在分析检测工作中，分析方法开发是一道迈不过去的坎。峰形不好，峰展宽，拖尾，前伸；主峰后有杂质，分不开；死时间出峰，没保留；那么分析方法有没有
套路可寻？我们该如何快速准确的进行方法开发？小弗为你梳理了一套完整的药物分析方法开发流程在正式开始分析方法开发之前，我们需要先确定
药物分析的属性，即确定该方法用来检测药物的哪种属性。药物属性分析方法的分类分析方法是否能够用于药物检测分析，在相关法规方面是有具体
要求的。根据药物属性，常用药物分析方法主要有7大类：药物不同属性的分析方法，对检测结果的要求，在药典中均有相关规定，且是有区别的。
例如：有关物质属性检测中，各浓度平均回收率80%~120%，相对标准偏差不大于10%；而含量属性检测中，各浓度平均回收率98%
~102%，相对标准偏差不大于2%。——《中国药典2020四部》明确了药物分析的属性以及相应分析方法要求，就可以开始考虑方法开
发的具体内容了。分析方法的开发，首先必须考虑三个方面的因素，化合物的性质、分析方法理论、仪器检测设备。药物分析方法开发三要素一、化
合物的性质化合物性质一般包括物理和化学性质，简称理化性质，由其本身的结构决定，一般表现为分子的极性大小、酸碱性、光谱吸收、稳定性等
特点。不同理化性质的化合物，分析方法开发思路是有明显区别的：不同的性质，色谱分离作用力和检测仪器的选择都是不一样的。所以，在方法开
发的第一步，我们一定要非常明确该化合物的结构、pKa、官能团等。二、色谱方法高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）方法基本覆盖
各国药典标准的百分之九十以上，意味着色谱分析方法可以解决药物分析百分之九十以上的问题。其中HPLC占比最大。HPLC分为RP-HP
LC（反相色谱）、NP-HPLC（正向色谱）和HILIC（亲水作用色谱），三者的区别在于固定相的不同，导致作用力机制不同；RP-H
PLC是我们需要重点关注的。反相色谱固定相常用为C18，其他为C4、C8和苯基等。在色谱模式的选择上，往往依据“相似相容”的原理，
如非极性化合物往往选择非极性的色谱柱，即反相色谱进行分离。三、检测器在化合物结构一定，色谱分离模式确定的情况下，对化合物辨识度有决
定作用的，是与仪器相配套的检测器；检测器的合理选择保证了检测方法的灵敏度和稳定性。比如：有强紫外吸收的化合物适合选择紫外检测器；弱
紫外吸收的化合物可以选择蒸发光散射检测器或质谱检测器。检测器一般分为浓度型检测器和通用型检测器。它们的检测原理和灵敏度有很大差异，
与方法的准确度和稳定性也有直接关系。在了解了药物分析方法开发的三要素，以及对方法目标的要求后，就可以进行方法开发思路的设计了，这样
才能在方法开发过程中，避免试错，高效进行分析方法开发。药物分析方法开发流程如下（可参考）：分析方法开发是一个周而复始的过程，起始于
工艺，终止于工艺。在这个过程中，方法开发的策略不是单方面的，它需要我们对于基础学科理论的了解，对于工艺信息、化合物信息、色谱理论、
检测手段以及时间效率等多个维度综合考量，从而获得变异性可以被控制以及能够识别产品变异的分析方法，最终为药物的安全、有效、质量可控提
供支撑。工艺杂质和降解杂质分析方法开发通过以上信息分析，可得到以下结论：信息1，确定该药物是检测有关物质方面的属性，专属性强、灵敏
度高；信息2和4，碱性化合物，中性拖尾，碱性不稳定，因此，只能选择酸性条件；信息3，结构中含有强紫外吸收基团，选择紫外检测器；信息
4，中等极性，可以选择反相HPLC分离模式或者HILIC模式。初步方法设计如下：策略一：采用HILIC模式，酸性条件色谱柱：Wat
ersCORTECSHILIC(2.7μm，4.6×150mm)流动相：乙腈-甲酸铵溶液酸性条件下，SM-001被质子化，在H
ILIC模式下保留较强，但是峰形拖尾严重，从HILIC理论分析，产生该结果原因为盐析效应，盐阻止分析物在水层的分配。从实验结果分析
，盐浓度对保留影响大，方法的耐用性存在较大问题，故放弃该模式。策略二：采用离子对模式，酸性条件色谱柱:WatersXbridge
ShieldRP18（3.5μm4.6×150mm）流动相：乙腈（0.01%全氟戊酸）-0.01%全氟戊酸，梯度洗脱检测波长：
248nm考虑到化合物结构上有亚氨基，会与固定相发生次级作用，产生拖尾，所以采用反相离子对模式。在离子对试剂选择上，最初选择TFA
，色谱峰保留比较弱。因此，选择碳数目为五个的全氟戊酸，离子对作用增强很多。分别对主成分和IM-010在该体系下的降解风险进行评估，均未出现降解。后将该方法调整为20min，预验证均达到可接受标准。 |
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