小儿氨酚黄那敏颗粒中人工牛黄和体外培育牛黄的研究
张 轶 华 ， 姜建国 ， 孙 婷 ， 郭永辉
( 河北省药品检验研究院 ， 河北 石家庄 050011)
收 稿 日期 : 2014-03-07
作者简介 : 张轶华 ( 1979—) ， 女 ， 硕士 ， 从事药品质量标准和药物分析研究 。E-mail: zhangyihua0915@163． com
摘 要 : 目 的 建立小儿氨酚黄那敏颗粒 ( 对乙酰氨基酚 、马来酸氯苯那敏 、人工牛黄 ) 中人工牛黄和体外培育牛黄
的 TLC 鉴别方法和胆红素的 HPLC 定量测定方法 。方法 胆酸和猪去氧胆酸的鉴别采用 TLC 法 ; 胆红素的 HPLC 测定
以甲醇 -三氯甲烷 -0. 1%磷酸 ( 88 ∶ 6 ∶ 6) 为流动相 ， 检测波长为 449 nm。结果 TLC 法可同时鉴别胆酸和猪去氧胆
酸 ; 胆红素的 HPLC 测定方法 ， 线性范围较宽 ( 0. 01 ～0. 1mg/mL) ， 平均回收率在 98. 6%以上 。结论 建立的方法可
快速区分人工牛黄和体外培育牛黄 。
关键词 : 小儿氨酚黄那敏颗粒 ; 人工牛黄 ; 体外培育牛黄 ; 胆酸 ; 猪去氧胆酸 ; 胆红素
中图分类号 : Ｒ927. 2 文献标志码 : A 文章编号 : 1001-1528( 2015) 02-0329-03
doi: 10. 3969/j． issn．1001-1528. 2015. 02. 021
Identification of artificial and in vitro cultivated Bovis Calculus in chlorphena-
mine maleate granules
ZHANG Yi-hua， JIANG Jian-guo， SUN Ting， GUO Yong-hui
( Hebei Provincial Institute for Drug Control， Shijiazhuang 050011， China)
KEY WOＲDS: Chlorphenamine Maleate Granules; artificial Bovis Calculus; in vitro cultivated Bovis Calculus;
cholic acid; hyodeoxycholic acid; bilirubin
小儿氨酚黄那敏颗粒为感冒用药类非处方药药
品 ， 适用于缓解儿童普通感冒及流行性感冒引起的
发 烧 、头 痛 、四肢酸痛 、打喷嚏 、流鼻涕 、鼻塞 、
咽痛等症状 。现行标准收载在国家药品标准第三
册
［ 1］
， 标准 中规定处方为 : 对乙酰氨基酚 125 g、
马来酸氯苯那敏 0. 5 g、人工牛黄 5 g 和辅料适量 ，
制成 1 000 袋 。但在市场上发现有的企业使用体外
培育牛黄代替人工牛黄 ， 处方量不变 ， 仍执行该现
行标准 。人工牛黄由胆酸 、猪去氧胆酸 、牛胆粉 、
胆红素 、微量元素等原料药物混合配制而成 ; 体外
培养的牛黄是国家一类新药 ， 是以牛科动物牛的新
鲜胆汁作母液 ， 加入去氧胆酸 、胆酸 、复合胆红素
钙等制成的棕黄色球形物 。已有文献报道有关人工
牛黄和体外培育牛黄的测定
［ 2-7］
， 但未见如何区分
二者的相关报道 。本实验建立了小儿氨酚黄那敏颗
粒中人工牛黄和体外培育牛黄中胆酸和猪去氧胆酸
的 TLC 鉴 别 方法 ， 并建立了测定二者中胆红素的
HPLC 测定方法 ， 该方法简便 、快速 、准确 ， 专属
性强 ， 能更好地控制药品质量 。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪 ( 美国戴安公司 ) ; 紫外分析仪
( 北京六一仪器厂 ) ; 硅胶 GF
254
板 ( 青 岛 海洋化工
厂 ) ; 对 照 品 胆 酸 ( 批 号 100078-200414， 纯 度 为
100%) ， 猪去氧胆酸 ( 批号 100087-200610， 纯度为
100%) ， 胆 红 素 ( 批 号 100077-201206; 纯 度 为
98.5%) 均购自中国药品生物制品检定研究院 ; 小儿
氨酚黄那敏颗粒样品 ( A 厂 ， 批号 20110307; B 厂 ，
批 号 110102; C 厂 ， 批 号 110401; D 厂 ， 批 号
