ASCO/CAP2013指南关于乳腺癌HER2检测推荐：IHC检测HER2蛋白表达水平FISH检测HER2基因扩增FDA2013年关
于胃癌HER2检测流程建议ALK最早是在间变性大细胞淋巴瘤（ALCL)的一个亚型中被发现的，因此定名为间变性淋巴瘤激酶（ana
plasticlymphomakinase，ALK）。随后，在发现非小细胞肺癌中有ALK基因重排之前，在弥漫性大B细胞淋巴瘤和炎
症性肌纤维母细胞瘤（IMT）中分别发现了有多种类型的ALK基因重排，至此证明ALK是强力致癌驱动基因。变异类型：重排检测方法：
ALK分离荧光原位杂交检测，是ALK诊断检测最终获得FDA批准，用于检测ALK基因重排非小细胞肺癌，连同克唑替尼?获得美国批准的基
础，也是目前唯一经临床验证的ALK检测方法。EML4-ALK融合基因——克唑替尼的靶标已发现并确认至少9种EML4-ALK融合
基因的突变体：v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、
v6、v7。检测方法：RT-PCR,FISH,PCR、测序等RBRB基因(Retinobl
astomagene)即成视网膜细胞瘤基因，为视网膜母细胞瘤易感基因，是世界上第一个被克隆和完成全序列测定的抑癌基因。突变类型
：缺失，突变。检测技术：PCR，PCR-SSCPPage?肿瘤与基因
2015-12-15人类基因组计划人类基因组计划（HGP）于1990年正式启动了2003年
完成了所有研究目标。已完成的基因序列图覆盖了人类基因组99%的区域，精确率达到了99.99%。那是一部长达100万页，每页3，00
0个字符的巨著！诺贝尔获得者杜伯克曾说:人类的DNA序列是人类的真谛，这个世界上发生的一切事情，都与这序列息息相关。一个人的
基因组信息要用3GB的光盘存储。一个人每分钟敲击60字，每天工作8小时，50年才能全部记录一个人的DNA信息。每个人体
内都有数万亿细胞，每个细胞的细胞核内都有46个（23对）染色体。每个独立染色体就叫DNA。如果展开，仅一个细胞内的DN
A就能有1.83米，如果把一个人的DNA全展开，长度相当于从地球到太阳610次。环境因素物理因素化学因素生
物因素体内微环境人类基因组肿瘤是一种环境因素与遗传因素相互作用导致的疾病,大多数的环境致病因素的致癌作用都是通过影响遗传
基因起作用的。基因变异的类型癌基因：点突变（K-Ras、H-Ras）、插入突变（Int-2）、扩增（myc,erbB、Ra
s）、重排（Trk、Ret）染色体易位（Bcr/Abl、Bcl-2）、低甲基化（ER、PR）。抑癌基因：突变（P53、P16）
、丢失（Rb、P53）、失活（DCC）、高甲基化。促进肿瘤转移的基因（MT
A1、C-KIT、EF1A）抑制肿瘤转移基因(nm23-H1、BRMS1、H2-K、KISS1)肿瘤的发生源于遗传物质D
NA的改变这种改变是多步骤完成的多个基因变化的细胞进化过程不仅癌基因之间有协同作用，癌基因与抑癌基因之间也存在协同作用
基因检测基因检测的分类诊断性基因检测多数用于有症状单基因疾病诊断单
基因疾病症状出现前的诊断预测性基因检测数用于多基因常见疾病的遗传风险预测个体化用药基因检测多用于指导临床药物治疗
基因检测与肿瘤？风险预测我是否易得某种肿瘤？复发监控
疗效判断治疗选择预后判断临床分期鉴别诊断早期筛查我的肿瘤会如何进展？我现在是否可能有肿瘤？我的肿瘤是什么类型的？
我的肿瘤扩散了吗？我的肿瘤回来了吗？我的治疗起作用了吗？最适合我的治疗是什么？如：CtDNACTCPSACEAA
FP……如：EML4-ALKHER2MSI……如：CTCCt-DNA……如：EGFRERCC1
HER2……如：21基因CTC放疗敏感PAM50MSI放疗毒副……如：CTCCt-DNA……如：
CTCCt-DNA……如：BRCA1/2CDH1APCMMRRET……
基因检测方法介绍基因变异的检测方法显微切割+直接测序测序法荧光定量PCR法ARMS方法Mutation-riched
PCRPCR-SSCP甲基化的检测（Northern印迹，Western印迹，HRM）FISHCtDNA...
