世界首例干细胞气管移植手术完成2010年3月19日，英国和意大利两国医生联合完成世界首例气管移植手术。这个手术的特别之处在于，植入患者体内的
捐献者的气管已经被剥离掉细胞，只剩一个“架子”，而医生则将从患者体内提取的干细胞注入这个“架子”中。这样，最终长成后的气管就不会产
生任何排异现象，从而攻克了气管移植手术抗排异难这一世界性难题。骨髓干细胞移植法治疗下肢动脉狭窄浙江大学医学院附属第二医院外科采用骨
髓干细胞移植法，使一位下肢动脉广泛性严重狭窄的病人恢复了正常血液循环。该患者腿疼痛得难以下地走路，夜晚睡梦中也经常被痛醒。经医生检
查，其症状是长期高血压，动脉硬化，右下肢许多动脉血管越来越狭窄引起的。但这种病没有特效药物，也无法开展手术。为解除病人痛苦，陈力教
授抽取患者的骨髓干细胞，分点注射到大腿和小腿的肌肉内，让干细胞转化成血管细胞，在一段时间内生长出新的血管，使病人疼痛逐渐消失。手术
3个星期后，医生用动脉造影和红外线热像图复查患者下肢，显示血液循环明显改善。现在的造影图像与治疗前相比，腿上小血管增多。手术前，患
病的右腿比正常的左腿皮温低，现在右腿皮温升高了2～3摄氏度，与左腿一样了。第十八章 干细胞及其利用第一节 干细胞概述 一、干细
胞的概念1.干细胞（stem cell） 是指具有无限或较长期的自我更新（self-renewal）能力，并能产生至少一种高度分化
子代细胞的细胞。它存在于人体或动物个体发育各个阶段及成体的各种组织器官中，是各种分化细胞或特化细胞的初始来源。 第一节 干
细胞概述概述根据分化潜能的高低： 全能干细胞 多能干细胞 单能干细胞 根据细胞来源时期不同:
胚胎干细胞 成体干细胞2.干细胞的分类全能干细胞（totipotent stem cell）：能发育为一个完整个
体的原始细胞。（受精卵、人体8-16细胞以前的卵裂球）万能干细胞：来源于早期囊胚腔的内细胞团，虽然失去发育为完整个体的能力，但理论
上具有分化形成个体中各种细胞的潜能，如胚胎干细胞（ES cell）。多能干细胞（pluripotent stem cell）：只能
分化形成几种特定类型的细胞，如：骨髓基质干细胞（MSC）单能干细胞（monopotent stem cell）：只能向密切相关的一
种或两种类型的细胞分化的细胞。（上皮组织基底层的干细胞、肌肉中成肌细胞）。胚胎干细胞(embryonic stem cell；ES
cell)：存在于早期胚胎组织中、具有高度增殖能力和多向分化潜能，但尚未分化的干细胞。成体干细胞（adult stem cell
）：存在于成体各组织器官的未分化细胞，在体内具有终生自我更新能力和分化潜能。二、干细胞的生物学特性（一）干细胞的形态和生化特征1
. 形态特征通常呈圆形或椭圆形，体积较小，核质比例相对较大。 二、干细胞的生物学特性（一）干细胞的形态和生化特征1. 形态特征2
. 生化特征干细胞都具有较高的端粒酶活性；不同的干细胞具有不同的生化标志。如：nestin为神经干细胞的标志分子；角蛋白15是确定
毛囊中表皮干细胞的标志分子；CD34是造血干细胞的标志分子等等。 干细胞的生化特性常被用作鉴定干细胞在组织中的存在和评价
其分化程度的标志。二、干细胞的生物学特性（二）干细胞的增殖特性1. 缓慢性2. 自稳性1. 缓慢性 干细胞自身的增殖非常缓慢。干细
胞意义:①有利于干细胞对特定的外界信号作出反应，以决定进行增殖还是进入特定的分化程序；②可以减少基因发生突变的危险，使干细胞有更多
的时间发现和校正复制错误，具有防止体细胞自发突变的作用。 一般情况下，干细胞处于休眠或缓慢增殖状态，当其接受刺激而进行分化
时，需产生过渡类型细胞再到分化细胞。1、缓慢性干细胞自身的增殖非常缓慢。干细胞过渡放大细胞过渡放大细胞：分裂速度快。意义：可使少量
干细胞产生较多的分化细胞，同时保护干细胞。 在干细胞到分化细胞的发育过程中，有两种过渡类型的细胞——过渡放大细胞和祖细胞。
祖细胞：为前体细胞，经过几次分裂后，产生的细胞为终末分化细胞。祖细胞2. 自稳性干细胞通过自我更新以维持自身数目恒定。是区别于肿瘤
