风湿免疫性疾病与自身抗体检测海南医学院第二附属医院风湿免疫科主要内容一、自身抗体概述二、自身抗体在风湿免疫病的应用三、自身抗体的检测四
、抗核抗体检测临床应用的专家共识现代医学－风湿性疾病（RheumaticDiseases）结缔组织病自身免疫病祖国医学的风湿概念
－痹证百姓心目中的风湿病－自然界的“风”“湿”风湿免疫病妇产科皮肤科血液科呼吸科多系统、多学科疾病神经科心血管科消化科骨科概述风
湿免疫性疾病的一大特征是患者血液中自身抗体的出现，即产生了针对自身组织、器官、细胞及细胞成分的抗体。自身抗体的检测对风湿免疫性疾病
的诊断和鉴别诊断有极大的帮助，但任何抗体检测的敏感性、特异性有一定范围，且存在一定假阳性、假阴性率，因此诊断不能单纯根据抗体，应以
临床表现为基础。抗核抗体（ANAs）ANA是以真核细胞的各种成分为靶抗原的自身抗体总称。ANA是结缔组织病诊断和提示预后的重要工具
，也是对风湿性疾病疑似患者的常规筛查手段。也可见于多种感染性疾病、炎症和肿瘤性疾病及健康人。抗DNA抗体：抗双链DNA抗体(ds-
DNA)、抗单链DNA抗体(ss-DNA)抗组蛋白抗体：抗组蛋白亚单位H1,H2A/B,H3，H4及其复合物抗体抗Sm,U1RNP
,SSA,SSB,Scl-70,Jo-1,rRNP,PCNA,Ku,Mi-2,PL-7,PL-12等①抗可提取性核抗原（ENA）抗
体抗非组蛋白抗体抗核抗体（ANAs）②抗染色体DNA蛋白抗体：抗着丝点抗体（ACA）抗核仁抗体：抗RNA多聚酶Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ，原纤维蛋
白，NOR90和To/Th等抗其他细胞成分抗体：抗核孔复合物、板层素、线粒体、高尔基体、细胞角蛋白等抗体抗核抗体（ANA）相关疾病
疾病ANA阳性率(%)系统性红斑狼疮80-100系统性硬化症70-90多发性肌炎/皮肌炎40-80干燥综合征48-96药物诱导性狼
疮95-100混合性结缔组织病95-100雷诺现象20-60类风湿关节炎30-50幼年型特发性关节炎20-50抗磷脂综合征40-5
0疾病ANA阳性率(%)特发性血小板减少性紫癜10-30甲状腺疾病30-50慢性活动性肝炎30-40感染性疾病变异较大恶性肿瘤变异
较大正常人≥1：4020-30≥1：8010-12≥1：1605≥1：3203主要内容一、自身抗体概述二、自身抗体在风湿免疫病的应
用三、自身抗体的检测四、抗核抗体检测临床应用的专家共识系统性红斑狼疮（SLE）系统性红斑狼疮（Systemiclupusery
thematosus，SLE）是一种系统性自身免疫性疾病，以全身多系统多脏器受累、反复的复发与缓解、体内存在大量自身抗体为主要临床
特点。全球SLE患病率为20-240/10万不等，中国大陆地区SLE患病率约为30-70/10万。系统性红斑狼疮（SLE）SLE可
以诱导生成针对细胞内不同部位的无数抗原的自身抗体，但大多数自身抗原存在于细胞核内。自身抗体SLE患者中的阳性率临床意义抗ds-DN
A抗体60%特异性95%；随病情波动；与肾小球肾炎有关抗Smith抗体20-30%特异性99%；与病情活动无关；与U1RNP抗体有
关抗U1RNP抗体30%与混合性结缔组织病有关，与肾小球肾炎负相关抗Ro/SSA抗体30%和干燥综合征、光敏感、SCLE、新生儿狼
