出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面:1.蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。2.一抗是多克隆抗体,或一抗、二抗浓度太高。可更 换成单克隆抗体,或降低抗体浓度,缩短抗体孵育时间,优化一抗和二抗的使用浓度。3.洗膜不充分。可增加洗膜次数和Buffer用量, 延长洗膜时间,或在WashBuffer中添加终浓度0.05%的Tween-20。4.目的蛋白在体内存在多种修饰形式,如乙酰化 ,甲基化,磷酸化,糖基化等。可查阅文献,用合适的方法去除蛋白的修饰,或选择合适的抗体。5.目的蛋白降解。重新准备蛋白样品,并加 入足够的蛋白酶抑制剂。6.发光液质量问题,可选用发光清晰的ECL发光液,如英格恩的Enlight。 |
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