我们查阅了一些“高致病弧菌”的国内外文献

关于高致病弧菌林林总总的名称与简称：

- TPD全称Translucent Post-Larva Disease，直译为半透明幼体病；

- GPD全称Glass Post-larvae Disease直译为玻璃幼体病；

- BVS全称Bacterial Vitrified Syndrome，直译为细菌性玻化综合症；

- HLVD全称Highly Lethal Vibrio Disease，直译为高致病弧菌病。

高致病弧菌最早于2019年底、2020年初开始在中国流行，该病一般出现在放苗前期，养殖户通过虾苗的症状将其称为玻璃苗，目前国际期刊上发表的相关文章基本都来自中国专家学者，TPD、GPD、BVS是基于症状对该病做的不同翻译与英文命名。后续的研究表明该疾病是由特异性的副溶血弧菌导致的，它的致病性要远强于AHPND弧菌，因为将这类弧菌命名为高致病弧菌以示区别，其引发的疾病叫做高致病弧菌病HLVD；也有专家分离出不属于副溶血弧菌的致病菌。

1. Determination of the Infectious Agent of Translucent Post-Larva Disease (TPD) in Penaeus vannamei

Ying Zou等，Pathogens，2020

作者团队在2020年4月28日在江苏Ganyu取样TPD对虾，进行已知病原筛查，结果表明这是一种新的细菌性病原；然后在细菌分离和鉴定、攻毒实验和组织病理学分析的基础上，对引起TPD的潜在病原进行了系统调查。

图一、感染TPD幼体的临床表现

a. 采集自TPD感染池塘的幼体 b.  采自浸泡式攻毒的个体

图二、细菌鉴定与毒力基因分析

图三、自然感染TPD的幼体切片

a、b、e为感染初期病理变化，c、d、f为急性感染期的病理变化；a、b、c、d为肝胰腺，e、f为中肠；BC bacterial colonization细菌定值

• 临床症状：病虾的肝胰酶和消化道变得苍白、无色。

• 病原菌Vp-JS20200428004-2为一种Vibrio parahaemolyticus副溶血弧菌。

• 与典型的Acute hepatopancreatic necrosis disease致病副溶血弧菌不同，Vp-JS20200428004-2含有ldh基因会产生热溶血素，而缺乏pirA^Vp和pirB^Vp基因。

• 组织病理学：该病原菌会造成对虾虾肝胰腺和中肠上皮细胞严重坏死和脱落。

• 1.83×10⁶CFU/mL的剂量40h即造成100%死亡。

2. 凡纳滨对虾虾苗细菌性玻化症 (BVS) 的病原、病理分析

王印庚等，水产学报，2021

作者团队自河北省沧州市 5 家对虾育苗场采取具有典型的“玻化症” 的患病虾苗，然后进行病样检查及优势菌分离、人工感染、病原菌分类鉴定、 组织病理学观察和药物敏感性实验。

图一、 凡纳滨对虾虾苗细菌性玻化症症状及菌株 Lv-A 和 Lv-B 的形态观察

• 患病对虾形态特征：患病凡纳滨对虾虾苗表现为活力减弱，虾 体消瘦、暗浊，空肠空胃，肝胰腺轮廓模糊、 组织解体、颜色变浅至肝胰腺区由正常的饱满褐色组织变为空白的玻璃化状态。头胸甲区域至腹部呈现瘦小、暗浊状态。

• 通过比较筛选共分离出2株优势菌，人工感染实验Lv-A和Lv-B组分别在12h和24h出现持续性玻璃化现象。

• 病原菌16S rDNA和gyrB鉴定分析，不同方法与数据库得到的结果存在差异，本实验暂无法确定Lv-A和Lv-B的具体菌株名称。

• 组织病理学特征：石蜡组织切片表明，患病凡纳滨对虾虾苗肝胰腺萎缩，肝小管上皮细胞坏死、脱落，肝小管中充斥大量的碎片组织并逐步褐化、黑化；肠道内充盈大量的褐化组织碎片，绒毛膜脱落、消失，肠壁出现缺失现象。

• 药敏试验：Lv-A和Lv-B均对米诺环素、多西环素、萘啶酸敏感，对新霉素、吡哌酸、乙酰螺旋霉素、链霉素、利福平、复方新诺明耐药。

3. Highly lethal Vibrio parahaemolyticus strains cause acute mortality in Penaeus vannamei post-larvae

Feng Yang等，Aquaculture，2022

“在这项研究中，我们调查了这种新出现疾病的病因。从不同养殖场（福建，2019年10月24日、2020年5月9日和2020年6月11日）收集的患病动物身上分离出了三种高致死率的副溶血性弧菌菌株，并证明它们是致病菌。此外，我们还发现病理变化很可能是由细菌毒素引起的。”

图一、患病幼体的临床症状

• 从不同样本获取的致病菌菌株分别为vp-HL-201910, vp-HL-202005和vp-HL-202006，16S rRNA基因序列BLAS分析表明，这些菌落均属于弧菌属，与副溶血性弧菌的相似性最高；利用保守基因tlh进行的进一步系统进化分析表明分离到的菌落与3株已知的副溶血性弧菌同组。所以将这种病重新命名为Highly Lethal Vibrio Disease。

