大肠杆菌培养和分离

超净台实验准备工作2灭菌和消毒无菌操作目的：为了避免被杂菌污染。1对实验操作空间：超净台：紫外线灭菌，过滤风
桌面：酒精擦拭，酒精灯外焰附近操作2.操作者衣服和手进行：清洁和消毒，70%酒精3.避免已灭菌处理的材料用具和周围物品的接触
消毒的方法1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min
3、用70%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4、氯气、高锰酸钾消毒……（1）消毒：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物
的过程。消毒与灭菌的区别（2）灭菌：灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。
以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。实验1大肠杆菌的培养和
分离超净台上紫外灯和过滤风实验过程：准备阶段：1培养基的配制，2灭菌和消毒操作阶段：1倒平板：分装固体培养基倒平板
：将已灭菌的固体培养基倒入培养皿的过程。分装培养基：1倒平板：将灭菌
后的固体培养基倒入培养皿培养基冷却到60度时倒入2培养基的分装（试管，三角瓶，培养皿）倒入三角瓶和试管（漏斗法）
1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手
触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答
：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。朊病毒就是蛋白质病毒，是只有蛋白质而没有核酸的病毒。1997年诺贝尔医学/生理学
奖的获得者美国生物学家斯垣利·普鲁辛纳(S.B.Prusiner)就是由于研究朊病毒作出卓越贡献而获此殊荣的。细菌细胞
壁的主要成分是肽聚糖，它使得这层壁坚韧并富有弹性。一旦失去细胞壁，所有的细菌都将变成球形。细菌细胞壁的主要功能是保护细胞、维持细胞
形状、协助鞭毛运动等，而且还与细菌的抗原性、致病性和对噬菌体的敏感性有关。细菌的细胞壁是多孔性的，可容许水和一些化学物质通过，但大
分子的物质不能通过。青霉素、头孢菌素等能干扰短肽链间的联结，磷霉素、环丝氨酸等能抑制聚糖骨架的合成，造成细胞壁缺陷，导致细菌在低渗
溶液极易破裂而死亡。呼吸作用在什么地方？什么是微生物呢？微生物：形体极小，结构简单，凡是肉眼看不见的生物。只有在光学显微镜
和电子显微镜下才能看清楚的生物。微生物的类群3真菌界(单或多C)：例如酵母菌、霉菌、真菌4单细胞动植物例如草履虫
、变形虫，单C藻非细胞结构1病毒细胞结构原核细胞:2原核生物界(单C)：细菌、蓝藻、放线菌真核细胞:微生物的新
陈代谢类型同化作用：自养型，异养型异化作用：需氧型，厌氧型，兼性厌氧型。自养需氧型：光合细菌（蓝藻），硝化细菌等异养需
氧型：醋杆菌，真菌，固氮菌等异养厌氧型：乳酸菌，假丝酵母菌等异养兼性厌氧型：酵母菌，大肠杆菌。微生物的作用绝大多数的微
生物对人类无害，90%以上对人类有利。用途：食品发酵：酒，醋，酱，酸奶，泡菜，腐乳……制药：生产抗生素：放线菌和霉菌，
生产酶制剂：治理环境污染：处理废水，降解塑料……一、细菌结构细胞壁，细胞膜，细胞溶胶，拟核DNA，核糖体
，质粒，鞭毛等革兰氏阴性，兼性厌氧，一般对人体无害，有些菌株有害，一旦进入泌尿系统，都有危害。用途：基因工程受体菌。菌落：
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依
据。大肠杆菌菌落不同细菌菌落不同实验一大肠杆菌的培养与分离实验内容：1细
菌培养：将大肠杆菌接种到LB液体培养基扩大培养。2细菌分离：将大肠杆菌从液体培养基中接种到LB固体培养基，形成单菌落。目的为了
分离纯化。实验内容：1细菌培养：用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌。2细菌分离：用LB固体培养基划线分离，
形成菌落。实验过程Ⅰ准备阶段：1培养基配制（两种），培养皿，培养用到的各种接种工具清洗，灭菌，2操作环境灭菌，3
操作人员消毒Ⅱ操作阶段：培养基成分（culturemedia）按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的
营养基质。营养成分：碳源、氮源、生长因子、水和无机盐。培养基成分细菌:真菌:“喜荤”,蛋白胨,牛肉膏,酵母
提液,Nacl等“喜素”,无机物或蔗糖溶液配置的豆芽汁LB培养基的配方培养基成分各成分的量蛋白胨0.5g酵母提取物
0.25gNaCl0.5gH2O加至50ml1配制培养基实验准备工作碳源：酵母提取物和蛋白胨氮源：蛋白胨
Nacl的作用：维持渗透压培养基配置流程：计算-称量-溶解-定容-调ph--灭菌蛋白胨酵母提取物培养基的种类
按照物理性质划分培养基固体培养基（加琼脂）液体培养基液体培养基能形成菌落，用途：微生物的分离、鉴定、保存、计数等主
要用于扩大培养固体培养基琼脂？红藻中提取的多糖,在98℃以上熔化，44℃以下凝固，常温下凝结成有弹性的凝胶。凝固剂
琼脂浓度的多少决定了培养基的硬度。培养基配置步骤计算称量：配固体培养基时还需加琼脂溶化：加
热溶化，定容调节PH灭菌细菌6.5-7.5中性偏碱真菌5.0-6.0中性偏酸培
养工具的灭菌玻璃制品：试管、培养皿、三角瓶、移液管、玻璃刮刀塑料制品：取样器枪头金属制品：接种环，镊子、棉花：用来制作棉花
塞。棉花塞：透气，又过滤细菌，不能用脱脂棉。高压蒸汽灭菌法：仪器：高压蒸汽灭菌锅121℃1kg/cm215min
计时：达到设定的压力或温度都开始计时使用步骤：先加热排气再达压力后灭菌15min后关闭电源，冷却，待锅内外压力相同时才能
打开。高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法为湿热灭菌法，其优点有三：1、湿热灭菌时菌体蛋白容易变性；2、湿热穿透力强；
3、水蒸汽变成水时可放出大量热增强杀菌效果，因此，它是效果最好的灭菌方法。灭菌的方法1、高压蒸汽灭菌（最常用）培养基，培
养皿，无菌水，各种玻璃制品2、灼烧灭菌接种环，玻璃刮刀（使用过程中），试管口等3、干热灭菌（160-170℃下加热1
-2h。）金属制品玻璃砂漏斗4.过滤灭菌法(不能高温加热的物质)仪器：G6玻璃纱漏斗物质：葡萄糖，尿
素，抗生素等微生物培养：无菌操作技术获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开。朊
病毒就是蛋白质病毒，是只有蛋白质而没有核酸的病毒。1997年诺贝尔医学/生理学奖的获得者美国生物学家斯垣利·普鲁辛纳(S.B.
Prusiner)就是由于研究朊病毒作出卓越贡献而获此殊荣的。细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖，它使得这层壁坚韧并富有弹性。一
旦失去细胞壁，所有的细菌都将变成球形。细菌细胞壁的主要功能是保护细胞、维持细胞形状、协助鞭毛运动等，而且还与细菌的抗原性、致病性和对噬菌体的敏感性有关。细菌的细胞壁是多孔性的，可容许水和一些化学物质通过，但大分子的物质不能通过。青霉素、头孢菌素等能干扰短肽链间的联结，磷霉素、环丝氨酸等能抑制聚糖骨架的合成，造成细胞壁缺陷，导致细菌在低渗溶液极易破裂而死亡。呼吸作用在什么地方？