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中国老年学杂志2001年7月第21卷 改良三甲散抗脑衰老作用的实验研究刘涛 王灿晖 杨 进 卞慧敏 马 健 龚婕宁 翟玉祥 刘学凤（南京中医药大学）研究改良三甲散抗脑衰老的作用原理。方法 D-半乳糖 2 .4g/kg颈背部皮下注射复制大鼠亚急性衰老模型 , 以 1 g/kg (5% ) 、2 g/kg (1 0 % ) 改良三甲散免煎颗粒剂灌胃治疗 40 d, 并以脑复康作为对照 , 观察改良三甲散对小鼠体重 , 脑、脾、胸腺指数及脑蛋白质、脑乳酸脱氢酶 (LDH) 、脑超氧化物歧化酶测定 (SOD) 、脑丙二醛测定 (MDA) 的影响。结果 改良三甲散能够提高实验动物脑、脾指数 , 增加脑蛋白质含量 , 提高脑 LDH、SOD活性 , 降低脑 MDA含量。结论 改良三甲散具有一定的抗衰老作用。 老化对机体衰老有着重要影响。改良三甲散具有填补脑髓, 充盈髓海的作用, 为了研究其抗脑衰老的作用原理, 我们进行了动物实验。 1 材料和方法 1.1 药品和试剂 改良三甲散 (免煎颗粒剂) , 由龟板、鳖甲、牡蛎、地鳖虫、地龙、何首乌、刺五加、当归、赤芍、僵蚕、石草蒲组成, 江苏天江制药有限公司生产, 批号:970111。将改良三甲散免煎颗粒剂碾碎, 以温开水溶解, 分别配制成5%改良三甲散、10%改良三甲散混悬液。脑康复片, 南京第二制药厂生产, 批号:960701。将脑复康片碾碎, 以温开水溶解, 配制成2.5%脑复康混悬液。D-半乳糖:上海试剂二厂生产, 批号:881027。将D-半乳糖溶解于蒸馏水中, 高压灭菌, 备用。蛋白定量试剂盒 (双缩脲法) :南京建成生物工程研究所生产。乳酸脱氢酶测定 (LDH) 试剂盒 (酶法) :浙江温州东瓯生物工程有限公司生产。超氧化物歧化酶 (SOD) 测定试剂盒 (黄嘌呤氧化酶法) :南京建成生物工程研究所生产。丙二醛 (MDA) 测定试剂盒 (硫代巴比妥法) :南京建成生物工程研究所生产。 1.2 动物 昆明种小白鼠, 由南京中医药大学实验动物中心提供, 合格证:苏动 (质) 95040, 苏动 (环) 95099。 1.3 仪器 FA2004电子天平:上海天平仪器厂制造。722型光栅分光光度计:山东高密分析仪器厂。SC-921型半自动生化分析仪, 重庆生化分析仪器研究所制造。FSH-Ⅱ高速电动匀浆器:江苏省金坛市振兴仪器厂制造。LCZ5-2型离心机:北京医用离心机厂制造。 1.4 方法 取昆明种小白鼠, 雄性, 体重20±2 g, 随机分为5组, 即正常对照组、D-半乳糖模型组、脑复康组、5%改良三甲散组、10%改良三甲散组。各组动物均按20 ml/kg小白鼠体重灌胃, 每日1次, 其中, 正常对照组和D-半乳糖模型组每日灌胃温开水, 脑复康组每日按0.5 g/kg体重灌胃, 5%改良三甲散组每日按1 g/kg体重灌胃, 10%改良三甲散组每日按2 g/kg体重灌胃。同时D-半乳糖模型组、脑复康组、5%改良三甲散组、10%改良三甲散组每日颈背部皮下注射D-半乳糖2.4 g/kg复制小鼠亚急性衰老模型 [1] , 共计40 d, 于末次给药后1 h, 称量体重并采用脱椎法处死动物, 迅速取小鼠脑、脾、胸腺, 于电子天平上称重, 并按照脑 (脾、胸腺) 指数=脑 (脾、胸腺) 重mg/体重g公式 [1] 分别计算脑、脾、胸腺指数。以生理盐水按0.1 g∶1 ml比例稀释脑组织, 冰冻匀浆, 将匀浆液以3 000 r/min速度离心10 min, 取上清液测定脑蛋白含量, 脑LDH活性, 脑SOD活性和脑MDA含量。脑蛋白质、脑SOD活性和脑MDA含量测定采用722型光栅分光光度计, 脑LDH测定采用SC-921型半自动生化分析仪。 2 结 果 2.1 改良三甲散对亚急性衰老小鼠体重、脑、脾、胸腺指数的影响各组动物的体重和胸腺指数没有明显差异 ( P >0.05) , D-半乳糖模型组小鼠脑指数或脾脏指数均比正常对照组降低 ( P <0.05) , 说明D-半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠脑和脾的重量明显下降。 改良三甲散和脑复康组小鼠的脑、脾指数较D-半乳糖模型组明显提高, 其中10%改良三甲散对脑指数的作用尤为明显 ( P <0.01) , 脑复康对脾指数作用明显 ( P <0.01) , 5%改良三甲散对脑指数有提高作用 ( P <0.05) , 但对脾指数无明显影响 ( P >0.05) 。