细胞的本质特征。干细胞短暂增殖细胞祖细胞（1）对称分裂（symmetry division）：当干细胞分裂时，产生的2个子代细胞都
是干细胞或都是分化细胞。（2）不对称分裂（asymmetry division）：当干细胞分裂时，产生一个子代干细胞和一个子代分化
细胞。2. 自稳性在个体的发育过程中，干细胞通过自我更新以维持自身数目恒定。是区别于肿瘤细胞的本质特征。（1）对称分裂（symme
try division）：当干细胞分裂时，产生的2个子代细胞都是干细胞或都是分化细胞．（2）不对称分裂（asymmetry di
vision）：当干细胞分裂时，产生一个子代干细胞和一个子代分化细胞．在正常生理状态下，干细胞多以不对称分裂方式用于补充组织在自我
更新过程中衰老和死亡的细胞。（不对称分裂使机体对干细胞的调控更具有灵活性，可以更灵活地应对机体生理变化的需要。） 在创伤等应激状态
时，由于需要大量的细胞代替和补充坏死的组织细胞，干细胞的分裂方式可能就不再局限于不对称方式，可以以对称分裂的方式快速增殖。2. 自
稳性1. 干细胞的分化潜能 干细胞分化具有多潜能性，不同干细胞的分化潜能不同。 干细胞可按其分化潜能分为：全能干
细胞、多能干细胞和单能干细胞。 （三）干细胞的分化特征二、干细胞的生物学特性1. 干细胞的分化潜能 2. 干细胞的转分化和去分化
目前的研究发现，成体干细胞具有一定的可塑性（plasticity），即不同组织来源的成体干细胞之间可相互转化。包
括干细胞的转分化和去分化。 （三）干细胞的分化特征二、干细胞的生物学特性一种组织类型的干细胞在适当条件下可以分化为另一种组织类型的
细胞，称为干细胞的转分化。1997年，研究首次证明成年动物的造血干细胞可分化成为脑的星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞。目前，
类似的发现还包括成体造血干细胞分化成为肌细胞、肝细胞；神经干细胞转化为造血干细胞等等。 三、干细胞增殖和分化的调控内源性调控—转
录因子网络 细胞微环境 细胞因子 细胞间相互作用 细胞外基质 第二节 各类干细胞及其特性一、胚胎干细胞胚胎干细胞：是指存在于早期
胚胎中，具有多向分化潜能和较长期地进行自我更新的细胞。包括： 囊胚内细胞团的胚胎干细胞（ES细胞） 早期胎儿（5-9周）
原始生殖嵴的生殖干细胞（EG细胞） 异常胚胎干细胞——畸胎瘤细胞（一）生物学特性1. 形态特征 圆形；细胞体
积小；核质比例高，细胞核明显，有一个或多个核仁，染色质较分散；核型正常、二倍体；细胞质内散布着大量的核糖体和线粒体。2. 生长特征
体外培养细胞呈多层集落状生长，紧密堆积在一起，无明显细胞界限，形似鸟巢。（一）生物学特性 关键:维持干
细胞的未分化状态。 饲养层细胞（成纤维细胞株）培养体系 3. 生化特征 （1）表面抗原 ：胚胎阶段性特异抗原（st
age-specific embryonic antigens, SSEA）（一）生物学特性 SSEA是一种糖蛋白，在胚胎发育早
期表达，常作为胚胎干细胞的标志之一，具有种属特异性。 如：人的ES细胞表达SSEA-3、SSEA-4，而小鼠的ES细胞表达SSEA
-1；3. 生化特征 （1）表面抗原 ：阶段特异性胚胎抗原（一）生物学特性（2）碱性磷酸酶（AKP） 碱性磷酸酶（AKP）
是鉴定胚胎干细胞分化与否的标志之一。 （3）端粒酶 胚胎性干细胞端粒酶持续高水平表达；使这些细胞在分
裂后保持端粒长度，维持细胞的分裂增殖能力。 4. 分化潜能 人胚胎干细胞具有分化形成外、中、内三个胚层的潜能。（一）生物学特性
将胚胎干细胞注射到同源动物或严重免疫缺陷的小鼠的皮下或肾囊中，在注射部位可形成畸胎瘤。（1）体内分化 检测畸胎
瘤组织可观察到来源于三个胚层的不同的细胞类型，如：平滑肌和横纹肌（中胚层）、神经表皮和神经节（外胚层）。4. 分化潜能 （一）生物
学特性 （1）体内分化 （2）嵌合体的形成 将供体的胚胎干细胞注入受体胚泡中，然后转移到假孕母体子宫中进一步发育，可
