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首先，作者检测了肺腺癌细胞系中的 SNX30 水平。结果表明，与 BEAS-2B 细胞相比，SNX30 在肺腺癌细胞系（A549 和 HCC827）中被下调（见图）。1A-C），表明 SNX30 在肺腺癌中起到重要调节作用。肺腺癌细胞系（A 和 B）中 SNX30 的表达 利用 RT-qPCR 和西方印迹检测肺腺癌细胞系（A549 和 HCC827）及 BEAS-2B 细胞中的 SNX30 表达。（C） SNX30/GAPDH 比值。**P < 0.01。实验被独立重复了三次。数据以三个独立实验的平均值±标准差（SD）形式呈现SNX30 质粒抑制肺腺癌细胞增殖及细胞加速凋亡作者研究了受 SNX30 质粒调控的肺腺癌细胞的生物功能。对照质粒或 SNX30 质粒被转染到 A549 和 HCC827 细胞中，并通过 RT-qPCR 和 western blot 检测评估转染效率。如图所示。阿拉伯数字A-C，SNX30 在转染的 SNX30 质粒 A549 和 HCC827 细胞中上调。此外，CCK-8 分析显示 SNX30 质粒显著抑制了 A549 和 HCC827 细胞的增殖（见图 2D）。此外，SNX30 上调增强了肺腺癌细胞中切割后天冬酶 3 的表达及切割后方节冬酮 3/天冬期酶 3 的比率（见图 2E 和 F），相较对照质粒组。流式细胞术分析显示，SNX30 质粒在 A549 和 HCC827 细胞中的凋亡显著增强（见图 2G），相较对照质粒组。这些数据表明，SNX30 的上调对肺腺癌细胞增殖具有抑制作用。SNX30-质粒对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。A549 和 HCC827 细胞被转染对照质粒和 SNX30 质粒。（A，B） 通过 RT-qPCR 和西方墨迹检测检测到 SNX30 表达。（C） SNX30/GAPDH 比值。（D）细胞存活率通过 CCK-8 检测法进行测量。（E）通过西方印迹法检测切割 Caspase3 及其表达。（F）切割-Caspase3/Caspase3 比率。（G）细胞凋亡的流式细胞术分析及凋亡细胞的定量。**P < 0.01。实验被独立重复了三次。数据以三个独立实验的平均值±标准差（SD）形式呈现SNX30 质粒诱导的肺腺癌细胞铁剥落症铁消亡是一种铁依赖性细胞死亡的形式，不同于坏死和凋亡，主要表现为脂质过氧化。先前的报告发现铁抑素-1 是一种特异的芳香胺结合脂质 ROS，并能保护细胞免受脂质过氧化[18]。因此，作者研究了 SNX30 在肺腺癌细胞铁凋亡中的作用。作者的数据显示，与对照组相比，SNX30 质粒显著提高了 A549 和 HCC827 细胞的 ROS 水平（图 3A）、细胞内总铁水平（图 3B）和 Fe2+ 水平（图 3C）。进一步的机理实验表明，SNX30 质粒抑制了 Cys、GSH 和 GPX4 的释放，而对照质粒则是如此（见图 3 D-F）。作者还测量了铁剥蚀相关基因的表达，包括 Ptgs2 和 Chac1。如图 3 所示，G 和 H 在 SNX30 质粒处理的肺腺癌细胞中，Ptgs2 和 Chac1 上调。然而，铁抑素-1 治疗显著逆转了 SNX30 质粒对肺腺癌细胞铁消亡的所有效应。SNX30 质粒和铁抑素-1 对肺腺癌细胞铁坏死的影响。A549 和 HCC827 细胞被转染对照质粒和 SNX30 质粒，随后用 1 μM 铁锄素-1 处理。（A）测量了 ROS 水平。分析了肺腺癌细胞中的总铁（B）和亚铁（C）水平。肺腺癌细胞系中的 GSH （D）、Cys （E）和 GPX4 （F）水平。（G 和 H）Ptgs2 和 Chac1 表达的 qRT-PCR 分析。**P < 0.01。实验被独立重复了三次。数据以三个独立实验的平均值±标准差（SD）形式呈现铁抑素-1 逆转了 SNX30 质粒对 SETDB1 表达的影响越来越多的证据表明，SETDB1 的异常调控与多种人类癌症密切相关[19]。