疮、先天性心脏传导阻滞有关抗La/SSB抗体20%和干燥综合征、SCLE、新生儿狼疮、先天性心脏传导阻滞、抗Ro/SSA抗体有关
抗组蛋白抗体70%也和药物性狼疮有关抗磷脂抗体30%和动静脉血栓、病态妊娠有关SCLE，亚急性皮肤型狼疮2019EULAR/A
CRSLE分类标准入围标准：ANA阳性史（Hep2免疫荧光法≥1：80）或等效阳性检测（任何时候）如果符合入围标准且权重得分≥1
0分可考虑诊断系统性红斑狼疮2019EULAR/ACRSLE分类标准以ANA阳性为入围标准，强调了自身抗体检测在SLE诊断中的重
要性。抗磷脂抗体（antiphospholipidantibodies，APL）一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体，常见于SLE
、抗磷脂综合征、神经系统疾病等抗磷脂综合征临床表现：习惯性流产、血栓形成、血小板减少主要抗体抗心磷脂抗体（anticardioli
pinantibody,ACL）与血栓形成及习惯性流产相关，常见于SLE、RA、SS等结缔组织病中狼疮抗凝物（lupusant
icoagulant,LAC）与不明原因的动静脉血栓及复发性流产相关抗β2糖蛋白1（β2-GP1）血栓形成的主要因素，主要见于SL
E、习惯性流产、突发的脑卒中等。其他抗体抗凝血酶原抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗磷脂酰肌醇抗体、抗磷脂酰胆碱抗体、抗磷脂酰甘油抗体等
类风湿关节炎（RA）一种病因不明的以侵蚀性、对称性多关节炎为主要临床表现的慢性、全身性自身免疫性疾病。也是国内最常见的一种慢性致残
性、全身性疾病。2010EULAR/ACR类风湿关节炎分类标准强调RF、抗CCP抗体在诊断中的重要性。类风湿因子（rheumat
oidfactors，RF）是抗变性IgG分子的Fc片段的自身抗体，分为IgM-RF、IgG-RF、IgA-RF和IgE-RF等
主要见于RA患者，缺乏特异性，也可见于部分正常人、感染性疾病、其他结缔组织病等抗角蛋白抗体谱其靶抗原为细胞基质中的聚角蛋白微丝蛋
白，对RA特异性较高，且有助于RA早期诊断抗体：抗核周因子（antiperinuclearfactor,APF）、抗角蛋白抗体（
antikeratinantibody,AKA）、抗环瓜氨酸多肽抗体（cycliccitrullinatedpeptide,CC
P）系统性硬化症（SSc）系统性硬化症（systemicsclerosis,SSc）是一种累及皮肤和内脏的多系统结缔组织病。本病
特征是慢性炎症伴受累组织不同程度的胶原沉积（纤维化）以及外周和内脏血管的闭塞性血管病。硬皮病自身抗体和相关表型抗原亚型临床表现拓扑
异构酶Ⅰ（Scl-70）弥漫型阳性率22%-40%；肺纤维化，心脏受累着丝点局限型阳性率22%-36%；严重肢端缺血，PAH，Si
cca综合征，钙质沉积RNA聚合酶Ⅲ弥漫型严重皮肤病变，肌腱摩擦音，肿瘤，GAVE，肾危象U3-RNP（纤维蛋白）弥漫或局限型原发
性PAH；食管、心脏和肾受累；肌肉病变Th/To局限型肺纤维化；少肾危象，下消化道功能障碍B23核磷酸蛋白弥漫或局限型PAH，肺病
心磷脂，β2GPⅠ局限型PAH，指端缺失PM-Scl肌炎-硬皮病重叠综合征肌炎，肺纤维化，指端溶解U1-RNP重叠综合征SLE，炎
性关节炎，肺纤维化GAVE，胃窦血管扩张；PAH，肺动脉高压CurrRheumatolRep9;165-172,2007炎性