结果见表1。 2.2 改良三甲散对亚急性衰老小鼠脑蛋白质含量和脑LDH活性的影响D-半乳糖模型组小鼠脑蛋白质含量和脑LDH活性均比正常对照组降低 ( P <0.05) , 说明D-半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠脑蛋白质的含量减少, 脑LDH的活性下降。改良三甲散和脑复康组小鼠的脑蛋白质含量和脑LDH活性均较D-半乳糖模型组明显提高 ( P <0.05) , 其中10%改良三甲散对脑蛋白质含量的作用尤为明显 ( P <0.01) , 结果见表2。 2.3 改良三甲散对亚急性衰老小鼠脑 SOD 和 MDA 的影响D -半乳糖模型组小鼠脑组织中 SOD 活性显著低于正常对照组 ( P <0.01) , 说明 D -半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠脑内 SOD 活性显著降低。脑复康和5%、10%改良三甲散治疗组小鼠脑组织中 MDA 含量明显低于 D -半乳糖模型组 ( P <0.05) , 说明改良三甲散能够拮抗由 D -半乳糖诱导的小鼠脑内 MDA 含量的升高, 结果见表3。 3 讨 论 组织器官的重量, 特别是脑、脾、胸腺等重要器官的重量变化, 是反映生物体衰老程度的重要指标。脑指数是指脑重与体重的比值, 是反映个体间脑重量差异的客观依据;脾脏是人体重要的免疫器官, 老化机体的脾脏萎缩, 脾功能衰退, 机体免疫功能下降, 容易导致各种老年疾病的发生, 加速老化进程。我们的实验结果提示:改良三甲散能够拮抗 D -半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠脑、脾重量的增龄性下降, 说明改良三甲散能够有效地控制和对抗脑的衰老, 保持机体的免疫功能, 提高抗病能力, 从而对延缓衰老具有积极的意义。 脑衰老进程中除了在形态学上表现为脑重量的减轻、脑萎缩、神经元丢失等, 其生化的改变如脑蛋白质的含量、酶的水平和活性等也有显著的变化。研究证明, 人体内的蛋白质随着增龄而逐渐下降, 蛋白质是细胞存在的特殊形式, 是生命活动的重要物质, 蛋白质缺乏, 细胞的功能则明显下降, 生物体的机能特别是脑的机能活动也明显衰退, 酶是生物体代谢的主体之一, 参与蛋白质的合成, 在衰老的过程中酶水平和酶活性均发生明显的变化, LDH 是糖代谢中的重要酶类, 参加体内的氧化还原反应, 氧化还原是生物体重要的生化反应之一, 多种氧化还原酶如 LDH 、葡萄糖脱氢酶、虎珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶、细胞色素还原酶等的酶水平和酶活性均随生物及人类的增龄而下降 [2] 。 老年人物质代谢和能量代谢水平低下的原因可能就是因为这些酶的活性降低所造成的。我们的实验结果表明:改良三甲散能够显著提高 D -半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠脑内蛋白质的含量和脑 LDH 的活性, 其能够增加脑蛋白质含量的作用, 可能是其增加脑重量的原理之一;其能够提高脑 LDH 活性的作用, 可能与其改善脑的物质和能量代谢, 抗衰老的功能有关。D -半乳糖复制的衰老模型与自然衰老具有相似的自由基代谢紊乱特征 [3] 。 我们的实验发现:衰老模型小鼠脑组织中 SOD 活性下降, 说明自由基反应在衰老过程中起着重的作用;改良三甲散能够显著提高 D -半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠脑内 SOD 的活性, 并能同时明显降低其脑内 MDA 的含量, 提示改良三甲散能够促进脑组织中自由基的清除, 从而减轻其对脑细胞的损害, 改善脑功能, 这一效应亦可能为改良三甲散抗老防衰的作用原理之一。 参考文献1 陈 奇.中药药理研究方法学〔M〕.北京:人民卫生出版社, 1993;779:937-9412 田清涞.酶与衰老〔J〕.老年学杂志, 1993;13 (6) :372-3743 钱小明, 吴振国, 施志明 et al.氨基乙磺酸延缓衰老的实验研究〔J〕.中国老年学杂志, 1994;14 (6) :364-365基金: 江苏省各部委社会发展项目 (BS960 59) |
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