梅毒实验室诊断技术及进展梅毒暗视野镜检结果梅毒暗视野采样可用DFA检测的皮损暗视野显微镜检测诊断一期
梅毒、二期梅毒时，可取患者的渗出液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下观察螺旋体的特征性形态和运动方式暗视野镜检的注意
事项清洁皮损钝刮器要消毒，取材时要避免出血立即置于镜下观察口腔溃疡标本，应与其他螺旋体相区别镀银染色法直接免疫荧光
检测临床意义诊断早期梅毒的最佳方法阳性可确证如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。受患者不规则用药或局部使用消毒剂
等因素的影响。必要时可在3～6d重复检查2～3次。兔感染试验（RIT）利用家兔对梅毒螺旋体的易感性，把梅毒螺旋体注射于
成年新西兰白兔睾丸内，观察有无感染亦象。RIT是经典的梅毒诊断方法，由于其费用高、检查时间长等弊病目前仅用于科学研究。基因诊断
技术的应用先天梅毒、潜伏梅毒、神经梅毒、早期梅毒、艾滋病合并梅毒感染者。损伤部位的分泌物、血清、脑脊液、羊水和组织等标本均可用
于PCR检测梅毒螺旋体。梅毒抗体检测感染梅毒后的体液免疫（1）感染梅毒后首先产生TPIgM抗体，感染后2周即可检出，并
且只要有活的梅毒螺旋体存在，不断予以抗原刺激，其TPIgM将会维持在一定的水平。经治疗TPIgM抗体阴转在一期梅毒为3个月，
二期梅毒为9个月，潜伏梅毒为2
年。TPIgM的消失，提示体内没有活的梅毒螺旋体存在，可以推断已经丧失传染性，可以继续随访或判愈。再感染时又出现阳性，因此I
gM抗体的存在是活动性梅毒的表现。感染梅毒后的体液免疫（2）胎儿在宫内感染梅毒螺旋体后，胚胎晚期（6～9个月）已能合成IgM抗
体，出生后第3个月开始形成IgG抗体。母亲IgM抗体不能通过胎盘，而IgG抗体能通过，如在患儿血清中测出TPIgM，是诊断先
天梅毒的有力证。梅毒螺旋体IgM抗体的测定有利于作出以下判断：(1)先天性梅毒(2)早期一期梅毒(3)判断梅毒螺旋体的
再感染(4)非梅毒螺旋体试验血清阳转前的早期感染患者的判愈试验感染梅毒后的体液免疫（3）感染梅毒4周左右产生TPIgG
抗体，即使经过足量的抗梅毒治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，IgG抗体仍可以通过记忆细胞的作用继续产生，甚至终身在血清中可测出。
感染梅毒后的体液免疫（4）非特异性抗体：梅毒螺旋体感染人体，在3～4周产生抗类脂抗原的抗体（反应素）。这些抗体主要是IgG和
IgM型混合抗体。这种抗体仅能供梅毒血清学诊断，本身无保护作用。未经治疗的患者，其血清内的反应素可长期存在。经适当治疗后，抗体可
以逐渐减少至转为阴性，因此可用于疗效观察及判愈。非梅毒螺旋体血清试验所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都一样,其基本
成分是心磷脂、卵磷脂和胆固醇。抗原抗体结合形成复合物凝集成网状沉淀。适用于筛查与普查疗效观察鉴别先天性梅毒与反应素血
症（由生母的反应素通过胎盘至胎儿血中）如无感染，生后3－4月内可自动转阴。如不减反升可诊断先天梅毒性病研究实验室试验（VDR
L试验）0.03%心磷脂0.21%卵磷脂和0.90%胆固醇组成该抗原需新鲜配制不能保存待检血
清需灭活主要用于脑脊液检查排除血液污染的情况下可诊断神经梅毒神经性梅毒的脑脊液细胞计数和蛋白水平通常升高。VDRL结
果不加热血清反应素试验（USR试验）是VDRL试验的改良抗原是心磷脂卵磷脂和胆固醇还有乙二胺四醋酸(EDTA)，
使抗不会变质可长期保存能维持一年含有氯化胆碱，对血清能起到化学灭活的作用不必加热灭活制成试剂盒，但仍然要在
显微镜下观察结果RPR环状卡片试验在USR试剂成分的基础上加入黑色碳颗粒作为沉淀的指示物用白色的硬纸片替代玻片
血清不需要灭活不需要显微镜观测结果可作定量试验有现成的试剂盒，携带方便操作简单,价格便宜试验的结果可长期保存甲苯胺红
试验(TRUST)其原理和成分与RPR试验相同用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒其余的特点均与RPR相同甲苯胺红试验(TR
UST)TRUST法的检出率和重复性都强于RPR法，这可能与TRUST试剂中表面包裹有抗原的甲苯胺红颗粒比RPR试剂中的活性炭
颗粒小、更耐受振荡而使TRUST试剂的稳定性较强有一定的关系。RPR结果TRUST结果非梅毒螺旋体血清试验方法的敏感性与特
异性比较梅毒螺旋体血清试验TPPATPHAFTA－ABS敏感性与特异性高。滴度变化与梅毒是否活动无关，不可作为疗效评价
或复发与再感染的指标。在一期梅毒阶段治疗的患者15%－25%可在2－3年后转阴梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)TPHA
