：凝胶电泳和SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是分离和鉴定蛋白质的常用方法，它们可用于分离不同大小和电荷的蛋白质。通过电泳，可以将鸡卵白蛋白分离出来，并通过染色或Western印迹等方法进行检测和鉴定。 以鸡蛋清为原料,使用 Tris - HCl 缓冲液进行稀释,降低鸡蛋清黏度,增加可溶性蛋白质的溶出和提取率,以利于后续试验。采用60%硫酸铵进行盐析的方法获得卵白蛋白的粗提物,回收率达到18.02% , SDS -PAGE显示卵白蛋白为主要条带,可有效分离鸡蛋中卵白蛋白,操作过程简单、快捷、成本低。综合考虑卵白蛋白纯度和提取率,可采用60%饱和度的硫酸铵盐析分离卵白蛋白。 分离过程：
将静置蛋清4 ℃、10 000 r/ min离心10 min,取上清液,缓慢多次加人烘干研磨成粉末的硫酸铵,磁力搅拌,使加入粉末溶解,并参考硫酸铵溶液饱和度计算表,使其饱和度分别达到 30% 、40% ,50% 、60% 、70%和80%。4℃静置过夜,于4 ℃,12 000 r/min离心10 min,不同饱和度离心所得沉淀均用pH值9.0的Tris - HCl缓冲液溶解,并在4℃.0.05 molL的 Tris -HCl缓冲液中进行透析。其间更换透析液2~4次,透析过夜。 以上来源于文献整理，如有侵权，请联系删除，RL2023.9。 |
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