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3.1. 环 TTC17 表达在 ESCC 中上调circ-TTC17 在 ESCC 组织中表达较邻近正常组织更高（见图1A）。此外，作者测量了 HEC 细胞和 ESCC 细胞中的 circ-TTC17 表达。如图 1B 所示，环 TTC17 表达在 ESCC 细胞系中也有所增加，尤其是在 KYSE180 和 KYSE30 细胞中。这些数据证实，异常的环孕-TTC17 表达可能与 ESCC 进展有关。环 TTC17 和 miR-145-5p 在 ESCC 中的表达。（A–B）QRT-PCR 结果显示，circ-TTC17 在 ESCC（T）和细胞系中表达较高，分别高于邻近正常组织（N）和 HEEC 细胞。*p < 0.05。3.2. 环孕期孕育睾酮 17 的沉默抑制 ESCC 进展circ-TTC17 表达的下降证实 si-circ-TTC17 的转染效率极佳（见图2A）。circ-TTC17 敲低抑制了 ESCC 细胞增殖并增强了细胞凋亡（见图 2B，C）。环 TTC17 沉默抑制了 ESCC 细胞的迁移和侵入（图 2D，E）。此外，环 TTC17 的干扰抑制了 KYSE180 和 KYSE30 细胞的存活分数，表明环 TTC17 敲低促进了 ESCC 细胞的辐射敏感性（见图 2F，G）。此外，circ-TTC17 敲低降低了 LC3-II/I 水平，提高了 p62 水平，表明 circ-TTC17 可能促进 KYSE180 和 KYSE30 细胞的自噬（见图 2H 和 S1）。为了探讨自噬与放射敏感性的联系，作者使用了雷帕霉素，一种自噬激动剂。加入雷帕霉素逆转了 si-circ-TTC17 对 LC3-II/I 表达的抑制作用，表明细胞的自噬得以恢复（见图 2H）。加入雷帕霉素还反转了 si-circ-TTC17 对细胞放射敏感性的促进效应，证实自噬可抑制细胞放射敏感性，而环 TTC17 通过影响自噬调控 ESCC 细胞的辐射敏感性（见图 2I，J）。环 TTC17 的沉默抑制了 ESCC 的进展。（A） 通过 qRT-PCR 评估了 si-circ-TTC17 的转染效率。分别进行了 CCK8 检测（B）、流式细胞术（C）、透孔检测（D–E）、菌落形成测定（F–G 和 I–J）和 WB 分析（H）以确定细胞增殖、凋亡、迁移、入侵、辐射敏感性和自噬。*p < 0.05。3.3. 环 TTC17 直接与 miR-145-5p 相互作用Starbase 软件预测环绕 TTC17 含有更多靶向 miRNA。通过文献检索，作者鉴定出 5 种抑制 ESCC 进展的 miRNA，作为 circ-TTC17 的候选 miRNA。通过 qRT-PCR，作者发现环 TTC17 的敲低促进了 miR-124‐3p 和 miR-145-5p 水平，其中 miR-145‐5p 的上调最为显著（见图 S2A）。因此，miR-145-5p 被选中进行研究。它们之间的互补结合位点如图 3A 所示。如图 3B，C 所示，miR-145-5p 只能降低环 TTC17-WT 报告载体的荧光素酶活性，而非环 TTC17-MUT 载体。此外，Ago2 组中环 TTC17 和 miR-145-5p 均被免疫沉淀（见图 3D，E），证实环 TTC17 与 miR-145-5p 的相互作用。此外，miR-145-5p 在 ESCC 组织和细胞中的表达较低（见图 3F，G）。此外，在 ESCC 组织中 miR-145-5p 与环 TTC17 表达呈显著负相关（见图 3H）。circ-TTC17 直接与 ESCC 中的 miR-145-5p 相互作用。（A）显示了环 TTC17 和 miR-145-5p 之间的靶向和突变结合位点。通过双荧光素酶报告测定法（B–C）和 RIP 测定（D–E）验证了环 TTC17 与 miR-145-5p 在 KYSE180 和 KYSE30 细胞中的相互作用。