的试验血球是用经过醛化和鞣化的生物细胞(火鸡红细胞或羊红细胞）做抗原载体，吸附从兔睾丸中提取的粗制梅毒螺旋体粉碎物抗原。
对照血球是没用上述抗原包被的经过醛化和鞣化的生物细胞(火鸡红细胞或羊红胞)。TPPA结果荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA-
ABS)原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标
记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。
荧光密螺旋体抗体吸收试验螺旋体Reiter株是梅毒螺旋体的变种，无致病性，与梅毒螺旋体不一样，它可以进行人工培养。用超声的螺旋体
Reiter株培养物作为患者血清的吸附剂，从而可以通过吸收去除对非致病型螺旋体的交叉抗体。保证了试验结果的特异性，以整条梅毒螺旋体
检测血清中的抗体，确保各种抗原分子的完整存在，提高了敏感性。荧光密螺旋体抗体吸收试验FTA一ABS试验被认为是当前敏感性和
特异性最高的方法，检测梅毒的“金标准”试验。美国常用此试验作为梅毒的确认试验。文献报道，FTA一ABS对各期梅毒检测的特异性达9
2%，敏感性对一期梅毒为80%、二期为99%－100%、三期为95%一100%。梅毒螺旋体免疫印迹试验通过电泳转移硝酸纤维膜
抗原条上含有梅毒螺旋体的各种成分来确认是否感染梅毒。观察15.5KD、17KD和45KD区带阳性：15.5KD、17
KD和45KD显色阴性：15.5KD、17KD和45KD均不显色可疑：15.5KD、17KD和45KD有一
个或两个条带出现梅毒螺旋体免疫印迹试验梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验它是将基因重组表达的梅毒螺旋体抗原如TP47、TmPA等包
被在微孔板上，用双抗原夹心法测定梅毒螺旋体的特异性抗体。双抗原夹心法梅毒螺旋体胶体金试验其原理是应用抗原抗体反应免疫层析
分析技术，定性检测梅毒螺旋体抗体。梅毒螺旋体胶体金试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图 治疗前治疗后
梅毒血清学试验的临床诊断意义梅毒血清学检查临床应用在同一实验室，用同一方法作随访。如两
次试验的滴度相差4倍（2个稀释度），说明有显著变化2种试验的定量结果不可直接比较（如：TRUST结果通常稍高于RPR）合并HI
V感染时，反应有异常变化，可出现滴度过高或过低、假阴性、或滴度上下波动以及阳性反应推迟。HIV感染时，滴度下降也较慢。当有HIV
感染时用常规的血清反应来诊断梅毒及观察疗效可能并不可靠梅毒血清学试验生物学假阳性的常见原因血清学试验的特殊情况前带现象（
Prozonephenomenon)在二期梅毒中临床症状很明显但RPR试验为弱阳性或阴性,此时,应该将血清稀释
后再作,会出现阳性结果。这种情况称为前带现象。发生率为1％～2％，发生的原因主要是血清中抗体量过多与抗原量的比例不合适抑制
了阳性反应的发生。血清学试验的特殊情况血清固定（sero-fixation）：早期梅毒治疗后，按规定时间（6个月）随访
如血清仍不转阴，或超过2年血清不阴转，晚期梅毒治疗后，按规定时间（12个月）随访如血清仍不阴转称为血清固定。国内在早期梅毒出现血
清固定的具体时间上,尚无统一标准。有的以2年为限,有的定为1年。有作者认为若时间定在2年,病程已肯定进人晚期,不利于早期诊断
和治疗,如此时才开始复治,不符合梅毒治疗的早期足量规范的原则,早期梅毒6个月、晚期梅毒12个月较为合理。血清固定的原因1、早
期梅毒治疗量不足、治疗不规则抗梅药物的使用对治疗梅毒至关重要。用抗梅药物计量要充足,疗程要规则。目前理想的药物首选苄星青霉
素和普鲁卡因青霉素,并肌肉注射给药。血清固定的原因2、梅毒的病期、类型、开始治疗的梅毒的病期、类型、开始治疗的时间早晚。
Fiumara等按规定用苄星青霉素对128例晚期潜伏梅毒患者行驱梅治疗,结果有72例(56%)患者血清反应持续阳性。而
按常规对588例一期梅毒患者和623例二期梅毒患者治疗后,所有梅毒患者血清反应均在1年内转阴。血清固定的原因3、曾有过复
发或再感染，体内仍有潜在的病灶存在潜在的病灶存在梅毒患者的性伴应同时进行检查和治疗,治疗期间应避免性生活,否则可能会造成再感染或
复发。关于潜在的梅毒病灶,国外有骨梅毒致血清固定的病例报道,有晚期潜伏梅毒和神经梅毒致血清固定的报道。国内报道对69例经过数疗
程常规驱梅治疗但RPR持续阳性(1年以上)且无神经系统临床表现的梅毒患者的脑脊液进行梅毒抗体检测,结果有16例梅毒患者脑脊液存
