·药剂学·
重组人表皮生长因子凝胶剂的研制
陆兵，谢英华，程度胜，朱厚础（军事医学科学院生物工程研究所，北京100071）
摘要：目的：研制用于创伤修复的重组人表皮生长因子（recombinanthumanepidermalgrowthfactor，rhEGF）凝胶
剂。方法：以卡泊姆为水溶性凝胶基质制备rhEGF的凝胶剂，并以大鼠皮肤急性创伤模型和大鼠皮肤烫伤模
型评价了rhEGF凝胶剂在创伤修复中的效果。结果：所得rhEGF凝胶剂制备工艺简单、质量可靠、使用方便，
对于大鼠皮肤急性创伤和大鼠皮肤烫伤具有明显的疗效。结论：rbEGF凝胶剂可望应用于临床。
关键词：表皮生长因子；卡泊姆；凝胶剂；创伤修复
中图分类号：R944.1
+
5文献标识码：A文章编号：1006-0111（2001）03-0143-03
Developmentofrecombinanthumanepidermalgrowthfactorgels
LUBing，XIEYing-hua，CHENGDu-sheng，ZHUHou-chu（InstituleofBiotechnology，AcademyofMilitaryMedicalSci-
ence，Beijing100071，China）
ABSTRACT：OBJECTIVE：Todeveloprecombinanthumanepidermalgrowthfactor（rhEGF）gelsforexternalapplication
towoundhealing.METHODS：Carbopol
!
wasusedaswater-soluablematrixtopreparerhEGFgels.Thewoundhealingef-
fectsofrhEGFwereevaluatedinacutetraumaticratsandscaldedrats.RESULTS：rhEGFgelscouldbemanufactured
easilywithreliablequality.Theycouldalsobeappliedconvenientlytoacceleratewoundhealinginacutetraumaticrats
andscaldedrats.CONCLUSION：SuchrhEGFgelscouldbedevelopedfortheclinicalapplication.
KEYWORDS：recombinanthumanepidermalgrowthfactor；carbomer；gels；woundhealing
人们对表皮生长因子（epidermalgrowthfactor，
EGF）在创伤愈合中的作用已经有共识，尤其对于难
愈合创面的修复，其作用更为明显
［1～6］
。目前，古巴
的重组人表皮生长因子（recombinanthumanEGF，
rhEGF）与磺胺嘧啶银的复方制剂已经上市，国内也有
数家单位正处于研发阶段
［7，8］
，有的已获国家药品监
督管理局的批准。本单位的rhEGF冻干粉剂已于
2000年4月获得国家一类新药证书（2000S-11号），
为了更好地满足临床用药的需要，我们选择以Car-
bopol为主要基质来制备rhEGF的凝胶剂，以期研制
一种临床使用方便、药效持久、稳定性良好的外用制
剂，并用两种动物模型———大鼠皮肤急性创伤模型和
大鼠皮肤烫伤模型———来进行药效学试验，初步评价
了rhEGF凝胶剂对于创伤治疗的效果。
1材料和方法
1.1仪器和试剂
FT-646A微机单头放免仪（北京核仪器厂）；
ZRS-8型智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）；F
-10型酸度计（北京无线电技术研究所）。
rhEGF（纯度：>98%，比活性：>1×10
6
IU/mg。
军事医学科学院生物工程研究所微生物工程室）；人
表皮生长因子放射免疫分析药盒（北京海科锐生物
技术中心）；不同型号Carbopol
!
（美国BFGoodrich公
司惠赠）；AlbuminBovine，FractionV（98～99%Albu-
min，美国SIGMA公司）；透明质酸（上海南源化妆品
辅料厂）；尼泊金丙酯、曲拉通X-100为化学纯。其
余试剂为分析纯。
1.2动物
二级Wistar大鼠30只，
"
。其中用于急性创伤
模型18只，体重224±16g（190g～245g）；用于烫伤模
型12只，体重226±23g（177g～252g）。
1.3凝胶剂的制备与质量控制
凝胶剂制备：称取透明质酸0.05g、乙二胺四乙
酸二钠0.05g、焦亚硫酸钠0.10g、添加剂适量，加水
约80ml，搅溶后加入甘油5.00g和复方尼泊金酯乙
醇溶液（每100ml含尼泊金甲酯10g、尼泊金丙酯1g）
1.00ml，搅匀后加入Carbopol
!
