大肠杆菌的培养和分离学案
1．微生物是指结构、形体的细胞、细胞或细胞结构的生物，如。绝大多数微生物与传染病无关，对人类，有多种用途。
2．细菌是单细胞的生物，从形态上分为菌、菌、菌（弧菌）。细菌结构上，有，无，只有一环状。有些细菌外有荚膜和鞭毛。有些细菌在不良的环境条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做。当环境适宜时，休眠体又可以萌发，形成一个细菌。细菌繁殖方式:繁殖，速度很快。单个细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做。他是鉴别菌种的重要依据。细菌在基因工程中应用广泛，可为其提供载体，也可作为细胞。细菌用革兰氏染色法分为革兰氏菌和菌两大类，区别在的成分不同。大肠杆菌是革兰氏、厌氧的肠道菌。
3．培养基按物理状态分：培养基、培养基、培养基。其中液体培养基常用于工业生产、扩增细菌，半固体培养基可观察微生物的运动，固体培养基用于微生物的分离、提纯、鉴定，活菌计数和保存菌种。细菌扩大培养要用培养基，细菌分离要用培养基。细菌的分离方法有两种：和。是消除的通用方法，也是用于高表达量菌株的最简便方法之一。划线分离法，方法；涂布分离法，单菌落，但操作。不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方，细菌，霉菌。通常细菌培养基要用和提取物来配制，还要加入一定的，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用配制或豆芽汁即可。尽管培养基的配方各不相同，但一般都含有、、和等营养物质。另外还需要满足微生物生长对、、等的要求。如细菌要霉菌要
通常用于，如果各种器皿用此法灭菌，灭菌后放入的烘箱中烘干，再放到，打开和过滤风，灭菌min。
比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 较为温和 大部分致病的微生物 不能[来源:学|科|网] 强烈 全部微生物 能 5.大肠杆菌的培养和分离实验操作
培养基的配置与灭菌
倒平板
（1）培养基灭菌后，需要冷却到℃左右时，才能用来倒平板
（2）灭菌及消毒：超净台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用消毒
（3）操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在旁操作.
（4）使锥形瓶通过灼烧，再向培养皿倒入培养基。
（5）倒入培养基后，立即将培养皿置于，并轻轻晃动，使培养基铺满底部形成。
（6）平板冷凝后，要将平板.
（7）在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板不能用来培养微生物
大肠杆菌的扩大培养
（1）在超净台的酒精灯火焰旁从斜面上用接种环取菌;
（2）取菌前接种环要用酒精灯灼烧灭菌,后方能取菌;
（3）取菌后封口膜和棉塞复原.
大肠杆菌的划线分离
（1）接种环只蘸菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.操作第一步、每次划线之前及操作结束之后都需要接种环。
（2）划线首尾
（3）划线后,培养皿培养12～24h。（是因为培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落见相互影响，很难在分成单菌落，达不到分离的目的。）
涂布分离时，需要先将培养的菌液，通常稀释到10-5～10-7之间，然后去ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的培养基上，用涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。通常每个培养皿中有的单菌落为最合适。
大肠杆菌分离后保存
将每个菌落分别接种在斜面上，37℃培养24小时，菌落长成后置于冰箱保存。
四、练习反馈
4.某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：
（1）培养基中加入化合物A的目的是筛选_________，这种培养基属于选择培养基。
（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的__________，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是__________。[来源:学_科_网Z_X_X_K]
A含量_______的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量______。
（4）转为固体培养时，常采用______的方法接种，获得单菌落后继续筛选。[来源:学,科,网]
________的方法进行计数，以时间为横坐标，以___________为纵坐标，绘制生长曲线。
（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行______处理后，才能倒掉。[来源:学科
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