第14单元 基因工程基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技
术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术基因工程生物体外(DNA)分子基因重组定向
1、不同生物的基因为什么能拼接？2、外源基因为什么能在受体细胞中表达？(1)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。(2)都遵循碱
基互补配对原则。(3)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。(1)基因是控制生物性状的结构和功能单位。(2)遗传信息的传递
都遵循中心法则。(3)生物界几乎共用一套遗传密码。基因工程诞生的理论基础基因工程的基本工具剪刀针线运输车限制性内切核酸酶DNA连接
酶运载体 重组DNA技术的基本工具一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”1.简称：限制酶2.来源： 主要是从原核生物中分离纯化出来
的。3.种类：数千种4.作用部位（特点）：①识别双链DNA分子的特定核苷酸序列（识别序列）②使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开（
切割位点）EcoRⅠ限制酶SmaⅠ限制酶5.限制酶识别序列:大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成少数的识别序列由4、5或8个核苷
酸组成6.作用结果:形成两种末端回文序列（反向对称）中轴线中轴线5’3’3’5’CCCGGGCCCGGG不同酶可能会产生相同的黏性
末端。如：HindⅢ和AluⅠ限制酶的识别序列越短，酶切位点在基因组中的分布频率就越高。（1）则能被Hind Ⅲ切割的DNA，__
____（能/不能）被限制酶Alu Ⅰ切割；（2）能被限制酶Alu Ⅰ切割的DNA，________________ 被限制酶Hi
nd Ⅲ切割。能不一定能1.要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？要切两个切口，产生四个黏
性(平)末端3.为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？①不具备这种限制酶的识别切割序列。②通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上
，使限制酶不能将其切开。2.推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么？原核生物容易受到自然界外源 DNA 的入侵，所以它在长期的进化
过程中形成了一套完善的防御机制。限制酶就是它的一种防御性工具。当外源 DNA 入侵时，它会利用限制酶来切制外源 DNA ，使之失效
，以保证自身的安全。1.作用：将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子。片段1片段2新的DNA二、DNA连接酶──“分子缝合针”E
·coli大肠杆菌互补黏性末端黏性末端平末端2.种类二、DNA连接酶──“分子缝合针”与DNA相关的五种酶的比较与DNA相关的五种
酶的比较酶1酶2酶4酶3酶5酶1:限制酶 酶2:DNA连接酶 酶3:解旋酶 酶4:DNA聚
合酶 酶5:DNA水解酶三、基因进入受体细胞的载体---“分子运输车” 1.作用：2.常用的载体之一：质粒将外源基因送
入细胞(受体细胞)①质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。
大肠杆菌细胞拟核DNA质粒质粒目的基因插入位点复制原点氨苄青霉素抗性基因质粒②质粒作为载体需要具备的条件2.常用的载体之一：质粒载
体携带目的基因导入受体细胞的成功率不高，因此需要筛选出导入目的基因的受体细胞。氨苄青霉素抗性基因导入未导入未导入含氨苄青霉素的培养
基标记基因通常有①抗生素的抗性基因，如:抗氨苄青霉素基因(ampr)、抗四环素基因(tetr)②荧光蛋白基因，如:绿色荧光蛋白基因
(GFP)、红色荧光蛋白基因(RFP)目的基因质粒噬菌体动植物病毒3. 载体的种类大小结构复制方式插入外源基因片段大小差别很大基因
工程载体运输工具分子运输车相当于比喻为②DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。探究·实验
DNA的粗提取与鉴定一、实验原理1.DNA粗提取原理①DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精（特别是95%的冷酒精），利用这一
原理，可以初步分离DNA与蛋白质。2.鉴定DNA的原理在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。二、实验设计原则：凡是含有DNA
的生物材料都可以考虑,但是，选用DNA含量相对较高的组织，成功的可能性更大。思考：不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核鱼卵、猪
肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞能否选用牛、羊、猪红细胞血做实验材料？为什么？×二、实验材料三、方法步骤四、用二苯胺鉴定DN
ANaCl溶液NaCl溶液(加入丝状物或沉淀物)对照组：加入一定量的2mol/L的NaCl溶液实验组：加入等量的2mol/L的NaCl并加入丝状物或沉淀物。鉴定结果对照组无颜色变化，实验组出现蓝色。THANKS! |
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