第28卷第3期
2009年8月
河南大学学报(医学版)
HenanUniversity(MedicalScience)
Vol_28
Aug．
NO．3
2009
HPLC法测定雪上一枝蒿速效止痛搽剂中雪上一枝蒿甲素
来国防，黄娠，林文涛。，周平。，王梅
(1_云南省食品药品检验所，云南昆明6500n；2．嘉兴学院医学院浙江嘉兴314001；3．昆明市字斯药业有限
公司，云南昆明654100)
摘要：日的：建立HPIC法测定雪上一枝蒿速效止痛搽卉]中雪上一枝蒿甲素的方法。方法：采用WatresSunfire
Cl8(4．6mm×250mlTl，5m)色谱柱；以甲醇一磷酸盐缓冲溶液(pH7．3)(65：35)为流动相；检测波长：210nm；
体积流量：1．0mI／min。结果：雪上一枝蒿甲素在33．6mg／1～268．8mg／l线性关系良好，相关系数
r=0．99998，平均回收率为96．8O，RSD为l_89％(n一6)。结论：拳方法简便快速、准确．可为评价雪上一枝
篙速效止痛搽剂质量提供依据。
关键词：雪上一枝蒿甲素；高效液相色谱法；雪上一枝蒿速效止痛搽剂
中图分类号：R286文献标识码：A文章编号：1672～7606(2009)03—0168—02
De--onofRuilatineAinⅪleshanih踟SllNiaoan0艘linimentthHPLC
IAIGuo—fang，HUANGXuan，LINWen—tao。，ZHOUPing，WANGMei
(1．YunnanInstituteforFoodandDrugConlrol，Kunming，Yunan65001l，China2．(''ollegeo,／Medicineo／
JiaxingUniversity，Jiawing，Zhejiang314001．China3．KunmingYusiMedi~、alCo．，Ltd．，Kunming，Yunan
6541O0，China)
Abstract：Objective：1、OestablishthemethodforthedeterminationofBullatineAinXLleshangyizhihaoSuxiao
anodynelinimentwithHPIC．Method：AWatresSunfireC18column(4．6mm×250mm，511m)，andamobilephase
consistedofphosphatebuffer(pH7．3)一methanol(35：65)wereused，theUVdetectorwavelengt11was210nm，
andtheflowratewas1．0mI／min．Results：BullatineAshowedagoodlinearrelationshipattherangeof33．6mg／I
～268．8t~g／m1，r：0．99998，Therecoveryratewas96．80，andRSDwas1．89(n一6)．Conclusion：Fhe
methodissimpleandaccurateforBullatineAinXXueshangyizhihaoSuxiaoanodyneliniment．Keywords：Bullatine
A；HPI，C；XueshangyizhihaoSuxiaoanodyneliniment
雪上一枝蒿速效止痛搽剂由雪上一枝蒿、生川
乌、生草乌、红花、川芎、重楼等成分组成，具有舒筋活
血、消肿止痛的功效。其标准收载于《中华人民共和
国卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册[。原标
准含量测定方法为紫外分光光度法测定雪上一枝蒿
总碱含量，由于样品中含有多糖、色素等杂质，此方法
存在干扰大，重现性差。因此，本实验采用高效液相
色谱法，以雪上一枝蒿甲素为定量指标进行了测定．
为该制剂的质量控制提供了保证。
1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪(美国Agilent公
司)；AI204型电子天平(MettlerToledo)；雪上一枝
蒿甲素(批号：895—2060001)对照品山中国药品生物
制品检定所提供；甲醇为色谱纯；水为二：次蒸馏水；其
余为分析纯；雪上一枝蒿速效止痛搽剂(规格：3Oml／
瓶)，昆明市宇斯药业有限公司提供。
2方法与结果
2．1色谱条件
色谱柱WatresSunfireCl8(4．6HIm×250mm，
5“m)；流动相：甲醇一磷酸盐缓冲溶液(取磷酸氢二
钠1．97g，磷酸二氢钾0．22g，加水溶解并稀释至
1000ml，用体积分数80的磷酸溶液调节pH至
7．3)(65：35)；检测波长：210nm；体积流量：1．0ml／
rain；进样量：1Ol。
收稿日期：2009—04—21
基金项目：云南用基础研究项日(2007C258M)，国家科技支撑计划项目(2006BAIl4I3—2)