940NF2.00g，搅拌并放
置至溶胀均匀后，加入含1.2mg的rhEGF溶液2ml，
迅速搅匀后加入三乙醇胺适量使中和成透明凝胶，
再加水至100g。
凝胶剂pH测定：凝胶1g加水20ml，溶解均匀后
用酸度计测定pH值。
341药学实践杂志2001年第19卷第3期
凝胶剂的均匀性：凝胶5g置于5ml离心管中，
以2500rpm离心30min，观察是否分层。
凝胶剂的铺展性和可洗除性
［9］
：将凝胶均匀涂
在手背上，观察能否涂抹均匀，并在水龙头下冲洗
30秒钟，观察能否洗除。
凝胶剂的无菌试验：按《中国生物制品规程（一
部）》（1990年版）的“生物制品无菌试验规程”进行。
凝胶剂含量测定：标准曲线按人表皮生长因子
放射免疫分析药盒说明书制作，当凝胶中rhEGF的
浓度为0.1、1和10
μ
g/g时，回收率分别为（90.30±
6.11）%、（95.04±6.09）%和（101.61±9.63）%。含
量测定时，精密称取rhEGF凝胶约50mg，加5ml缓冲
液使溶解均匀后，继续用缓冲液分两次稀释100倍
（使样品液中rhEGF浓度约为1ng/ml）后，取0.1ml
样品液，采用RIA法测定样品液中rhEGF的浓度，并
计算凝胶剂中rhEGF浓度及含量。
凝胶剂的体外释放：参照DiBiase等
［10］
的方法
进行。释放池孔径25mm，深5mm。体外释放条件：
释放介质200ml，浆叶转速50rpm，水浴温度32℃。
凝胶剂的稳定性：凝胶剂适量置于密闭离心管
中，分别于60℃、37℃、室温和冰箱冷藏室（4℃±
3℃）保存，定时检查凝胶剂的外观、失水、酸碱度及
霉败等现象，并取样测定凝胶剂中rhEGF含量。
1.4创伤治疗动物试验
急性创伤模型的建立：大鼠用复方氯胺酮麻醉
后，背部局部用脱毛剂去毛。脱毛大鼠正常喂养
2d，麻醉后于去毛处消毒铺巾后，用龙胆紫在大鼠背
部中央注明相距约2cm的两处致伤部位（直径
1.8cm、面积2.54cm
2
的圆形），然后用手术剪在注明
部位将皮肤全层剪除，制成2个圆形创面。
烫伤模型的建立：同上法脱毛的大鼠正常喂养
2d，麻醉后于去毛处用恒温至80℃的盛水试管（直
径1.8cm）按尽可能相同的程度（角度、力量、时间）
制成约1.5cm
2
的烫伤面，每只大鼠背部制成三个独
立烫伤面，伤口呈三角形分布，间距约4cm。
创伤大鼠的处理：两组创伤模型的大鼠分别随
机分成四组（分别为不同药组、空白凝胶剂组、rhEGF
溶液组和rhEGF凝胶剂组），自第2天起隔日1次按
0.2
μ
g/cm
2
的剂量给予不同剂型的rhEGF或相应量
的空白成份，直至创面愈合。每日进行动物行为及
创面外观的常规观察，隔日测定动物体重和创面面
积。创面愈合后，大鼠颈椎脱位处死，将创伤部位及
周围0.5cm的全皮连同筋膜一起分离，用10%福尔
马林固定后，制备石蜡组织切片，HE染色，光镜观察
组织学特征。
2结果和讨论
2.1rhEGF凝胶剂质量检查
rhEGF凝胶剂为水溶性无色透明、质地均匀的
凝胶制剂，无细菌污染，铺展性和可洗除性良好，凝
胶剂的粘度适合于临床使用。rhEGF凝胶剂的pH
值为7.43±0.05（n=3），含量为标示量的（102.9±
2.0）%（n=3）。体外释放符合零级动力学模式。
不同温度下的稳定性试验表明，rhEGF凝胶剂
置于密闭离心管中60℃保存8d、37℃保存3mo以及
室温和冰箱保存6mo时，凝胶剂几乎没有失水（重量
减少<5%），没有霉败，外观、pH均无变化。室温和
冰箱保存3mo，rhEGF凝胶剂的残留活性分别为
（72.81±6.62）%和（101.63±6.53）%。
2.2急性创伤大鼠治疗结果
大鼠制成急性创伤模型后，基本活动正常，少量
大鼠偶而出现饮食减少，并表现为体重下降，据分析
并非使用rhEGF造成。所制创面清洁无感染，第2
天观察时创面干燥，并已形成完整包裹（凝块）。创
面愈合过程符合一般创伤愈合的规律，治疗期间大
鼠体重增加（88±21）g。总的观察表明，创伤手术、
手术所形成的创面以及使用rhEGF治疗等均对大鼠
的正常生长没有影响。
创伤治疗结果（表1）采用SAS软件包分析，急
性创伤大鼠的平均50%创面愈合时间和终点愈合
