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支原体污染在生物制药的生产中构成了重大挑战，包括细胞治疗和疫苗，因为它可能会影响产品的数量和质量。一些支原体菌株甚至是致病的，能够引起呼吸和泌尿道感染。传统上，直接培养方法和指示细胞培养方法已被用于支原体检测。然而，由于培养时间长（28天）和培养不同支原体菌株的困难，这些方法在细胞和基因治疗的生产中应用时存在局限性。核酸扩增技术（NAT）正作为传统培养方法的替代品被使用，特别是在进行了适当的验证后，用于生物制药的鉴定，如先进治疗药物产品（ATMPs）。为了根据欧洲药典（EP 2.6.7）和韩国食品药品安全部（MFDS）等指南替代传统培养方法，需要具备高水平的灵敏度和特异性，能够检测到每毫升10个菌落形成单位（CFU/mL）的支原体。 通过标准测试方法定量的支原体10 CFU标准 产品浓度：100 CFU/ml 灭活支原体产品，无需担心细胞系污染（不适用于基于培养的方法） 从支原体培养的对数生长期提取 GC/CFU比率：每批检查COA（合格证书）。 应用：与基于培养的方法和NAT（核酸检测）方法的比较测试， 验证NAT方法的检测限。 CellSafe-MycopQSearch支原体qPCR检测试剂盒用于通过实时定量PCR（qPCR）检测细胞培养中的支原体污染，使用水解探针。试剂盒中包含的引物和探针混合液含有针对支原体属特异性的FAM标记探针和HEX标记的内控DNA探针。引物组特异性针对支原体基因组中高度保守的16S rRNA编码区。这允许检测M.orale、M.hyorhinis、M.arginini、M.fermentans、Acholeplasma laidlawi和M.hominis，这些是细胞培养中的主要污染物，以及包括M.pneumoniae、M.salivarium、M.synoviae、Spiroplasma citri和Ureaplasma在内的大多数其他支原体种。然而，不会扩增来自原核细胞如大肠杆菌的细菌DNA。该试剂盒可以在3小时内检测出细胞培养中的支原体污染，并满足当前指南设定的灵敏度要求（10 CFU/mL）。
CellSafe支原体10CFU灵敏度： 核酸扩增技术（NAT）系统需要能够检测到每种支原体菌株的10 CFU/mL以替代传统的培养方法。然而，PCR技术仅能检测到基因组拷贝（GC），而每个菌落形成单位（CFU）的基因组拷贝数因不同种类和不同的培养条件而异。虽然各种商业化的支原体检测试剂盒的检测限可能看起来都是10 CFU/mL，但实际上，实时PCR的灵敏度实际上会根据基因组拷贝/CFU比率的不同而有所变化。 使用CellSafe的MycopQSearchTM支原体qPCR检测试剂盒进行的PCR的灵敏度为1-10个拷贝/反应（1-10 CFU/mL）。我们使用支原体参考菌株和基因组DNA参考标准来确定灵敏度，并确保试剂盒的质量。 |
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