课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（1课时）
主备人：
【课程目标】：研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定.
【课程重点】：对土样的选取和选择培养基的配制
【课程难点】：对分解尿素的细菌的计数
【学习过程】：
一．基础知识
1．尿素是一种重要的氮肥，农作物_______（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为__________________，这是因为细菌能合成________。
分解尿素的细菌主要有，，。
2．科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为______________________________，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是______________________________________
__________________________________________________________________。
点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
3．选择培养基是指__________。
〖思考1〗P22左上方，在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是________，提供氮源的的是___________，琼脂的作用是_____________。
〖思考2〗该培养基对微生物____________（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是______________________________。
例如：缺乏__________的选择培养基可用来分离固氮微生物
缺乏__________的选择培养基可用来分离自养微生物
二．统计菌落数目
1．在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是_______________。除此之外，_______________________也是测定微生物数量的常用方法。
【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。
公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量
2．采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于_____________________。通过统计_________________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在___________________的平板进行计数。
〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是______________________________________________________________________________。
〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是_____________________。
〖思考5〗第_______位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是_______________________________________________________________________。
3．统计的菌落数比活菌的实际数目_______。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是____________菌落。因此，统计结果一般用______________来表示。
三．设置对照
1．设置对照的主要目的是_____________________________________________________
2．对照实验是指除了_________的条件外，其他条件都____________的实验。满足该条件的称为____________组，未满足该条件的称为_________________组。
〖思考6〗请设计本实验的对照实验组：
方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。
方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。
3.方法：
①空白对照：不给对照组任何处理因素
②条件对照：给对照组施以部分实验因素，但不是所要研究的处理因素
③自身对照：对照和实验都在同一研究对象上进行
④相互对照：不单设对照组，而是几个实验组相互对照。
4.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
3．土壤微生物主要分布在距地表__________的近中性土壤中，约___________为细菌。
4．分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是___________________________，其目的是保证获得___________________________的平板。细菌稀释度为_______________，放线菌稀释度为____________________，真菌稀释度为_____________________。
5．培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在______________培养1～2d，放线菌一般在_______________培养5～7d，霉菌一般在______________的温度下培养3～4d。
6．在菌落计数时，每隔________统计一次菌落数目。选取______________________时的记录作为结果，以防止_______________________而导致遗漏菌落的数目。
点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。
7．菌落的特征包括_______________________________等方面。
〖思考8〗土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？
________________________________________________________________。
8．实验过程
1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要__________。
2）应在火焰旁称取土壤___________g。将称好的土样倒入盛有___________mL无菌水的______________中，塞好棉塞。
3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在___________旁进行。
4）实验时要对___________作好标记。注明____________________________________等。
5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当____________________。
〖思考9〗在研究未知微生物时务必规范操作，以防被__________________感染，实验后一定要洗手。
五．结果分析与评价
1．对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助__________________的方法。
2．在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的______将尿素分解成了____。氨会使培养基的碱性_____，PH______。因此，我们可以通过检测培养基_____变化来判断该化学反应是否发生。
3．在以_______为唯一氮源的培养基中加入_________指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变_______，说明该细菌能够______________。
〖思考10〗测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到____________培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现_______色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取____个水样。
六.课堂总结、点评
临猗中学生物科学案年级：高二班级：姓名：
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菌落计数
配制土壤溶液
系列稀释
涂布平板与培养
实验方案
土壤中尿素分解菌的分离与计数
分离筛选微生物的原理
有利于目的菌株生长
抑制或阻止其他微生物生长
人为
条件
微生物计数方法与原理
稀释涂布平板法
显微镜直接计数
对照设置与重复设置
实验设计
实验操作
结果与分析
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