在梅毒抗体。认为部分RPR持续阳性梅毒患者存在无症状神经梅毒,可能是RPR持续阳性的原因之一。血清固定的原因4、合并有其他
疾病当梅毒患者合并麻风、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、干燥综合征、桥本甲状腺炎、结节性多动脉炎、风湿性心脏病、HIV以及
静脉吸毒时,阳性持续时间可长达数年或终身。Smith等对31例合并有HIV感染的梅毒患者进行治疗,有5例发生了血清固定。
血清固定的原因5、机体内细胞免疫受到抑制Shetsiruli等,发现T淋巴细胞总水平是降低的,而B淋巴细胞和抗原反应
细胞的总水平却是升高的。Yuldashev等发现34例血清固定型患者的T淋巴细胞平均水平比对照组低了28%,B淋巴
细胞比对照组高了23%。证实了机体的细胞免疫受到抑制。CD4淋巴细胞均低于对照组,而CD8及NK淋巴细胞高于对照组,差异有显
著性,亦提示血清固定梅毒患者存在明显的细胞免疫不平衡和免疫抑制。老年人的梅毒血清学试验一般低危人群(普通门诊和住院患者)梅毒
血清学试验，71～80岁者阳性率3.02%～3.15%,占阳性者中的27.7%～27.9%。而且常常是几种试验方法检测的结果同时
阳性。老年人的梅毒血清学试验假阳性的原因（1）这些老年患者所患的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和/或抗T.pal
lidum抗体的交叉抗原;（2）这些老年患者体内可能其他类的螺旋体共生,诱导产生抗属、群或科特异抗原的交叉反应抗体;（3）目
前试验所用的检测梅毒螺旋体抗体市售商品试剂盒中,除FTA-ABS配有吸收剂外,其他如TPPA、金标记免疫层析、ELISA等均未配置
吸收稀释剂,待测血清均未用吸收剂去除与非梅毒螺旋体交叉反应的抗体。筛查的应用一般认为，感染梅毒后可检测出阳性结果的顺序通常
是:FTA－ABS试验－非特异性试验－TPPA试验。非特异性试验由于操作简易、费用低廉，常梅毒的筛查。筛查的应用但在以早
期诊断为目的的情况下，可用几种方法同时进行检测，常用的是一种或两种非特异性试验和一种特异性试验联合检测，一般选用RPR和(或)TR
UST试验与TPPA试验配合使用。一般来说，筛检试验允许有假阳性，但应尽可能没有假阴性结果。确诊的应用检测梅毒螺旋体特异性抗
体的方法，如TPPA、TPHA、ELISA、WB、胶体金等均可用于梅毒确诊。观察病情和治疗效果的应用早期梅毒经治疗后，非特异
性反应素滴度一般很快下降甚至转阴。TRUST及RPR等方法检测梅毒在治疗过程中的非特异性抗体的滴度变化，可进行病情及治疗效果的监测
及复发和再感染的判断。特异性实验一般不能观察滴度变化，如梅毒患者经充分治疗并显示临床成功后，TPPA试验的阳性会持续相当长时间，
甚至终生。献血筛检的应用由于梅毒螺旋体在4℃放置3天后就可死亡，因此，输注在4℃血库存放3天以上的血液发生输血感染梅毒的危
险不大。但如果输入梅毒螺旋体感染者的新鲜全血或机采血小板，就可发生梅毒感染。经输血感染梅毒的潜伏期平均为9-10周，受血者感染梅毒
螺旋体后就直接进入梅毒第二期。因此，大多数国家都规定必须对献血者进行梅毒试验，防止经输血传播梅毒。我国规定，血站必须对献血者血液
使用两个不同厂家生产的试剂进行两次梅毒检测，检测梅毒的方法可以是RPR法、TRUST法或ELISA法。谢谢
！TPPATPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试
验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红色，在操作部步上
也较为方便，出结果较快。先天梅毒的诊断标准梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图治疗前治疗后
早期梅毒治疗后或极早期梅毒﹢﹢﹣生物学假阳性﹣﹣﹢现症梅毒(梅毒孕妇所生婴儿除外)或治愈的晚期梅毒
﹢﹢﹢艾滋病患者合并梅毒一期梅毒的早期/极晚期梅毒﹣﹣﹣排除梅毒VDRLFTA-ABSTPHARPR意义TPPAUSR血清学试验福建省疾病预防控制中心张春阳梅毒抗原检测行动缓慢而有规律围绕其长轴旋转中前后移动伸缩其圈间之距离而移动全身弯曲如蛇行利用梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，通过普通高倍显微镜进行观察。国外采用较多的方法，其特异性和敏感性均优于暗视野检测，将特异性的抗梅毒螺旋体单克隆抗体用荧光素标记，如标本中存在梅毒螺旋体，则通过抗原抗体特异性结合，在荧光显微镜下可见黄绿色的梅毒螺旋体。梅毒血清学试验的分类非梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验阴性弱阳性强阳性 |
|