11050329; E 厂 ， 批号 066110772; F 厂 ， 批号 120504;
G 厂 ， 批号 1203112; H 厂 ， 批号 4110902) ， 样品为
复方制剂 ， 来自 8 家不同企业 ， 各 1 批 ， 2 家企业
( A 和 B) 使用体外培育牛黄 ， 其余企业均采用人工
牛黄 。
甲醇为色谱纯 ( Fisher chemical) ， 其余试剂均
为分析纯 。
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2 方 法 与结果
2. 1 人工牛黄和体外培育牛黄的 TLC 鉴别
2. 1. 1 薄层色谱条件 薄层板为硅胶 G 板 ( 青岛
海洋化工厂 ) ， 展开剂为异辛烷 -乙酸乙酯 -冰醋酸
( 15 ∶ 7 ∶ 5) ， 点样量为 5 μL， 展开后晾干 ， 喷以
10% 硫酸乙醇溶液 ， 在 105 ℃ 加热至斑点显色清
晰 ， 置紫外灯 ( 365 nm) 下检视 。
2. 1. 2 对照品溶液的制备 分别称取胆酸和猪去
氧胆酸适量 ， 加甲醇制成每 1 mL 中含 1 mg 的混合
对照品溶液 。
2. 1. 3 样品溶液的制备 取本品细粉适量 ( 约相
当于人工牛黄 20 mg) ， 加三氯甲烷 50 mL， 超声处
理 30 min， 滤过 ， 滤液置水浴上蒸干 ， 残渣加甲醇
1 mL 使溶解 ， 作为供试品溶液 。
2. 1. 4 阴性对照的制备 除去人工牛黄或体外培
育牛黄 ， 模拟处方 ( 分别取各辅料的最大量 ) 按样
品溶液的制备方法 ， 制成阴性对照液 。
2. 1. 5 样品测定结果 对照品溶液在紫外灯 ( 365
nm) 下检视可见 2 个蓝紫色荧光斑点 ， 分离度良
好 。A 和 B 企业采用体外培育牛黄仅检出胆酸 ， 其
他企业均检出胆酸和猪去氧胆酸 。这与人工牛黄和
体外培育牛黄的组成完全吻合 。该方法可以快速地
区分是否采用体外培育牛黄 ， TLC 图见图 1。
图 1 胆酸和猪去氧胆酸的 TLC 鉴 别 图
Fig. 1 TLC identify picture of cholalic acid and
hyodeoxycholic acid
2. 2 人工牛黄和体外培育牛黄中 胆 红素的 HPLC
法测定
2. 2. 1 色 谱 条 件 Agilent ZOBAX C
18
色 谱 柱
( 4. 6 mm × 200 mm，5 μm) ; 流动相为甲醇 -三氯
甲烷 -0. 1%磷酸 ( 88 ∶ 6 ∶ 6) ; 检测波长 449 nm;
进样量 10 μL; 体积流量 1. 0 mL/min; 柱温 30 ℃。
2. 2. 2 对照品溶液的制备 精密称取胆红素对照
品 10 mg， 置 100 mL 棕色量瓶中 ， 加三氯甲烷 -甲
醇 -水 -盐酸 ( 90 ∶ 10 ∶ 0. 3 ∶ 0. 03) 混合液适量 ， 超
声使胆红素溶解并稀释至刻度 ， 摇匀 ; 再精密量取
2 mL， 置 25 mL 棕色量瓶中 ， 用上述溶剂稀释至
刻度 ， 摇匀 ， 作为对照品溶液 。
2. 2. 3 供试品溶液的制备 取本品 5 袋内容物 ，
置 100 mL 锥形瓶中 ， 精密加三氯甲烷 -甲醇 -水 -盐
酸 ( 90 ∶ 10 ∶ 0. 3 ∶ 0. 03) 混合液 25 mL， 称定质
量 ， 超声提取 20 min， 取出 ， 迅速冷却至室温 ， 再
称定质量 ， 用上述混合液补足减失质量 ， 摇匀 ， 滤
过 ， 作为供试品溶液 。
2. 2. 4 空白溶液的制备 按处方比例 ， 按供试品
溶液的制备方法 ， 制备不含人工牛黄或体外培育牛
黄的空白样品 。
2. 2. 5 专属性试验 精密量取对照品溶液 、供试
品溶液及空白样品溶液各 10 μL 注入液相色谱仪 ，
记录色谱图 ， 对照品溶液与样品溶液主峰的保留时
间一致 ， 其他共存组分 ( 对乙酰氨基酚和马来酸
氯苯那敏 ) 及空白样品溶液均对测定胆红素无干
扰 。见图 2。
2. 2. 6 线性关系 取 “2. 2. 2”项下对照品贮备
液逐级稀释 ， 按照 “2. 2. 1”项色谱条件测定 ， 以
各组分峰面积为纵坐标对相应的质量回归绘制标准
曲线 ， y =19. 077 +6 697. 3x， r =0. 999 2， 表明在
0. 01 ～0. 1 mg/mL 范围内线性关系良好 。
