检测依据：?GB/T?5750.2-2006 生活饮用水标准检验方法 水样的采集和保存?GB/T?5750.12-2006 生活饮用水标准检
验方法 微生物指标本文主要包含?1. 生活饮用水中的微生物指标?2. 水样采集规则及注意事项?3. 菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠
菌群、大肠埃希氏菌的测定方法?4. 对所检测水样的综合分析生活饮用水中的微生物指标菌落总数水样在营养琼脂上有氧环境下，37℃培养4
8h后，所得1mL水样所含菌落的总数。检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被检样品的微生物污染程度和安全性。水样菌落总数越多，说
明水被微生物污染程度越严重，病原微生物存在的可能性越大，但不能说明污染的来源。总大肠菌群指一群在37℃培养24h能发酵乳糖，产酸产
气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。检测意义：作为粪便污染的指标。水样总大肠菌群的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表
明有肠道致病菌存在的可能。耐热大肠菌群指一群在44-44.5℃培养24h能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌
。我国习惯上称之为“粪大肠菌群”。微生物指标常规检验流程图一、水样采集采样原则：所采集的样品具有代表性。采样容器：不能是新的污染源
：不吸收或吸附某些待测组分不与待测组分发生反应。保证从采样到分析期间样品各组分的浓度不发生改变。微生物样品必须按一般无菌操作的基本
要求采集，并保证在运送、贮存过程中不受污染。自来水水样：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌再开放水龙头使水流5min(经常用水的
水龙头放水1~3min)后，采集水样于无菌玻璃瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水样。水源水水样：选有代表性的地点及可疑地方，一般距水
面下10-15cm采集，采样后在水中改好盖子，再从水中取出。注意事项1. 严格无菌操作。2.?做好标记：采得水样后应立即记录水样名
称、地点、时间等内容。3. 从速送检。水样从采集到检验不应超过2h，在4℃下保存不应超过24h。二、菌落总数测定所需培养基和试剂：
营养琼脂、9mL无菌生理盐水管。自来水水样检测操作步骤：1. 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中。2
. 倾注约15mL已融化井冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿；使水与培养基充分混匀（每次检验时应做一平行接种，同时另
用一个平只倾注营养琼脂养基作为空白对照）3. 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃±1℃培养箱内培养48h，进行菌落计数
，即为水样1mL中的菌落总数。4. 培养完成后，用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。结果分析与报告：计算平均菌落数，若菌
落总数(CFU/mL)当检样的菌落数为1~100时，按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字报告。国家标准(GB5749-20
06)规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超过100个。水源水检测操作步骤：1. 以无操作方法吸取1mL充分混匀的水，注入盛有9mL灭
菌生理盐水的试管中，混匀成1:10稀释液。2. 吸取1:10的稀释液1mL，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀
师液，按同法依次稀释成1:1000，1:1000释液等备用（如此递增稀释一次，必须更换一支1m灭菌管）。3. 然后用无菌极管取稀释
的水样和2个~3个适释度的水样1mL，分别注入灭菌平皿内。之后操作同自来水水样的检验步骤。结果分析与报告：计算平均菌落数，首先选择
平均菌落在30~300之间者进行计算。一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系：注意事项1. 菌落总数测定中，应选择合适的稀释度进行
(生活饮用水，国家标准规定每毫升不得超过100个，因此以直接吸取1毫升到平板进行培养)2. 各稀释管、相应半皿做好标记。包括：水样
名称、稀释度、时间、小组。3. 严格无菌操作进行水样稀释时，每一稀释度均需更换吸管。4. 倾注时，要注意营养琼脂的温度。5. 倾入
琼脂后要混匀，待琼脂凝固后倒置培养。三、总大肠菌群测定所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、双料乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基。多
管发酵法步骤：初步发酵试验：采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养24h观察产酸产气情况。平板分离：对阳性管培养物，接种于伊红美蓝培养
基观察菌落特征，并进行革兰氏染色和镜检。复发酵证实试验：对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验。结果报告(M
PN)：根据 GB 5750.12-2006 所附检索表报告结果。四、耐热大肠菌群测定所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、EC肉汤
、伊红美蓝培养基多管发酵法步骤：初步发酵试验：采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养24h观察产酸产气情况。耐热培养：阳性管接种在EC
肉汤管中，44.5℃培养24h观察产酸产气情况。平板培养：阳性管接种在EMB平板上，36℃±1℃培养24h。结果报告(MPN)：根
据 GB 5750.12-2006 所附检索表报告结果。五、大肠埃希氏菌测定所需培养基和试剂：EC-MUG培养基多管发酵法步骤：耐
热培养：将总大肠菌群初发酵中产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测，接种此类试管中的液体到EC-MUG管中，在培养箱或恒温水浴中44.
5℃培养24h。如使用恒温水浴，在接种后30min内进行培养，使水浴液面超过EC-MUG管的液面。结果报告(MPN)：?将培养后的EC-MUG管在暗处用366nm紫外灯照射，如有蓝色荧光，则表明水样中含有大肠埃希氏菌。?计算EC-MUG阳性管数，根据GB 5750.12-2006所附检索表报告结果。 |
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