GST-Pulldown实验操作步骤在生物体的生命活动中，蛋白质的功能是通过蛋白质与蛋白质之间的相互作用来实现的。因此，研究新的蛋白互作可
以为研究蛋白质的潜在功能提供新的方向。在诸多蛋白互作鉴定实验中，Pulldown常用于体外蛋白互作检验，以及帮助发现新的互作蛋白。
Pulldown实验利用高度纯化且富集的诱饵蛋白捕获在细胞中相互作用较弱或丰度低的靶蛋白，大幅度提高发现新靶蛋白的效率。GST-
pulldown实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST
融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和填料上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的
“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,“诱饵蛋白”
和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。Pulldown
实验操作步骤具体为：表达纯化GST、polyHis或Biotin标记的诱饵蛋白，使用固定化亲和配体将诱饵蛋白与固相基质稳定结合，再
将诱饵蛋白与待测细胞裂解液进行混合孵育，在这一过程中，诱饵蛋白与目标蛋白相互作用并结合在一起，通过清洗除去非特异性结合的杂蛋白，即
可获得与诱饵蛋白相互作用的目标蛋白，再通过质谱分析对目标蛋白进行鉴定。GST-pulldown实验通常有两种应用:确定融合(或探
针)蛋白与未知(或靶)蛋白间新的相互作用(Kaelinetal.1991,GrlinickandChao1996),
以及证实探针蛋白与已知蛋白质间可疑的相互作用。这两种实验的设计和实施都有所不同。百泰派克生物平台利用进口的GSTpull-dow
n试剂盒，能够快速准确的完成蛋白互作实验，结合公司先进的UPLC-MS质谱平台，推出基于pulldown的蛋白分析一站式技术服
务，灵敏度高、分辨率准确。资料主参考：百泰派克生物平台【biotech-pack】 |
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