（F–G） miR-145‐5p 在 T 和细胞系中表达较低，这一点通过 qRT-PCR 得到了证明。（H）使用皮尔逊相关系数分析评估 miR-145-5p 与环 TTC17 表达在 ESCC 组织中的相关性。*p < 0.05。3.4. 环 TTC17 海绵化的 miR-145-5p 在 ESCC 细胞进展中此外，作者评估了环状 TTC17 对 miR-145-5p 表达的作用。circ-TTC17 过表达质粒提高了 KYSE180 和 KYSE30 细胞中 circ-TTC17 的表达（见图 4A）。miR-145‐5p 表达通过环 TTC17 敲低增加，环 TTC17 过表达则减少（见图 4B）。抗 miR-145-5p 有效逆转了 si-circ-TTC17 介导的 miR-145-5p 表达增加（见图 4C）。miR-145-5p 抑制剂反转了 si-circ-TTC17 介导的细胞增殖、转移和凋亡的 y 效应（见图 4D–G）。通过检测 KYSE180 和 KYSE30 细胞的生存率和自噬标记蛋白的表达，miR-145-5p 抑制剂还通过逆转环 TTC17 对自噬的抑制作用，抑制了 ESCC 细胞对辐射的敏感性（见图 4H–J）。环 TTC17 通过海绵化 miR-145-5p 调控 ESCC 进展。（A） 通过 qRT-PCR 检测了环 TTC17 过表达质粒在 KYSE180 和 KYSE30 细胞中的转染效率。（B）进行了 QRT-PCR 检测以评估环状 TTC17 对 miR-145-5p 表达的影响。（C） 通过 qRT-PCR 测量 miR-145-5p 表达，以确定抗 miR-145-5p 的转染效率。细胞增殖、凋亡、迁移、入侵、放射敏感性和自噬分别通过 CCK8 检测（D）、流式细胞术（E）、透孔测定（F–G）、菌落形成分析（H–I）和 WB 分析（J）检测。*p < 0.05。3.5. miR-145‐5p 在 ESCC 中靶向 SIRT1同样，星际基地软件预测 miR-145-5p 的下游靶 mRNA 更多。通过文献检索，作者选取了八种在 ESCC 中表达高度且促进 ESCC 进展的 mRNA 作为候选 mRNA。进一步分析显示，miR-145-5p 的过表达仅抑制 LASP1 和 SIRT1 水平，SIRT1 的下调最为显著（见图 S2B）。因此，SIRT1 被选中纳入作者的研究。它们的结合位点如图 5A 所示。miR-145‐5p 显著降低 SIRT1 的 3′UTR‐WT 荧光素酶活性，Ago2 中 miR-145-5p 和 SIRT1 的富集增加（见图 5B–E）。此外，SIRT1 在 ESCC 组织中表达较高（见图 5F），与 miR-145-5p 表达呈负相关（见图 5G）。SIRT1 的蛋白表达与 ESCC 组织中的 mRNA 结果一致（见图 5H）。此外，SIRT1 mRNA 和蛋白质水平在 ESCC 细胞中显著促进（见图 5I，J）。此外，miR-145-5p 表达的检测证实了 miR-145-5p 拟态和抑制剂的有效性（见图 5K）。miR-145‐5p 过表达抑制 SIRT1 表达，而 miR-145‐5p 抑制剂则有相反效果（见图 5L）。miR-145-5p 靶向 ESCC 中的 SIRT1。（A）呈现了 miR-145-5p 与 SIRT1 3′UTR 之间的结合序列。该相互作用通过双荧光素酶报告测定（B–C）和 RIP 检测（D–E）验证。（F） QRT-PCR 用于检测 ESCC 组织（T）及邻近正常组织（N）中的 SIRT1 mRNA 表达。（G） SIRT1 与 miR-145-5p 表达之间的相关性通过皮尔逊相关系数分析进行了评估。（H） 通过 WB 分析确定 SIRT1 在 T 和 N 中的蛋白质表达。