肌病炎性肌病是一组异质性的系统性自身免疫性风湿病，其特点为慢性肌无力、肌肉疲劳及骨骼肌内单个核细胞的浸润。分型：皮肌炎（derma
tomyositis，DM）、多发性肌炎（polymyositis，PM）、包涵体肌炎（inclusionbodymyosit
is，IBM)）和儿童皮肌炎(juvenileDM，JDM))共同临床特征：骨骼肌的炎症，合并关节炎、皮肤、肺、心脏及胃肠道等损
害DM特异性皮肤表现：向阳性皮疹、Gottron疹、甲周病变、“技工手”、钙质沉着炎性肌病肌炎特异性自身抗体（myositis-s
pecificautoantibodies，MSAs）特异性高：主要见于肌炎和抗合成酶综合征，其他疾病罕见，具有特异的临床表现。
抗合成酶抗体（8个）：Jo-1，PL-7，PL-12，HA，EJ，KS，Zo，OJ皮肌炎抗体（5个）：Mi-2，MDA5，NXP-
2，TIF1?，SAE1/2免疫介导的坏死性肌炎抗体（2个）：SRP，HMGCRIBM抗体（1个）：cN1A（NT5c1A）肌炎相
关性自身抗体（myositis-associatedautoantibodies，MAAs）特异性差：见于重叠性肌炎，也可见于其
他结缔组织病。抗体：SSA/Ro52，Scl-70，PM-Scl-75，PM-Scl-100，Ku，RNA-PⅢ，Fibrill
arin，Th/To，NOR-90炎性肌病——肌炎抗体及其主要临床表现抗合成酶综合征严重肌病吞咽困难免疫介导的坏死性肌病重叠综合征
他汀药肿瘤钙质沉着包涵体肌炎皮肌炎恶性JInternMed2016Jul;280(1):8-23炎性肌病抗合成酶综合征（A
ntisynthetasesymdrome,ASS）以发热、肌炎、间质性肺病、技工手、雷诺现象、多关节炎为主要表现。氨基酰-
tRNA合成酶缩写中文抗Jo-1抗组氨酰-tRNA合成酶抗体抗PL-7抗苏氨酰-tRNA合成酶抗体抗PL-12抗丙氨酰-tRNA合
成酶抗体抗OJ抗异亮氨酰-tRNA合成酶抗体抗EJ抗甘氨酰-tRNA合成酶抗体抗KS抗天冬酰氨酰-tRNA合成酶抗体抗Zo抗苯丙氨
酰-tRNA合成酶抗体抗YRS/Ha抗酪氨酰-tRNA合成酶抗体氨基酸+tRNA氨基酰-tRNA抗体靶抗原阳性率ILD肌炎其他临床
表现Jo-1组氨酰-tRNA合成酶25%-30%++++关节炎（75%），雷诺现象（50%），技工手（20%）PL-7苏氨酰-tR
NA合成酶2%-5%+++罕见的肌肉损害，严重的关节炎PL-12丙氨酰-tRNA合成酶2%-5%+++肺动脉高压，食管损害OJ异亮
氨酰-tRNA合成酶1%+++间质性肺病（100%）EJ甘氨酰-tRNA合成酶1%++皮肌炎KS天冬酰氨酰-tRNA合成酶1%++
-发热，寻常型间质性肺炎（UIP，40%）WaRNA相关转运蛋白1%++皮疹，关节炎YRS酪氨酰-tRNA合成酶NA++—Zo苯
丙氨酰-tRNA合成酶NA++非特异性间质性肺炎（NSIP），雷诺现象，关节痛抗合成酶抗体特点——阳性率低，合并间质性肺病（ILD
）常见CCJM2013;80(10):655-666ANCA相关性血管炎ANCA相关性血管炎包括：肉芽肿性多血管炎（GPA）、嗜
酸性肉芽肿性多血管炎（EGPA）、显微镜下多血管炎（MPA）ANCA相关性血管炎以小血管受累为主，临床表现不典型，容易误诊、漏诊，
