钟在FAM通道采集一次荧光信号。
13.如果使用PCR仪、金属浴或水浴进行扩增，再使用qPCR仪进行终点法荧光读数：
则在扩增前和扩增后，分别在qPCR仪器上测荧光读数（温度设为60-65℃，1
次循环，每次循环1分钟，在FAM通道采集一次荧光信号。注意：测荧光读数必
须在65℃进行）。扩增反应按60-65℃，90分钟进行。
四、结果分析及解读
14.如果是用普通PCR仪器、水浴或金属浴进行的扩增，反应结束后只能肉眼判断结
果。将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察。扩增阳性对照管内反应液将呈现
蓝色，无模板和无引物的阴性对照将呈浅蓝色。如果扩增阳性对照管内反应液不呈
现蓝色，或无模板和无引物的阴性对照任何一个呈现蓝色，则说明试剂有问题，实
验无效。请跟厂家联系。
15.如果实验有效，则分析N+2个样品管的结果。如果样品管反应液的颜色接近扩增
阳性对照管则说明有扩增，如果接近无模板和无引物的阴性对照，则说明无扩增。
反应结果示例见左图（9为阴性，10为阳性）。
16.如果是用荧光PCR仪进行扩增，则可分析扩增曲线和Ct。试剂盒提供的阳性对照
的Ct将小于60，如果大于60，说明试剂可能失效，需跟厂家联系。无模板阴性
对照和无引物阴性对照的Ct将大于90。如果任何小于90，则说明试剂或环境被
污染，需重复实验或跟厂家联系。如果阳性对照和阴性对照Ct都在正常范围，则
分析样品的Ct。Ct小于60的判断为阳性，大于90判为阴性，在60-90之间则
需要重复检测。
17.如果使用PCR仪、金属浴或水浴进行扩增，肉眼检测，再使用荧光定量PCR仪
进行终点法荧光读数来判断阴阳性，则先比较阳性对照和阴性对照。阳性对照样品
扩增后信号增幅应该超过100%，阴性对照扩增后信号增幅应该低于50%，否则
实验无效，请与厂家联系。如果两个对照均有效，则比较样品扩增前后荧光读数的
差值。如果扩增后荧光信号增幅低于50%，则判断为阴性。如果荧光信号增幅高
于100%，则判断为阳性。荧光信号增幅在50-100%之间的，则需要重测。
18.当实时荧光检测和可视化检测同时用于判读结果时，如果彼此不一致，以实时荧光
LAMP的数据为准。一般可视化结果滞后实时荧光检测结果20-30分钟，也就是
说，在qPCR仪上第30分钟时呈现阳性的样品，其反应液的颜色变化一般在第
50-60分钟时才能观察到。
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