注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合
平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？问题讨论半固体培养基：2.不同的微生物往
往需要采用不同的培养基配方2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方3.不管哪种培养基，一
般都含有水、碳源、和氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。1000mL牛肉膏蛋白
胨培养基的营养构成氢元素、氧元素H2O定容在1000mL无机盐NaCl5g氮源和维生素蛋白胨10g碳源、磷酸盐和维
生素牛肉膏5g提供的主要营养培养基组分?4.培养基的用途?4.培养基的用途液体培养基：增菌、工业生产固体培养基：纯化
（分离），鉴定、活菌计数、保藏菌种半固体培养基：动力检测三、无菌技术三、无菌技术1.无菌技术的
概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中
，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。三、无菌技术（1）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别（
2）灭菌的定义：微生物实验室培养的基本操作程序1.器具的灭菌2.培养基的配制3.培养基的灭菌4.倒平板5.微
生物接种6.恒温箱中培养7.菌种的保存四、实验操作(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)倒平板操作
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？关于倒平板操作的问题讨论：
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛
有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。关于倒平板操作的问题讨论：2.为什么需要
使锥形瓶的瓶口通过火焰？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基
。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的
培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？4
.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生
物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。（二）纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平
板法微生物的接种技术：平板划线的操作方法问题讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线
操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为
了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线
时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2
.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答
：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线
条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处
生长，会形成一个条状的菌落。稀释涂布平板法微生物的实验室培养是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。一
、微生物微生物病毒细菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界真菌界病毒界是一切肉眼看不见或看不清楚的微小
生物的总称。一、微生物?1.分类特点：小简低微生物病毒细菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界
真菌界病毒界是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。?1.分类一、微生物?2.病毒病毒的结构病毒
SARS冠状病毒、禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）病毒的增殖细菌的外形与大小?3.细菌A.球菌
B.杆菌C.弧菌常见的细菌三种典型形态ABC细菌的结构芽孢：细菌形成的椭圆形的
休眠体芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度
、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。异养菌：腐生菌寄生菌大部分病原菌细菌的营养类型
根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。自养菌：异养菌：腐生菌寄生菌大部分病原菌
光能自养型：光合细菌细菌的营养类型根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。自养菌：异养菌：腐
生菌寄生菌大部分病原菌光能自养型：光合细菌化能自养型：硝化细菌，铁细菌，硫细菌细菌的营养类型根据
细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。自养菌：菌落单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成
一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。细菌的菌落特征因种而异菌落?4.
放线菌⑴结构：单细胞原核生物分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）（2）繁殖孢子丝|孢子链霉素、土霉素、四环素、
氯霉素、红霉素、庆大霉素微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是由放线菌产生的⑶应用:?5.真菌酵母菌酵母菌和霉菌
青霉生殖腐生生活孢子生殖?6.营养及功能?微生物化学元素组成：?6.营养及功能C、H、O、N、P、S?微生物化学
元素组成：?6.营养及功能C、H、O、N、P、S?五大营养物质碳源氮源生长因子水无机盐?微生物化学元素组成：二
、培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、半固体培养基。（2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分分：天然培养基和合成培养基。?1.培养基的类型固体培养基：菌落液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长 |
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