作者简介：来目(1973一)，男，河南柘城人，博t，剐丰ft药师，从事中草药活成分及c1l约质：l；=标准研究。
来国防，等：HPI，C法测定雪上一枝蒿速效止痛搽剂中雪上一枝蒿甲素169
2．2供试品溶液的制备
精密量取本品溶液1Oml，置蒸发皿中，在水浴
上蒸去乙醇，加水10ml，用稀盐酸调节pH2～3，转
移至分液漏斗中。用适量0．1mol／I盐酸溶液洗涤
转移(必要时用少量氯仿溶解)，使酸层总量约25
ml，用氯仿轻摇洗涤2次(10ml、5m1)，合并氯仿液。
用0．1mol／I盐酸溶液洗涤2次(5ml、3m1)合并入
上步盐酸溶液中，加入氯化钠2g，轻摇溶解，用氨试
液调节pH至9～1O，用氯仿振摇提取4次(20ml、20
ml、20ml、10m1)，合并氯仿液，滤过。加入适量无水
硫酸钠脱水，滤过，收集滤液，残渣用氯仿洗涤2次(5
ml，5m1)合并滤液，于60℃水浴上挥至近干，加入无
水乙醇1ml，自然挥干。加甲醇适量使溶解，并转移
至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续
滤液，即得。同法制备缺雪上一枝蒿的阴性样品溶
液。
2．3对照品溶液制备
精密称取雪上一枝蒿甲素对照品适量，加甲醇制
成每lml含65g的溶液，即得。
2．4线性关系考察
精密称取雪上一枝蒿甲素对照品42．00mg，置
50ml量瓶中。加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精
密量取1．0ml、2．0ml、3．0ml、4．0ml、6．0ml、8．0
m1分别置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至并定容至
刻度，分别精密吸取上述溶液1Ol注入液相色谱
仪，测定峰面积值。以峰面积的积分值为纵坐标，质
量浓度为横坐标，绘制标准曲线，并以最小二乘法计
算得回归方程：Y=7．12526—0．08X，r=0．99998，
结果显示雪上一枝蒿甲素在33．6mg／L～268．8
mg／I范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2．5精密度试验
取雪L一枝蒿速效止痛搽剂供试品溶液和雪上
一枝蒿甲素对照品溶液，重复进样6次，测定雪上一
枝蒿甲素峰面积，结果RSD分别为1．16和
0．92。
2．6稳定性试验
取雪上一枝蒿速效止痛搽剂供试品溶液于室温
(20℃～25℃)下放置，分别于0h、2h、4h、6h、8h、
10h精密吸取1OI进样，测定雪上一枝蒿甲素峰面
积，结果RSD为1．O7，显示供试品溶液在10h内
稳定。
2．7重复性试验
取同一批号样品(08021301)6份，制备供试品
溶液，进样测定，计算其中雪上一枝蒿甲素的质量分
数，结果RSD为1．10。
2．8回收率试验
取雪上一枝蒿速效止痛搽剂5ml(批号：
08021301含雪上一枝蒿甲素77．20rag／L)，各6份，
分别精密加入雪上一枝蒿甲素对照品溶液(浓度
0．084g／I)4ml、5ml、6ml，制备供试品溶液，测定峰
面积并计算回收率，结果雪上一枝蒿甲素的平均回收
率为96．80，RSD为1．89。
2．9样品测定
取本品5批，批号分别为06052701、06051101、
07111801、08010601、08021301样品，制备供试品溶
液，按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中的雪
上一枝蒿甲素的质量分数，结果分别为：71．56mg／
I、74．19mg／I、76．71mg／I、67．44mg／I、77．2O
mg／I。根据5批样品测得的雪上一枝蒿甲素的含量
为67．44mg／I～77．20mg／I，可暂拟定本品中每ml
雪上一枝蒿甲素的总量不得少于50．0fig。
3讨论
参考相关文献[2—5]及国家药品监督管理局国
家药品标准骨痛灵酊标准雪上一枝蒿甲素含量测
定]。经试验流动相：甲醇一磷酸盐缓冲溶液(取磷
酸氢二钠1．97g，磷酸二氢钾0．22g，加水溶解并稀
释至1000ml，用体积分数80的磷酸溶液调节pH
至7．3)(65：35)雪上一枝蒿甲素与其他组分的分离
度能达到要求，故选用。雪上一枝蒿甲素在紫外可见
分光光度仪上进行扫描，只有末端有弱吸收，故选
210nm为检测波长。
参考文献：
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[4]罗华菲．王浩，黄晓东，等．复方雪上一枝蒿贴剂的研制及
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E63WS3一B-3654—98—2002，国家药品监督管理局国家药品标准
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[责任编辑姬荷]
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