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如何做好细胞电转染实验?(engreen)
2018-03-12 | 阅:  转:  |  分享 
  
要想做好细胞的电转染实验,应注意以下几点:1.选择合适的电场强度合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡
率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。2
.??选择合适的细胞用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面
结构致密比稳定期的细胞差,电转后,细胞膜的恢复能力强,而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源DNA.3.??质粒质量要好应选择纯
度高的质粒,首先DNA/RNA应该超纯(A260/A280>1.8),其次应不含内毒素,同时质粒应溶于双蒸水而不是TE缓冲溶液。
另外,DNA浓度不宜过高。4.??选择合适的电转染试剂电击会对细胞造成一定程度的伤害,在转染试剂的选择上要注意,应选择具有细胞膜
修复成分的电转染试剂,如engreen的Entranster-E,可将电击对细胞的损伤降到最低。并且,Entranster-E可适
用于lonza、Bio-rad、BTX等多种电转仪。
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(本文系实验专家首藏)