时间不同组之间存在显著性差别（P<0.05），其中
50%创面愈合时间rhEGF溶液组与不用药组相比、
终点愈合时间rhEGF溶液组和凝胶剂组与不用药组
和空白凝胶剂组相比均显著缩短（P<0.05），其它
各组两两之间不存在显著性差异。
创面愈合后皮肤的组织学检查发现，空白组和
治疗组大鼠均可见表皮细胞增生活跃，表皮层增厚，
真皮层见大量胶原纤维和成纤维细胞，并与表面平
行排列，有毛囊及皮脂腺长入，偶见少量炎细胞存
在。但不同处理组大鼠间无明显差异。
表1不同治疗组急性创伤大鼠创面愈合
时间（
-
x±SD，d）
不同药组
空白
凝胶组
rhEGF
溶液组
rhEGF
凝胶组
50%创面愈合时间9.6±1.38.6±1.48.1±0.9
9.0±1.2
终点创面愈合时间24.6±2.624.7±2.0
23.0±2.3
23.3±2.6
与不用药组相比有显著性差异（P<0.05）；
与不用药组和空白乳膏剂组相比有显著性差异（P<0.05）。
2.3烫伤大鼠治疗结果
大鼠经烫伤后日常活动及饮食未见异常。1d
441TheJournalofPharmaceuticalPracticeVol.192001No.3
内可见烫伤部位形成水泡，但烫伤面无明显界限。
第3天见烫伤面颜色加深，界限明显，并逐渐形成深
色硬痂。随着治疗的进行，烫伤面逐渐缩小至完全
愈合。
所有大鼠在制备烫伤模型及随后的治疗过程
中，其体重除第1天因为烫伤所引起的一系列组织
反应而略为下降外，以后均正常增长，治疗期间体重
平均增加（78±19）g。结合日常行为观察表明，大鼠
经制成烫伤模型以及随后的治疗对大鼠的正常生长
未见异常影响。
烫伤治疗结果（表2）采用SAS软件包分析，
50%创面愈合时间不同治疗组烫伤大鼠之间存在显
著性差别（P<0.05），其中rhEGF溶液组和凝胶剂
组与不用药组相比均显著缩短（P<0.05）。而平均
终点愈合时间虽然EGF治疗组与两个空白处理组
相比平均缩短了1.6d，但不同处理组之间没有显著
性差别（P>0.05）。究其原因，我们分析是因为在
烫伤模型制备时由于是人为控制。导致烫伤深度相
互间变异增大，而使得烫伤治疗时的终点愈合时间
组内差异也增大。因此提示我们，在rhEGF创伤治
疗的动物试验和临床试验中，一方面要有足够的样
本数，另一方面还应注意创伤程度的均一性。
表2不同治疗组烫伤大鼠烫伤面愈合
时间（
-
x±SD，d）
不同药组
空白
凝胶组
rhEGF
溶液组
rhEGF
凝胶组
50%愈合时间8.9±0.97.8±1.67.3±1.1
6.8±1.4
终点愈合时间15.8±2.814.7±3.413.3±1.913.9±2.0
与不用药组相比有显著性差异（P<0.05）；
取烫伤后3天大鼠的烫伤面皮肤进行组织学考
察，皮肤表面可见大量的炎细胞浸润和血浆蛋白渗
出，炎细胞以中性粒细胞为主，致伤累及真皮浅层，
判定为
Ⅱ
度烧伤。
烫伤愈合后创面皮肤的组织学检查发现，所有
样本均可见表皮细胞增生活跃，皮肤表皮下层见大
量的成纤维细胞和胶原纤维，其间有少量的炎细胞、
毛囊及皮脂腺存在。rhEGF凝胶剂组同其它各组相
比，表皮细胞、毛囊及皮脂腺结构更趋正常，真皮层
胶原纤维和纤维细胞也近似正常组织结构。相比较
而言，采用rhEGF凝胶剂治疗后的创面皮肤与正常
皮肤的组织结构更接近，表明提高了热烫伤模型的
愈合质量。
3结论
在rhEGF粉剂的基础上研制了rhEGF亲水性凝
胶剂。该凝胶剂制备工艺简单、质量可靠、使用方
便，符合外用亲水性凝胶剂的一般质量要求。采用
大鼠皮肤急性创伤模型和大鼠皮肤烫伤模型考察了
rhEGF凝胶剂在创伤治疗中的效果，结果使用rhEGF
凝胶剂可以缩短动物创伤的终点愈合时间，改善愈
合质量。该凝胶剂可望应用于临床。
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收稿日期：2000-11-29
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541药学实践杂志2001年第19卷第3期
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