图 2 对照品和样品色谱图
Fig. 2 HPLC chromatograms of reference substance and sample
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2. 2. 7 精 密 度试验 取对照品溶液 10 μL， 按上
述色谱条件重复进样 5 次 ， 测定峰面积 ， 胆红素峰
面积的 ＲSD 为 0. 8% ( n =5) 。
2. 2. 8 重复性试验 取 C 厂样品按 “2. 2. 3”项
下方法制备供试液 ， 平行制备 5 份 ， 进样 10 μL 测
定 ， 胆红素的含有量平均值为 0. 028 2 mg/袋 ，
ＲSD 为 0. 6% ( n =5) 。
2. 2. 9 稳定性试验 取 C 厂样品溶液 ， 于避光阴
凉处放置 ， 2 h 为稳定 。
2. 2. 10 加样回收率试验 称取已测定含有量的 C
厂样品 ( 2. 5 袋 ) ， 平行 9 份 ， 分别精密量取胆红
素对照品贮备液 1. 6、2、2. 4 mL， 回收率均在
98. 6%以上 。
2. 2. 11 样品测定 对 8 个厂家的样品进行胆红素
的定量测定 ， 以标准曲线法计算 ， 结果见表 1。
表 1 测 定 结果 ( x ±s， n =3)
Tab. 1 Ｒesults of bilirubin content ( x ±s， n =3)
厂 家 批 号 胆红素 /( mg/袋 )
A 20110307 0. 27 ±0. 2
B 110102 0. 70 ±0. 3
C 110401 0. 028 ±0
D 11050329 0. 029 ±0. 4
E 066110772 0. 027 ±0. 6
F 120504 0. 026 ±0. 8
G 1203112 0. 017 ±0. 4
H 4110902 0. 022 ±0
3 讨 论
3. 1 现行标准中采用显色反应鉴别人工牛黄中的
胆酸 ， 由于各企业添加的辅料不同 ， 溶液呈现的颜
色也不尽相同 ， 有的蓝紫色明显 ， 但深浅不一 ， 有
的则略呈棕黄色 ， 见图 3， 很难判断样品是否合
格 ， 且该鉴别方法无法区分人工牛黄和体外培育牛
黄 。本实验采用的方法可同时鉴别胆酸和猪去氧胆
酸 ， 也可快速区分人工牛黄和体外培育牛黄 ， 以避
免不良厂家以人工牛黄冒充价格昂贵的体外培育
牛黄 。
3. 2 人工牛黄和体外培育牛黄中均以胆红素的价
格最高 ， 体外培育牛黄中的胆红素量约为人工牛黄
中的 10 倍以上 ， 因此应对胆红素量进行控制 ， 并
规定限度分别为 0. 027mg/袋和 0. 27mg/袋 。从表 1
图 3 显色反应的颜色对比图
Fig. 3 Colour contrast of solution
中 ， 可以看出由于现行标准中未对胆红素的量进行
控 制 ， 存在企业底限投料和少投料的现象 。
3. 3 人工牛黄和体外培育牛黄的组成不同 ， 但处
方量均为 5 mg/袋 ， 且执行同一标准 ， 显然不合
理 ， 建议分别制订处方和执行标准 。
3. 4 由于现行标准无法区分人工牛黄和体外培养
牛黄 ， 未对胆红素的含有量进行控制 ， 因此市场上
存在以次充好 ， 投料不足等现象 。本实验拟定的检
测方法 ， 操作简便 ， 可快速区分人工牛黄和体外培
养牛黄 ， 准确地测定胆红素量 ， 也可对不良厂家提
出警示 ， 从而提高药品的内在质量 。
参 考 文献 :
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标准上升国家标准 : 第三册 ［ S］ ． 2002: 53-54．
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及其制剂中胆酸的含量 ［ J］ ． 中成药 ， 2003， 25 ( 4) :
290-293．
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牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量 ［ J］ ． 药物分析杂志 ，
2010， 30( 4) : 706-709．
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