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A280蛋白检测 检测原理 Protein A280法适用于纯蛋白质样品，这些蛋白一般含有色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等具有苯环结构共轭双键或者半胱氨酸-半胱氨酸二硫键的氨基酸，在280nm处具有显著光吸收，且其吸光度与蛋白浓度成正比。因此，除了给出在280nm吸光度和吸光度比(A260/A280)，软件还可以通过内部公式直接换算出蛋白质浓度，无需构建标准曲线。
操作流程 1. 在仪器主界面上，点击“蛋白”标签，选择A280； 2. 根据实验需要，选择样品类型和基线校正； 3. 将2μL空白对照溶液滴加到基座上，降下检测臂（或将加入空白对照溶液的比色皿插入比色皿架）； 4. 点击Blank，等待检测完成； 5. 上抬检测臂，无尘纸擦拭上下基座（或取下比色皿）； 6. 将2μL 样品滴加至基座上，然后降下检测臂（或将加入样品的比色皿插入比色皿架）； 7. 点击检测； 8. 完成检测后，清洁基座，点击结束实验，检测结果如下图所示。
A280蛋白检测结果界面 注意事项 1. 每次做Blank前，需要先用去离子水清洁上下基座； 2. 擦拭用纸需采用柔软、无屑的实验室专用擦拭纸； 3. 测量前，将样品充分混匀； 4. 吸样及加样时避免产生气泡； 5. 针对超高浓度样品，每次测量完毕后，用去离子水清洁上下基座，以保证下一个样品测量的准确性； 6. 同一液滴不能多次检测。如需重测，需重新滴加样品； 7. 放置仪器的台面，需避免阳光直射并远离通风口，以免样品蒸发； 8. 连续测量一段时间后（30min），需擦净样品，用去离子水清洁上下基座，做Re-Blank后再检测； 9. 仪器不用时，放下检测臂，减少灰尘； 10. 不要在基座上使用氢氟酸（HF），氢氟酸会损坏石英光纤。 常见问题 1. A280等相关吸光值出现负值
可能原因： 1）在进行Blank测量时基座脏污； 2）样品当成Blank测量； 3）重复进行了Blank测量。 解决方法：清洁基座，重新Blank。 2. 测量结果重复性较差 可能原因： 1）样品不均匀，尤其进行微量检测时，样品不均匀会导致数据出现显著偏差。 解决方法：通过适当的温和涡流，确保样品溶液均匀。 2）基座较脏。 解决方法：清洁基座，重新进行Blank检测。 3）重复测量同一液滴。 解决方法：同一液滴不能多次检测。如需重测，需重新滴加样品。 4）样品液体柱破裂。  解决方法： 1）确保样品加在基座上； 2）避免样品体积过小，建议加样1.5-2μl； 3）使用校准过的移液器加样； 4）确保仪器不在排风口或者其他空气流动剧烈处； 5）样品加上基座后，立即测量。 3. A280模式下，如何选择蛋白类型？ 蛋白质 A280 使用 Beer Lambert 公式关联吸光度和浓度。 c = A / (ε* b) c为浓度，A为吸光度，ε为消光系数，b为光程。 A280模式提供6种样品类型，选择一个符合自身样品的类型，软件会自动将对应的消光系数与浓度公式相结合，计算蛋白质浓度：
每个样品类型采用唯一消光系数计算蛋白质。如果样品的消光系数已知，可选择 ε + MW（摩尔）或 ε1%（质量）选项并输入数值。否则，您需要去计算消光系数或选择最匹配样品溶液的选项。但如果您只需要粗略估计蛋白质浓度并且样品消光系数未知，则选择 1 Abs=1 mg/mL 样品类型。 4. 什么是基线矫正？ 若指定基线矫正，软件会从样品光谱中所有波长处的吸光度值减去指定基线矫正波长处的吸光度值，矫正光散射粒子导致的任何偏移。因此，在指定基线矫正波长处的样品光谱吸光度为零。 例如：仪器指定基线矫正默认值为340nm，如果要测量样品在 340 nm 处的吸光值，那么需要修改矫正波长或关闭基线矫正。 有关A280模块蛋白检测相关知识就介绍到这里哦，扫描下方二维码关注我们，后续会给大家带来更多有关NanoDrop One/OneC的使用技巧~ 下期再见
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来自： 新用户049551KQ > 《待分类》