作者评估了通过 SNX30 质粒转染的 A549 和 HCC827 细胞中 SETDB1 的表达。作者观察到 SNX30 质粒组的 SETDB1 水平低于对照组，而铁抑素-1 处理的细胞则相反（见图 4A-C）。作者的发现表明，SETDB1 表达与肺腺癌的 LUAD 发生有关。SNX30-质粒和铁抑素-1 对 SETDB1 表达的影响。A549 和 HCC827 细胞被转染对照质粒和 SNX30 质粒，随后用 1 μM 铁锄素-1 处理。（A）通过 RT-qPCR 测定肺腺癌细胞中 SETDB1 的相对表达水平。（B）通过西方印迹法测定肺腺癌细胞中 SETDB1 蛋白表达水平。（C） SETDB1/GAPDH 比值。**P < 0.01。实验被独立重复了三次。数据以三个独立实验的平均值±标准差（SD）形式呈现SNX30 负调控了肺腺癌细胞中的 SETDB1 表达为进一步说明 SNX30 和 SETDB1 在肺腺癌细胞中的调控作用，对调照质粒和 SNX30 质粒进行了 A549 和 HCC827 细胞转染。如图所示。5A-C，即 SETDB1 质粒显著提升了 SETDB1 水平，而对照质粒则是这样。此外，SNX30 质粒转染肺腺癌细胞中的 SETDB1 水平低于对照组，且在 SETDB1 质粒处理后，这一下降被逆转（见图 5-D-F ）。 作者的观察证实 SNX30 对肺腺癌细胞中的 SETDB1 表达负向调控。SETDB1-质粒和 SNX30-质粒对 SETDB1 表达的影响。肺腺癌细胞被分为四组：对照组、SNX30 质粒组、SNX30 质粒+对照组和 SNX30 质粒+SETDB1 质粒组。（A）对 A549 和 HCC827 细胞中 SETDB1 进行 RT-qPCR 分析，该细胞转染对对照质粒或 SETDB1 质粒。（B）对 A549 和 HCC827 细胞中 SETDB1 进行西方印迹分析，该细胞转染对对照质粒或 SETDB1 质粒。（C） A549 和 HCC827 细胞中 SETDB1/GAPDH 比值，转染对照质粒或 SETDB1 质粒。（D）对所有四组的 SETDB1 mRNA 水平进行了评估。（E）SETDB1 表达的西方印迹分析。（F）四个组 A549 和 HCC827 细胞中的 SETDB1/GAPDH 比值。**P < 0.01。实验被独立重复了三次。数据以三个独立实验的平均值±标准差（SD）形式呈现上调 SETDB1 逆转了 SNX30 质粒对肺腺癌细胞铁剥坏作用的影响作者还评估了 SETDB1 质粒对肺腺癌细胞铁凋亡的影响。作者的数据表明，SETDB1 质粒逆转了 SNX30 质粒对肺腺癌细胞铁消亡的影响，这一点通过 ROS 水平的降低可见一斑（见图）。6A）、细胞内总铁水平（图 6B）和 Fe2+ 水平（图 6C）。作者还观察到，SETDB1 质粒处理促进了 Cys、GSH 和 GPX4 的分泌（见图 6D-F），同时降低了 Ptgs2 和 Chac1 表达（见图 6G 和 H），这与 SNX30-质粒+对照质粒组形成鲜明对比。这些发现表明 SNX30 通过调控 SETDB1 表达抑制肺腺癌细胞增殖，并诱导铁细胞凋亡。SNX30-质粒和 SETDB1-质粒对肺腺癌细胞铁剥坏症的影响。肺腺癌细胞被分为四组：对照组、SNX30 质粒组、SNX30 质粒+对照组和 SNX30 质粒+SETDB1 质粒组。（A）测量了 ROS 水平。分析了肺腺癌细胞中的总铁（B）和 Fe2+积累（C）。测定肺腺癌细胞中的 GSH （D）、Cys （E）和 GPX4 （F）水平。（G 和 H）Ptgs2 和 Chac1 mRNA 水平通过 RT-qPCR 测定。**P < 0.01。实验被独立重复了三次。数据以三个独立实验的平均值±标准差（SD）形式呈现。 总结 该研究表明，SNX30 通过调控 SETDB1 表达抑制肺腺癌细胞增殖并诱导铁剥凋亡，为肺腺癌治疗提供了潜在靶点。
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