GB/T5750.12-2006生活饮用水总大肠菌群的测定多管发酵法
1.
高压蒸汽灭菌器的灭菌处理
1.1
使用市售压力蒸汽灭菌自含式生物指示剂放入标准测试包中或待灭菌的包中；
1.2
将测试包放于压力蒸汽灭菌器内不同位置，开启灭菌锅，设置
121
℃，
30min
；
1.3
灭菌完毕，取出生物指示剂；
1.4
冷却
10
分钟，压紧指示剂盖，挤压塑料管压破管内的玻璃管
(
内装恢复培养基
)
，确认菌片完全浸在培养液中，于
56
℃～
60
℃培养箱内培养，同时取一支未经灭菌的指示剂，按前法处理，一起放入培养箱培养作为阳性对照管；
1.5
培养
48
小时后，判定结果，培养基颜色由原来紫色变成黄色，说明指示剂呈阳性。若培养基颜色保持紫色不变，则指示剂呈阴性。
2.
仪器工具的灭菌处理
为保证实验的准确性，实验前应对试管、小导管、刻度吸管等进行灭菌处理。
2.
培养基与试剂
2.1
乳糖蛋白胨培养液配制
-
取市售乳糖蛋白胨培养基
23g
，加蒸馏水
1000ml
，加热至完全溶解，分装于灭菌后有小导管的试管，经
115
℃高压灭菌
20min
后备用。
2.2
双料乳糖蛋白胨培养液配制
-
取市售乳糖蛋白胨培养基
46g
，加蒸馏水
1000ml
，加热至完全溶解，分装于灭菌后有小导管的试管，经
115
℃高压灭菌
20min
后备用。
3.
乳糖发酵试验
3.1
取
10ml
水样到
10ml
双料
-
乳糖蛋白胨培养液中，取
1ml
水样到单料乳糖蛋白胨培养液中，另取
1ml
水样到
9ml
灭菌的生理盐水中，混匀后吸取
1ml
水样注入到
10ml
的单料乳糖蛋白胨培养液中于
36
℃
±1
℃培养箱内培养
24h
（每个稀释度
5
管）；同时用灭菌稀释水做空白试验。
3.2
检验污染严重的水源水时，应加大稀释度，可接种
1
，
0.1
，
0.01ml
甚至
0.1
，
0.01
，
0.001ml
，每个稀释度接种
5
管，每个水样共接种
15
管。接种
1ml
水样时，必须作
10
倍递增稀释后，取
1ml
接种，每次递增稀释
1
次，换用
1ml
灭菌刻度吸管。
4.
若乳糖蛋白胨培养管都不产酸产气，则可报告为总大肠菌群阴性；将产酸产气的发酵管分别接种到乳糖蛋白胨培养液中并做好记录，于
36
℃
±1
℃培养
18h-24h
。
5.
全部空白试验总大肠菌群必须为阴性，否则实验重做。
6.
根据总大肠菌群的阳性数量，查
MPN
检索表，报告每
100ml
水样中的总大肠菌群最可能数值。稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。如所有乳糖发酵管均阴性时，可报告总大肠菌群未检出。
7.
下附总大肠菌群试验流程图
实验人员：
冯
永兴
编制日期：
2021/01/18
总大肠菌群试验流程图
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