得到嵌合体动物，该动物身体中既可观察到供体的组织细胞，又有受体的组织细胞。 嵌合体动物的形成是鉴定细胞是否具有多
能性的最有说服力的实验证据。4、分化潜能 （一）生物学特性（二）胚胎干细胞定向诱导分化 定向分化：在适
宜条件下，使胚胎干细胞按照人们的意愿分化为某一特定谱系的细胞，称为胚胎干细胞的定向分化。 意义： ①
胚胎干细胞体外诱导分化系统：用于研究某些前体细胞起源和细胞谱系演变； ②有利于研究胚胎干细胞生长和分化的影响因素；
③研究胚胎发育相关基因的功能；制备转基因动物； ④按照人的意愿来控制人的胚胎干细胞的定向分化，并将这些转化的
细胞应用于临床治疗。（二）胚胎干细胞定向诱导分化 胚胎干细胞定向分化的常用策略是改变细胞的微环境，目前主要从三方面进行：
1、在体外培养时改变细胞培养条件，包括： ①向培养基中加入不同种类的生长因子及化学诱导剂； 如：表皮生长因子、血小板
衍生生长因子、血管内皮生长因子、维甲酸、二甲基亚砜等等。诱导剂可单独或配伍使用，诱导物不同，干细胞的分化方向亦不同。 （二）胚胎
干细胞定向诱导分化 胚胎干细胞定向分化的常用策略是改变细胞的微环境，目前主要从三方面进行：1、在体外培养时改变细胞培养条
件，包括： ①向培养基中加入不同种类的生长因子及化学诱导剂；②将胚胎干细胞与其他细胞一起培养，并加入不同类型的细胞来诱导细胞分化；
③将细胞接种在适当的底物上。这些因素将促使胚胎性干细胞沿着某一特定谱系进行分化。 （二）胚胎干细胞定向诱导分化 1、在
体外培养时改变细胞培养条件2、导入外源性基因来激活细胞的特定分化。 ①必须明确导入基因定向分化的方向；②选择合适的导入时间；③选择
准确的导入位置。（二）胚胎干细胞定向诱导分化 1、在体外培养时改变细胞培养条件2、导入外源性基因来激活细胞的特定分化。 3、体内定
向分化 即将胚胎性干细胞移植到动物体内的某一部位，在体内的细胞诱导等不同的微环境中，分化为该部位相应的特异细胞
。 如，将小鼠ES细胞直接移植到帕金森病大鼠模型的心脏和纹状体，成功地分化为相应的心肌细胞和神经元。 （二）胚胎干细胞定
向诱导分化 1. 基因功能研究 2. 发育机制研究3. 药物监测系统的构建4. 细胞替代疗法和组织器官移植（三）胚胎干细胞的应用
人胚胎干细胞的主要来源： 流产的胎儿和体外受精制造的胚胎 2001年8月，美国时任总统布什宣布
对胚胎干细胞研究设限，规定联邦政府对胚胎干细胞研究的资助仅限于研究当时已有的胚胎干细胞，不得资助从新胚胎中提取干细胞进而开展研究。
2009年3月，美国总统奥巴马前天签署行政令，推翻2001年禁用政府经费资助人类胚胎干细胞研究的条例，科学家为此鼓掌、支持者高声欢
呼。 NIH美国国立卫生研究所 关于胚胎干细胞研究的指导原则允许1.从人胚胎组织中获得新细胞系 2.使用私人资助、已经获得的来自人
胚的细胞系进行研究 3.允许新生儿脐带血中提取造血干细胞 4.允许新生儿胎盘组织提取亚全能干细胞 禁止1.使用来自胎儿组织的细胞系
进行研究 2.用干细胞创建人胚胎的研究 3.将人胚胎干细胞与动物胚胎结合的研究 4.使用干细胞进行生殖克隆 5.来自为研究目的而专
门创建的胚胎的干细胞有关研究 人胚胎干细胞的主要来源： 流产的胎儿和体外受精制造的胚胎 诱导性多
潜能干细胞（ｉＰＳ细胞） 二、诱导性多能干细胞 for the discovery that mature cells can
be reprogrammed to become pluripotent诱导产生的多功能干细胞（ｉＰＳ细胞）2006 年, T
akahashi 和Yamanaka将几个转录因子导入已分化的小鼠皮肤成纤维细胞, 进而获得了类似于胚胎干细胞(embryonic
stem cells, ES 细胞)多能性干细胞, 称之为“诱导产生的多能性干细胞”(induced pluripotent s
tem cells, iPS 细胞). 这一研究明确地证实了分化的细胞可以通过少数几个因子的外源导入而被重编程到具有多能性的状态,
