?微生物的培养和应用
取9个洁净培养皿，均分为三组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），各组分别加入等量的不同培养基，每个平板均用涂布法接种0．1mL大肠杆菌菌液，37℃培养36小时后，统计菌落数（见表），以下相关叙述正确的是
组别 培养基 各平板的菌落数 1 2 3 Ⅰ 琼脂、C6H12O6、NH4NO3 30 31 27 Ⅱ 琼脂、C6H12O6、NH4NO3、维生素 169 178 193 Ⅲ 琼脂、NH4NO3、维生素 0 0 1 A．Ⅰ组和Ⅱ组说明维生素可以促进大肠杆菌生长
B．Ⅰ组和Ⅲ组说明大肠杆菌正常生长需要糖类物质
C．三组实验均使用了液体培养基，以方便菌落计数
D．三组实验所使用的培养基均需62℃、30min消毒
【参考答案】A
【试题解析】实验设计的原则：对照原则和单一变量原则；对比Ⅰ、Ⅱ两组，可以发现含有维生素的培养基，大肠杆菌生长好，缺少C6H12O6大肠杆菌几乎不生长。培养基的营养物质有碳源、氮源、水、无机盐。A．由分析可知：Ⅰ组和Ⅱ组说明维生素可以促进大肠杆菌生长，A正确；B．Ⅰ组和Ⅱ组作对照，自变量是葡萄糖的有无，说明大肠杆菌正常生长需要葡萄糖，B错误；C．由题意知：每个平板都含有琼脂，属于固体培养基，C错误；D．三组实验所使用的培养基均需高压蒸汽灭菌，D错误。故选A。
两种纯化细菌方法的比较
项目 优点 缺点 适用范围 平板划线法 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 不能计数 适用于好氧菌 稀释涂布平板法 可以计数，可以观察菌落特征 吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延 适用于厌氧菌和兼性厌氧菌
1．下列关于微生物的培养和分离的叙述中，不正确的是
A．细菌能在培养基中以二分裂方式迅速增殖
B．噬菌体和大肠杆菌都可直接在蛋白胨培养基中增殖
C．灭菌的目的是消灭与培养菌竞争的杂菌
D．分离得到的菌种采用临时保藏的不足在于保存时间短，容易被污染或产生变异
2．如图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是
A．步骤使用的培养基已经灭菌并调节过pH
B．步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行
C．在恒温培养箱中培养时需要将平板倒置
D．操作过程中，需灼烧接种环5次
3．如图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程，其中LB培养基能使菌种成倍扩增，以下说法正确的是
A．需要对活性污泥作灭菌处理
B．中LB培养基应以甲醛为唯一碳源
C．目的菌种异化作用类型为厌氧型
D．经处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养
4．某生物兴趣小组的同学欲从土壤中分离纯化细菌X，并对其进行计数。如图表示其实验流程，请回答下列相关问题：
（1）对土壤样品进行梯度稀释的目的是_________________。
（2）上述流程中所运用的接种方法是_______________；接种时应在酒精灯火焰附近进行，其原因是_______________。
（3）将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱中培养，其中放置“未接种的培养基”的目的是_______________。
（4）鉴定土壤中微生物的种类时，可以菌落的_______________（至少答出两点）等作为特征。在实验中小组每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止_______________。对培养基上的菌落进行计数时，一般选取菌落数在_______________间的平板。
1．【答案】B
【解析】A、细菌的增殖方式通常是二分裂增殖，能在液体培养基中以二分裂方式迅速扩增，A正确；B、噬菌体是病毒，必须在活细胞中才能增殖，不能在普通培养基中增殖，B错误；C、灭菌是消灭与培养菌相竞争的杂菌，防止污染培养物，C正确；D、分离得到的菌种可以采用临时保藏的方法，首先，将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。但是这种方法保存时间不长，容易被污染或产生变异，D正确。
2．【答案】D
【解析】由图可知，是倒平板，是用接种环沾取菌液，是进行平板划线，是培养结果。步骤表示倒平板，在倒平板之前已经灭菌并调节过pH，A正确；步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，B正确；将放在恒温培养箱中培养时，需要将平板倒置，防止皿盖上的水珠滴落污染培养基，C正确；接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以完成步骤中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，由此可见，完成步骤共需灼烧接种环6次，D错误。
3．【答案】D
【解析】该实验是从活性污泥中分离和纯化分解甲醛细菌，则活性污泥不能灭菌，A错误；LB培养基使菌种成倍扩增，应用完全培养基培养，B错误；图示分解甲醛细菌是在培养皿中进行的，属于需氧型细菌，C错误；经处理后，瓶中甲醛浓度降低，甲醛浓度最低的一组中分解甲醛细菌纯度最高，可进一步纯化培养，D正确。
4．【答案】（1）让聚集在一起的细菌分散成单个细胞，有利于在培养基表面形成单个菌落
（2）稀释涂布平板法避免杂菌污染
（3）检测培养基灭菌是否合格
（4）形状、大小、隆起程度及颜色因培养时间不足导致遗漏菌落数目30-300
【解析】（1）对土壤样品进行梯度稀释是为了让聚集在一起的细菌分散成单个细胞，有利于在培养基表面形成单个菌落。（2）该实验中选择稀释涂布平板法进行接种；为了避免杂菌污染，接种时应在酒精灯火焰附近进行。（3）为了检测培养基灭菌是否合格，需要放置未接种的培养基。（4）鉴定土壤中微生物的种类时，可以根据菌落的形状、大小、隆起程度及颜色等作为特征。为了防止因培养时间不足导致遗漏菌落数目，在实验中小组每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果。对培养基上的菌落进行计数时，一般选取菌落数在30-300间的平板。
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