开展ANCA相关抗体的检测，有利于提高诊治水平和预后抗中性粒细胞胞浆抗体（antineutropilcytoplasmican
tibodies,ANCA）是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体，常见于ANCA相关性血管炎，亦可见于炎症性肠病
、自身免疫性肝病、药物性狼疮等抗原成分：人类中性蛋白酶3（PR3）、髓过氧化物酶（MPO）、丝氨酸蛋白酶、乳铁蛋白等常用检测方法间
接免疫荧光法（IIF）把ANCA分为胞浆型ANCA（c-ANCA,靶抗原为PR3）和核周型ANCA（p-ANCA,靶抗原为MPO）
酶联免疫吸附法（ELISA）抗PR3抗体、抗MPO抗体与PR-3和MPO抗体相关的疾病相关疾病IIF染色型特异性靶抗原PR3MPO
肉芽肿性多血管炎（GPA）c-ANCA、p-ANCA(少见)85%10%显微镜下多血管炎（MPA）c-ANCA、p-ANCA30%
70%坏死性新月体肾小球肾炎（NCGN）p-ANCA、c-ANCA(少见)25%65%嗜酸性肉芽肿性多血管炎（EGPA）p-ANC
A、c-ANCA(少见)10%60%结节性多动脉炎（PAN）低阳性率5%15%抗肾小球基底膜病（抗GBM病）p-ANCA—30%主
要内容一、自身抗体概述二、自身抗体在风湿免疫病的应用三、自身抗体的检测四、抗核抗体检测临床应用的专家共识自身抗体常用检测方法酶联免
疫吸附试验化学发光法间接免疫荧光法免疫胶体金法快速自动化定量，准确性高成本较高特异性高，包含信息量大，个别项目定义为金标准；操作复
杂，专业，自动化程度低，主观性强可定量，可自动化，结果准确性尚可，可低成本完成大量样本检测快速，结果准确性一般免疫印迹法放射免疫法
靶抗原多项联检，适合自动化定性，结果准确性一般敏感性高污染大，效期短两种或两种以上方法学同时检测可以提高准确性间接免疫荧光法（II
F）患者血清中存在抗细胞核成分的抗体，与核抗原成分结合形成抗原抗体复合物，再与荧光标记抗人IgG抗体结合，在荧光显微镜下观察到特异
的亮绿色荧光为阳性。以HEp-2细胞（人喉癌上皮细胞）或以鼠肝、鼠肾的冰冻切片作为抗原基质片。结果通常包括两个参数：核型和滴度，滴
度≥1:40的任何核型可判断为阳性。核型可以是单一的或复合的，反映了相应的自身抗原在细胞中的定位。免疫荧光法是快速、灵敏的ANA筛
选方法，也是ANA筛查的金标准。抗核抗体的检测结果-ANA核型ANA-均质型ANA-颗粒型ANA-核仁型ANA-着丝点型ANA-核
膜型常见ANA核型的临床意义ANA核型特点临床意义均质型核质染色均匀与抗组蛋白抗体相关，多见于SLE患者核膜型（周边型）核的边缘部
分荧光着染较强，中心厚、发暗与抗ds-DNA抗体相关，多见于SLE，特别是狼疮性肾炎患者颗粒型（斑点型）核内散布大小不等的着染荧光
的斑点与抗可提取性核抗原（ENA）抗体相关核仁型仅核仁着染荧光与核内的核糖体抗体相关，多见于SLE患者，在SSc患者阳性率达40%
着丝点型分裂象的细胞核、核膜消失，染色体向两端整齐排列，着丝点部位着染荧光主要于雷诺现象有相关性免疫印迹法（IBT）依据不同蛋白质
所带电荷和分子量的不同在电场中分离出若干多肽条带，然后水平转印至硝酸纤维素膜上，将膜切成细条，制成试剂盒。IBT法出现相应条带判为
阳性。是临床检测ENA时最敏感的的方法之一。酶联免疫吸附试验（ELISA）将检测血清在预先包被有纯化的靶抗原的孔中孵育，并通过酶结