• HLVD和AHPND的临床症状相似，但高致病弧菌没有pirA^vp和pirB^vp以及 AP1和AP2基因。

• 组织学病变：肝胰腺小管上皮细胞出现严重的坏死和脱落；中肠上皮细胞的结构也发生了显著的变化；有时可在肝胰腺和中肠看到定植细菌。

• HLVD菌株的毒力比AHPND菌株高1000倍。

• HLVD的病理学是由一种细菌毒素引起的。

4. Vibrio parahaemolyticus becomes lethal to post-larvae shrimp via acquiring novel virulence factors

Shuang Liu等，Microbiology spectrum，2023

“作者团队首先通过攻毒测试实验，研究了导致VpTPD对凡纳滨对虾幼体致病性的不同分子量的关键致病蛋白。然后，通过质谱分析和基因组测序对作为 VpTPD 潜在致病因子的致病蛋白片段进行了表征。同时，还研究了不同弧菌分离物中高毒蛋白（VHVP）毒力因子的存在情况，以及其在不同地区对虾养殖场 TPD 病例中的出现情况。”

图一、质粒2中vhvp-1和vhvp-2所编码蛋白质的推导保守结构域

图二、不同对虾养殖区域的VpTPD流行率

• Vp_TPD 的高效毒力因子应存在于通过超声波破坏Vp_TPD U提取的裂解蛋白质部分（MW>100kDa）中。

• 在接受 Vp_TPD U（>100kDa）攻毒的组别中，肝胰腺小管和中肠的上皮细胞在挑战后16和24 h出现轻度坏死和脱落，在挑战后32和40 h出现严重坏死和脱落；中肠的组织病理学变化在攻毒32h后最为严重，严重的上皮细胞坏死导致中肠基底膜上的上皮细胞脱落并散落到中肠腔内。

• 通过基因组测序对比Vp_TPD与非Vp_TPD组，Vp_TPD有2个环状染色体，3个质粒；非Vp_TPD株(Vp1616) 只有两个环状染色体。两个推定毒力因子基因（GE005140和GE005139）只存在Vp_TPD中，它们编码推导出的假定毒力因子VHVP-1和VHVP-2与杀虫毒素蛋白的氨基酸序列具有100%和99.49%的相同性。

• 新型毒素蛋白VHVP-2，（分子量大于100kDa）含有沙门氏菌毒力质粒蛋白、杀虫毒素复合蛋白和神经氨酸酶的保守结构域，是Vp_TPD的关键毒力因子。

5. Vibrio parahaemolyticus becomes highly virulent by producing Tc toxins

Feng Yang等，Aquaculture，2023

“在本研究中，我们比较了Vp_HLVD和非HLVD致病弧菌菌株的蛋白质谱，并发现了Vp_HLVD特异表达的新型Tc毒素。我们证明Tc毒素是Vp_HLVD的主要毒力决定因素。这是首次证明Tc毒素对弧菌毒力的贡献。”

图一、致病弧菌和非致病弧菌菌株蛋白质谱的比较

• 除Vp_HLVD菌株特异表达的两条高分子量蛋白条带（约300kDa和约200kDa）外，所有测试的副溶血性弧菌菌株的蛋白质概况相似。通过分离、攻毒等实验表明Vp_HLVD特异性 ~300 kDa 和 ~200 kDa 蛋白可能是与HLVD相关的毒素，它们不由细菌分泌。

• Tc毒素基因只在Vp_HLVD菌株中表达（相对 AHPND菌株）。

• Vp_HLVD包含两组质粒编码的Tc毒素基因。

• Tc毒素基因只在Vp_HLVD菌株中表达。

• 消除Tc毒素编码质粒可消除Vp_HLVD致HLVD的能力。

6. Prevalence investigation of translucent post-larvae disease (TPD) in China

Tianchang Jia等，Aquaculture，2024

“从2021年到2022年，我们对从中国不同省份采集的对虾中可能导致 TPD 感染的细菌病原体进行了分离、鉴定和致病性分析，以了解该病原体的基本生物学特性。同时，为了确定该病在中国主要对虾养殖品种和不同对虾养殖区域的流行情况，本研究基于分子生物学分析（PCR 和实时 PCR）和组织病理学分析，对 2021 年至 2022 年的 TPD 进行了分子流行病学调查。”

图一、南美白对虾幼体感染Vp_HLVD临床症状 & Vp_HLVD感染组不同感染阶段的南美白对虾幼体肝胰腺和肠的组织病理学照片

图二、Vp_HLVD分子流行病学调查

• 在感染的早期，肝胰管和中肠的上皮细胞轻微脱落，并且细菌在腔内积累；在中期，肝胰管和中肠的上皮细胞出现严重坏死和部分脱落；在晚期，肝胰管和中肠组织出现严重坏死和脱落，大量细菌定植在腔内。

• 本研究确认了3株TPD致病菌，鉴定菌株20220614001-2属于需钠弧菌V. natriegens，菌株20220614004-1归类于副溶血弧菌V. parahaemolyticus，菌株20220614009-1归类于坎贝氏弧菌V. campbellii。

• 在大多数沿海省份的养殖池塘中都发现了VTPD阳性样本，南美白对虾的阳性率为29.1%（135/463），日本对虾的阳性率为18.3%（11/60）。罗氏沼虾和克氏原鳌虾未见阳性结果。此外，鱿鱼和沙蚕中VTPD的阳性率为22.9%（14/61），而螺蛳（野生）中未见阳性结果。

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