分别使用 qRT-PCR （I）和 WB 分析（J）测量 ESCC 细胞系和 HEEC 细胞中 SIRT1 的 mRNA 和蛋白水平。（K） 利用 qRT-PCR 评估 miR-145-5p 拟株和抑制剂的转染效率。通过 WB 分析确定了 KYSE180 和 KYSE30 细胞中的 SIRT1 蛋白表达。*p < 0.05。3.6. miR-145‐5p 通过 SIRT1 抑制 ESCC 进展为确认 SIRT1 参与 miR-145-5p 对 ESCC 进展的调控，进行了救援实验。SIRT1 过表达质粒逆转了 miR-145-5p 对 SIRT1 表达的模拟介导抑制作用（见图6A）。miR-145-5p 抑制了细胞增殖并促进细胞凋亡，而这些效应则被 SIRT1 过度表达消除（见图 6B，C）。SIRT1 过表达还可能逆转 miR-145-5p 介导的细胞迁移和入侵抑制（见图 6D，E）。此外，miR-145-5p 过表达通过抑制细胞自噬增强了 ESCC 细胞的辐射敏感性，而 SIRT1 的加入也可能逆转这些效应（见图 6F–H）。miR-145-5p 通过靶向 SIRT1 抑制 ESCC 进展。（A）通过 WB 分析检验了 SIRT1 过表达质粒的转染效率。采用 CCK8 检测法（B）、流式细胞术（C）、透孔测定法（D–E）、菌落形成法（F–G）和 WB 分析（H）分别检测细胞增殖、凋亡、迁移、入侵、辐射敏感性和自噬。*p < 0.05。3.7. circ-TTC17 miR-145-5p 调控 SIRT1 表达为完善环状 TTC17/miR-145-5p/SIRT1 调控网络的假说，作者测量了环状 TTC17 对 SIRT1 表达的影响。如图 7A、B 所示，环 TTC17 敲低可能抑制 KYSE180 和 KYSE30 细胞中的 SIRT1 蛋白表达，而 miR-145-5p 抑制剂则逆转了这一效应。因此，SIRT1 表达由环 TTC17 和 miR-145-5p 调控。circ-TTC17 和 miR-145-5p 调控 SIRT1 表达。通过 WB 分析测量 SIRT1 蛋白表达，评估环状 TTC17 和 miR-145-5p 对 KYSE180（A）和 KYSE30（B）细胞 SIRT1 表达的影响。*p < 0.05。3.8. 敲低环状妊娠-TTC17 重新训练的 ESCC 肿瘤生长最后，作者构建了 ESCC 小鼠异种移植模型。监测 27 天后，sh-circ-TTC17 组和 IR 治疗组的肿瘤体积和体重显著减少，而 sh-circ‐TTC17+IR 组的效应更为明显（见图 8A，B）。作者还通过检测肿瘤组织中的环 TTC17 表达，确定了 sh-circ-TTC17 转染的有效性（见图 8C）。进一步检测确认，在 sh-circ-TTC17 组中 miR-145-5p 上调，SIRT1 蛋白表达降低（见图 8D，E）。作者的数据表明，环绕 TTC17 敲低可能通过 miR-145-5p/SIRT1 轴抑制 ESCC 肿瘤生长。体内敲低环状妊娠妊娠-TTC17 重新训练的 ESCC 肿瘤生长。在有无辐射的情况下，测量了 sh-circ-TTC17 组和 sh-NC 组的肿瘤体积（A）和肿瘤重量（B）。（C–D）使用 QRT-PCR 检测各组中 circ-TTC17 和 miR-145-5p 的表达。（E） WB 检查了每组 SIRT1 蛋白水平。*p < 0.05。 总结 总之，作者的结果显示，环状 TTC17 通过靶向 miR‐145-5p/SIRT1 网络调控 ESCC 的进展。因此，作者推测环状 TTC17 可能是 ESCC 的致癌基因，这些发现具有重要的临床意义。本研究首次揭示了环状 TTC17 调控 ESCC 进展的分子机制，为深入理解环状 TTC17 促进 ESCC 作用提供了新见解。
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