合的抗人免疫球蛋白抗体检测已与靶抗原结合的抗体，然后采用适当的酶底物显色。也通常用于检测特异性ANA，如抗DNA抗体。主要内容一、
自身抗体概述二、自身抗体在风湿免疫病的应用三、自身抗体的检测四、抗核抗体检测临床应用的专家共识2018-抗核抗体检测临床应用的专家
共识1ANA定义：以真核细胞的各种成分为靶抗原的自身抗体的总称2推荐临床疑似AID患者，特别是多器官受累的系统性（非器官特异性）A
ID患者检测ANA及其针对靶抗原的特异性抗体3ANA检测可用于高危人群的健康体检筛查，如育龄期女性、AID患者的直属亲属，处于易诱
发AID的环境及免疫功能异常者4推荐以HEp-2细胞为实验基质的IIF法是进行ANA检测的参考方法和首选方法5采用以HEp-2细胞
为实验基质的IIF法进行ANA检测时，HEp-2细胞在实验机制中每显微镜视野（放大倍数为200倍）应可见3~5个有丝分裂细胞，二抗
应使用荧光素标记的抗人IgG抗体，IIF法检测ANA稀释方法可根据不同的检测试剂进行倍比稀释系统或√10稀释系统6ANA特性性自身
抗体可采用多种免疫学方法检测，不同的方法具有不同的临床优缺点7抗dsDNA抗体检测使用短膜虫IIF或放射免疫法（Farr法）或EL
ISA方法检测。若其他方法检测抗dsDNA抗体阳性与临床表现不符时，建议采用IIF法或放免法进行进一步确认，对SLE的疾病活动进行
监测时，应定期使用同种定量检测方法进行抗dsDNA抗体的检测8在ANA的临床应用中，可先用IIF进行ANA检测，若结果阳性需进一步
进行ANA针对靶抗原的特异性自身抗体检测。当临床高度怀疑时，不论ANA总抗体检测结果如何时，都需要针对靶抗原的特异性自身抗体进行检
测。2018-抗核抗体检测临床应用的专家共识9IIF-ANA荧光模型分为3类：细胞核荧光模型（14种），细胞浆荧光模型（9种）和细
胞有丝分裂荧光模型（5种）.必报荧光模型包括：细胞核均质型、细胞核斑点型、着丝典型、核点型、核仁型、细胞浆纤维型、细胞浆颗粒型、细
胞浆网状/线粒体型、细胞浆极型/高尔基体型、细胞浆棒环状型、核膜型和细胞浆线性/肌动蛋白型10IIF-ANA检测结果报告应包括：检
测方法、定性结果（阴性/阳性）、荧光模型、滴度及必要的临床建议。对于混合荧光模型，荧光模型报告的优先级顺序为细胞核荧光模型、细胞浆荧光模型、细胞有丝分裂期荧光模型。相同优先级的荧光模型，建议按滴度高低顺序优先报告。11IIF-ANA检测结果判读及报告人员应有培训、考核及定期进行结果判读比对12采用Elisa法等其他检测方法的ANA检测结果应包括检测结果的定量数值和单位、参考区间及必要的临床建议13ANA针对靶抗原的特异性自身抗体检测结果报告应包括检测方法、定性结果（若为定量检测方法应包含定量数值和点位）及参考区间同时应包括必要的临床建议14荧光模型对进行下一步针对靶抗原的特异性自身抗体的检测具有一定的指导意义，但并非完全一致，不能仅从荧光模型来推断针对靶抗原的特异性自身抗体或AID15不推荐使用ANA滴度（量值）的变化来反映AID的活动性和疗效反应性，不同厂家试剂可采用不同的滴度（量值）系统，不同滴度系统不能直接进行滴度值的比较，但部分检测项目可溯源到国际单位（IU/ml）后进行比较我们的医护团队 |
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