免疫组化(IHC)对照实验设计与分析免疫组化(IHC)染色主要是通过利用抗原与抗体特异性反应，对细胞或组织内的抗原物质做定位或定性分析的方法
。其操作相对简单，且灵敏度高、特异性好。在临床诊断有比较高的应用价值。本文主要针对免疫组化(IHC)的实验设计进行概念解答，辅以结
果判断为主要切入点。目的是给大家的实验有一个很好的参考。对免疫组化(IHC)实验有一个原则上和根本上的把握。1.免疫组化(IHC)
结果的判断原则1)必须有对照染色2)抗原的表达必须在特定部位3)阴性结果不能视为抗原不表达4)尽量避开一些出血、坏死或切片刀痕和截
面边缘的细胞阳性表达部位5)对免疫组化(IHC)标记结果的意义不能绝对化2.对照染色的设计对照染色的目的：排除假阴性和假阳性1)假
阴性的原因主要有：a)组织处理不当，抗原丢失过多或遮蔽b)抗体失活，效价过低或稀释倍数不合适（主要是一抗）c)染色步骤遗漏或者出差
错，或显色剂的选择不合理，缓冲液的pH值和离子强度不当2)假阳性的原因主要有：a)自发式荧光或内源酶干扰b)抗体试剂不纯（尤其是一
抗）c)操作失误，如污染、显色剂操作不当等等。（这也是最不应该犯的错误，但是在实际试验中出错最多的）d)Fc受体干扰等等。（据说有
些厂家可是研究将Fc末端进行改构，避免Fc的干扰）3.实验的种类及选用目的种类：①阳性组织对照；②阴性组织对照；③阴性试剂对照；④
自身对照1)阳性组织对照：已证实的含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片，同时做同样的处理和免疫染色的组织对照。
正确的结果应呈现阳性，目的是为了证实所用免疫组化(IHC)染色流程的有效性以及排除假阴性。2)阴性组织对照：用已证实不含靶抗原的组
织对照，同步处理和免疫标记染色，正确的结果应该是阴性，目的是为了去除假阳性。3)阴性试剂对照：指用已证实在免疫组化(IHC)染色中
所用试剂，尤其是特异性抗体试剂的有效性和可靠性而设立的同步免疫染色对照。包括：空白对照、替代对照、吸收实验和抑制试验等。目的是在于
去除假阳性和证实所用免疫组化(IHC)试剂及其技术方法的有效性和待检验试验切片免疫标记阳性结果的可靠性。a)空白对照：指以缓冲液（
PBS/TBS等）取代第一抗体（必要的时候还可以做第二抗体或桥联抗体的空白取代），其它各步骤不变，其他试剂盒染色步骤一致，结果应该
为阴性结果。b)替代对照：指以所用方法第一抗体同源的动物正常血清，或与本试验无关的抗体（目的生物缺失的即可）取代第一抗体，其他步骤
不变的免疫染色试剂对照，结果应为阴性或阳性着色显著减弱（有可能存在吸收不全的现象）c)抑制试验：是指用标记抗体和未标记抗体（可以是
一抗、也可以是二抗或桥联抗体）两者的混合物作试剂，其他步骤不变的免疫组化(IHC)染色试剂对照，结果其阳性着色应成比例的减弱（等量
混合或1:9比例混合）。此对照方法多用于直接法。 |
|
