吸光光度法（微量组分）——知识小结篇（手写扫描版）

光的选择性吸收——物质分子选择性地吸收一定的波长的紫外或可见光时，分子中的价电子会从低能级跃迁到高能级（物质对光吸收的本质）而产生的分子吸收光谱（相应于原子吸收光谱）。

定性/定量/结构分析——利用物质的紫外可见光谱及吸收程度可以对物质的组成（定性分析，特征吸收曲线，特征最大吸收波长，特征最大吸收波长处的摩尔吸光系数）、含量（定量分析、L-B定律）和结构（有机波谱分析中常用来推断 双键等不饱和键是否共轭，是否有芳香环）进行分析、测定、推断。

光吸收定律（定量分析）——溶液对光的吸收符合朗伯-比尔定律（A=-lgT=εbc）,即:在一定的波长、溶剂、光强度和温度下溶液的吸光度与溶液的浓度及液层的厚度成正比，其适用条件是平行单色光、均匀、非散射的稀（一般小于0.01 mol/L）溶液（气体和均匀固体也可以）。

穿过狭缝的透射光到达反射光栅发生衍射产生单色光

可见吸光光度法——可见光的波长范围为400~750 nm，在可见吸光光度法中,待测物质往往需要有颜色,若待测物质本身无色或颜色很浅，则必须对它进行化学处理（如显色反应）,使其呈现某种颜色(如果不用可见吸光光度法，也可以考虑使用其他非可见光波长，如紫外光),从而进行测定,提高测定的灵敏度和选择性。

定量分析方法——物质含量的方法包括目视比色法和分光光度法；分光光度法需要在最大吸收波长处（灵敏度最高，非单色性影响小）和一定浓度范围内进行,分为标准曲线法和标准品对照法（也称为比较法，待测物质浓度与标准品浓度接近）。

标准（工作）曲线——如果标准系列溶液的浓度适当,测定条件合适,理想的标准曲线应该是一条通过坐标原点的直线。在实际工作中,很多物理或化学因素可能导致偏离光的吸收定律,常出现标准曲线在高浓度端发生弯曲现象,给测定结果带来误差,如单色光不纯、溶液浓度过高（可采用稀释解决）或吸光物质性质不稳定等。

吸光度具有加和性（多组分分析）——如果溶液中同时存在两种或两种以上的吸光性物质,则测得该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物质吸光度的总和。根据吸光度的加和性,可以在同一试样中不经分离同时测定两个以上的组分。这个性质在实际操作中有着极其重要的意义（这是目视比色法做不到的）。

测量条件的选择——无干扰时,“最大吸收“原则；有干扰时，“吸收最大，干扰最小”原则；当T=36.8%，或A=0.434时，浓度相对误差Er最小，吸光度的读数一般控制在A=0.2~0.8内，此时测量误差较小。

参比（空白）溶液的选择——参比溶液用来调节仪器零点，消除由于吸收池壁及溶剂对入射光的反射和吸收带来的误差，并扣除干扰的影响。

参比溶液可根据下列情况进行选择：

①当试液及显色剂均无色时，可用蒸馏水作参比溶液——溶剂空白。

②显色剂无色，而被测试液中存在其他有色离子，可用不加显色剂的被测试液作参比溶液——样品空白。

③显色剂有颜色，可选择不加试样溶液的试剂空白作参比溶液——试剂空白。

④显色剂和试液均有颜色，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂及其他试剂均按试液测定方法加入，由此作为参比溶液，这样就可以消除显色剂和一些共存组分的干扰——显色空白。