...显微切割+直接测序原理：利用紫外激光对生物样本进行切割和分离，通过弹射装置将
目的细胞收集于EP管内。功能：通过从诊断明确的组织中切取获得的细胞或细胞成份，提取
核酸，可用于PCR、DHPLC等。切割之前的目的癌巢切割之后，可见目的癌巢已取走激光捕获显微切割Sanger
Sequencing（1977）Next-GenSequencing（2
005以后）IonSemiconductorSequencing
（2011）测序技术发展历程直接测序法原理：双脱氧终止法特点：直接测出碱基序列，明确突变类型。耗时
长：2~3天。FrederickSanger13August1918?–19Novem
ber2013)第二代测序技术：核心思想是边合成边测序（SequencingbySynthesis)，即通过捕捉新合成的末
端的标记来确定DNA的序列，现有的技术平台主要包括Roche/454FLX、Illumina/SolexaGenomeAn
alyzer和AppliedBiosystemsSOLIDsystem。第三代测序技术：采用单分子读取技术，不再需要P
CR扩增步骤，进一步降低了测序成本。包括单分子即时DNA测序、HeliScope单分子测序、基于荧光共振能量转移的即时DNA测序、
纳米孔单分子测序。纳米微孔测序原理荧光定量PCR原理：应用一对双标记Taqman探针，分别
针对双等位SNP的不同基因型，只有完全匹配的探针扩增出各自对应的基因型；用两种荧光染料Fam，Hex（Vic）分别标记这两种探针，
就可以在一次PCR反应中完成对单个SNP位点的基因型判定。特点：针对固定的已知突变、操作简便、耗时短（2h）
ARMS方法原理：等位基因特异性扩增法（AlleleSpecificAmplifica
tion，ASA）建立于1989年，是PCR技术应用的发展，也称扩增阻滞突变系统（AmplificationRefractory
MutationSystem?，?ARMS）、等位基因特异性PCR（AlleleSpecificPCR，?ASPCR）等。
Mutation-richedPCR原理：利用ras基因家族某个密码子部位存在已知的限制性内切酶位点，如K-ras
基因第12密码子的BstNI位点，第13密码子有BgⅠⅡ位点。用连续二次的巢式PCR来扩增包括K-ras第12、13密码子的DN
A片段，在两次扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段，野生型因被酶切而不能进入第二次PCR扩增，而突变型则能完整进入第二次
PCR扩增并得到产物的富集。PCR-SSCP原理：在完成靶DNA的PCR扩增之
后进行单链DNA多态性分析的一种方法。将单链的扩增DNA或组织基因组DNA通过中性的聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据其电泳位置的改变可分辨
出单个碱基的改变。HRM原理：采用重亚硫酸盐处理DNA模板后，在非CpG岛位置设计一对针
对经亚硫酸氢钠处理后DNA链的引物，这对引物中间包含有意义的甲基化CpG岛，一旦这些CpG岛发生甲基化，胞嘧啶不发生变化，而未甲基
化的胞嘧啶转变成胸腺嘧啶，样品中的GC含量发生了变化，最终被转化成溶解曲线Tm值之间的差异。特点：可检测抵达0.1%的甲基化程度
，并且可以根据已知甲基化程度的标准曲线对未知样品的甲基化百分比进行测定。FISH原理：FIS
H是以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针，探针和靶序列双链DNA变性后杂交，互补的异源单链DNA分子在适宜的温度和离子强度下退火形
成稳定的异源待检的杂交体双链DNA，通过荧光标记显示出来，通过荧光显微镜观察杂交信号。特点：周期短、特异性好、定位准确（基因缺失
、染色体易位）。ctDNA（液体活检）cfDNA（cellfreeDNA），或者叫血浆游离DNA，是血浆中游离存在的DNA，
它们有的来自于正常细胞，有的来自于异常细胞（如肿瘤细胞），还有部分来自于我们外部（如病毒DNA）。人们发现cfDNA中携带肿瘤特
有突变的那一小部分DNA，是由肿瘤细胞释放出来的。这种携带了突变信息的循环DNA是肿瘤的标志，ctDNA的研究终于与肿瘤关联起来。
ctDNA来源：1、来自于坏死的肿瘤细胞；2、来自于凋亡的肿瘤细胞；3、来自于肿瘤细胞分泌的外排体。突变类型：点突变（SNV）
，短的插入缺失（InDel），拷贝数变异（CNV），结构变异（SV）等等。发现过程：70年代Leon等研究表明癌症患者外周血清D
NA水平大大高于正常人。肿瘤相关基因介绍EGFR一种广泛分布于人体各组织细胞膜上的
多功能糖蛋白，是HER/ErB家族成员之一。对肿瘤细胞的繁殖、生长、修复和存活等起重要作用。突变热点：EGFR酪氨酸激酶编码区（
EGFR-TK），共有486个突变，集中在18-21外显子。（L858R、“19号外显子缺失”）突变的检测方法:直接测序
定量PCRARMS第一代针对EGFR的靶向药易瑞沙（Iressa）和特罗凯（Tarceva）（针对位点：
L858R、“19号外显子缺失”）2011年浙江贝达药业开发的EGFR靶向药物凯美纳（埃克替尼）在中国上市，号称第一个中国自己做
出来的小分子靶向抗癌药物。第二代EGFR抑制剂，代表产品是阿伐替尼（afatinib）（针对位点：L858R、“19号外
显子缺失”、T790M）第三代EGFR靶向药物还没有被FDA批准上市，但有几个已经在3期临床实验，代表药物是Clovis公司的
CO1686，阿斯利康的AZD9291和诺华的EGF816（药物上市前一般都只有代号，没有名字）。K-rasK-ras突变
是结直肠发生的早期事件，K-ras突变可促进肿瘤的恶性进展，EGFR抑制剂活性的预测性标记物突变热点：外显子2（密码子12，1
3），3（密码子61）检测方法：显微切割+直接测序直接测序定量PCRRiched-mutant
PCR靶向药物西妥昔单抗NCCN明确指出西妥昔单抗（爱必妥）用药之前须检测K-ras基因突变检测；K-ras突变型患者
并不能从抗EGFR治疗（爱必妥）中获益,反而徒增不良反应危险和治疗费用；中国人群中K-ras基因突变率15%！
15%的病人不应该使用爱必妥！野生型突变型WorldJGastroenterol.2011November21;17(43):4779-4786.HER2人表皮生长因子受体2（HER2）是具有酪氨酸激酶活性的表皮生长因子受体家族的一个成员。受体的聚合作用会导致受体酪氨酸残基的磷酸化，并启动多种信号通路导致细胞增殖和肿瘤发生。乳腺癌患者预后指标及曲妥珠单抗治疗的靶点；胃癌曲妥珠单抗靶向治疗的靶点。大约15–30%的乳腺癌和10–30%的胃/食管癌会发生HER2基因扩增或过表达。HER2的过度表达也可见于其他肿瘤如卵巢、子宫内膜、膀胱、肺、结肠和头颈部。Page? |
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