人参皂苷色谱行为前言人参皂苷是人参的重要活性成分,属于三萜类糖苷化合物,可分为原人参二醇组皂苷(PPD型皂苷)、原人参三醇组皂苷(PPT型皂 苷)和齐墩果烷型等。目前,已从人参根中分离出40多种人参皂苷。人参皂苷具有抗氧化、抗炎、血管舒张、抗过敏、抗糖尿病等多种治疗作用。 一些人参皂苷通过减少DNA损伤、减少宿主对突变的易感性、增加免疫监测和细胞凋亡等显示其抗癌特性。此外,人参皂苷还能有效改善传统化疗 药物的疗效,防止对正常组织的损伤。1 实验方法1.1 仪器配置皖仪科技LC3200系列高效液相色谱仪表1 高效液相色谱系统配置清单 1.2 测试条件色谱柱:C18,5μm,4.6×250mm;柱温:35℃;检测波长:203nm流速:1.0mL/min;流动相:A :乙腈;B:水进样量:10μL;表2 梯度条件1.3 仪器及试剂、耗材?试剂:甲醇:色谱纯;乙腈:色谱纯;标准物质:人参皂苷Rg1 、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1;辅助装置:分析天平;溶剂抽滤装置;超声波清洗机;实验材料:滤膜:有机相滤膜,水相滤膜0.45μm1 .4 对照品制备人参皂苷Rg1对照品溶液:精密称定人参皂苷Rg1对照品15.0mg,置容量瓶中,用甲醇稀释定容至10mL,制成1. 5mg/mL的标准溶液。人参皂苷Re对照品溶液:精密称定人参皂苷Rg1对照品9.0mg,置容量瓶中,用甲醇稀释定容至10mL,制成 0.9mg/mL的标准溶液。人参皂苷Rb1对照品溶液:精密称定人参皂苷Rg1对照品15.0mg,置容量瓶中,用甲醇稀释定容至10m L,制成1.5mg/mL的标准溶液。混合对照品溶液:分别取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品,加甲醇制 成每1mL中含人参皂苷Rg10.5mg、人参皂苷Re0.3mg、人参皂苷Rb10.5mg的混合溶液。人参皂苷Rg1标准系列溶液:取 人参皂苷Rg1对照品溶液稀释制成1mg/L、5mg/L、10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、500mg/L标 准系列溶液。2 结果与讨论2.1 标准曲线图1人参皂苷Rg1标准曲线及相关系数说明:人参皂苷Rg1标准曲线线性范围较好,线性相关系 数>0.9999。2.2 标准品图2 人参皂苷Rg1标准品色谱图表3 人参皂苷Rg1色谱参数图3 人参皂苷Rb标准品色谱图表4 人 参皂苷Rb色谱参数图4 人参皂苷Rb标准品色谱图表5 人参皂苷Rb色谱参数2.3 混标图5 人参皂苷混合标准品色谱图表6 人参皂苷 混合标准品色谱参数说明:由上述混标谱图可见,样品分离较好,样品分离度在2.2以上,满足分离要求。2.3 样品重复性图6 人参皂苷混 合标准品色谱图表7 人参皂苷Rg1、Re、Rb1标准品重复性色谱参数?说明:重复性较好,人参皂苷Rg1保留时间RSD值为0.437 %,峰面积RSD值为0.443%;人参皂苷Re保留时间RSD值为0.343%,峰面积RSD值为0.396%;人参皂苷Rb1保留时间 RSD值为0.479%,峰面积RSD值为0.382%。3 结论本次采用皖仪科技高效液相色谱仪配置二极管阵列检测器,依据《中国药典》 2020版对人参皂苷进行含量测定,由上述数据可知,标准曲线线性范围较好,线性相关系数>0.9999;人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、 人参皂苷Rb1理论塔板数分别为91232、46835、192000,符合药典要求理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000;重 复性较好,人参皂苷Rg1保留时间RSD值为0.437%,峰面积RSD值为0.443%;人参皂苷Re保留时间RSD值为0.343%, 峰面积RSD值为0.396%;人参皂苷Rb1保留时间RSD值为0.479%,峰面积RSD值为0.382%;人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品分离较好,样品分离度在2.2以上,满足分离要求。 |
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