因而受到了整个生命科学领域的广泛关注。２００７年１１月，美国和日本科学家分别宣布独立发现将普通皮肤细胞转化为干细胞的方法，得到的
干细胞称为诱导多功能干细胞，这一发现分别被《自然》和《科学》杂志评为２００７年第一和第二大科学进展。 ２００８年４月，美国加利福尼
亚大学科学家报告称，他们将实验鼠皮肤细胞改造成ｉＰＳ细胞，然后成功使其分化成心肌细胞、血管平滑肌细胞及造血细胞。 ?２００９年２月
，日本东京大学科学家宣布，成功利用人类皮肤细胞制成的ｉＰＳ细胞培育出血小板，而且从技术上说用ｉＰＳ细胞培育人类红细胞和白细胞都是可
能的；紧接着，日本庆应大学科学家又宣布，成功用实验鼠的ｉＰＳ细胞培育出鼠角膜上皮细胞。 ?２００９年３月伊始，ｉＰＳ细胞研究便相继
迎来两项重大突破。英国和加拿大科学家发现了不借助病毒、安全将普通皮肤细胞转化为ｉＰＳ细胞的方法；美国科学家则在《细胞》杂志上宣布，
他们可以将ｉＰＳ细胞中因转化需要而植入的有害基因移除，且保证由此获得的神经元细胞的基本功能不受影响。 诱导产生的多功能干细胞（ｉＰ
Ｓ细胞）２００９年７月，ｉＰＳ细胞研究在临床应用道路上又迈出非常重要的一步。据英国《自然》杂志网站２３日报道，中国科学家周琪和高绍
荣等人利用ｉＰＳ细胞克隆出活体实验鼠，首次证明ｉＰＳ细胞具有全能性。该成果让人们看到了ｉＰＳ细胞具有实用性。 继前不久在世界上首次
得到完全由诱导多能干细胞（即iPS细胞）发育的小鼠之后，中国科学家在iPS细胞研究领域又取得重大进展：首次从孕妇产前的羊水细胞中高
效快速建立iPS细胞，所需时间只有6天，为目前人类iPS细胞相关报道中最短。美国《时代》周刊在其网站上公布了2010年十大医学突破
名单，其中“可降低HIV感染风险的抗艾滋病药”、“人工合成细胞”、“老年性痴呆症的血液检测”及“更快更安全培育iPS细胞”等成果入
选。 诱导产生的多功能干细胞（ｉＰＳ细胞）iPS研究陷入瓶颈阶段自2006年日本京都大学的山中伸弥第一次成功地将小鼠皮肤细胞转化生
成诱导多能干(iPS)细胞至今，对于从事iPS研究的科研工作者而言五年时光恍若眨眼一晃而过，在这一过程中科学家们一直致力于将成体细
胞编程的理念付诸到推动再生医学领域的改革中。然而近几个月来一些研究报道使得人们关注到iPS研究领域潜在的一些障碍：重编程效率低下，
诱导突变，重编程细胞无法分化形成某些细胞类型，构建的并非总是理想的疾病模型等。iPS细胞：人造肿瘤细胞？ Yamanaka研究组在
《自然·生物技术》上发表的文章显示，用iPS细胞诱导的神经干细胞，即使不含c-myc（曾被认为是导致肿瘤的主要原因），在植入NOD
/SCID免疫缺陷小鼠后仍有很强的致瘤性，甚至高于胚胎干细胞。iPS产生快速的免疫排斥反应 来自加州大学圣地亚哥分校的研究人员在5
月13日《自然》（Nature）杂志上发表的一篇文章中称他们在小鼠中证实将诱导多能干细胞（iPSCs）分化生成的多种组织移植至动物
体内会产生快速的免疫排斥反应，即便iPSCs的起源细胞来自于移植小鼠本身。这一研究结果或将对再生医学领域造成巨大的震动 。Natu
re三篇文章：iPS细胞的遗传缺陷 国际著名生物学期刊《自然》（Nature）杂志同期发表了三篇论文分别针对iPS细胞的点突变、拷
贝数变异及DNA甲基化特征进行了研究，新研究发现或将促使研究人员更审慎地利用iPS细胞开展干细胞研究及临床应用。 ips细胞具更高
基因畸变频率加州大学圣地亚哥分校医学院及斯克里普斯研究所的干细胞科学家领导的跨国研究团队，记录了在人类胚胎干细胞(hESC)和诱导
功能干细胞(iPSC)系中特殊的基因畸变，题为《在细胞重组和培养过程中人类胚胎干细胞和诱导多功能干细胞的细胞增殖和全能性的拷贝数量
上的动态变化》已在1月7日的Cell Stem Cell上发表。该公布的发现强调了需要对多能干细胞进行频繁的基因检测以保证其稳定性
和临床安全性。 成体干细胞（adult stem cell）: 成体组织中具有自我更新能力及能分化产生一种或一种以上子代组
织细胞的未成熟细胞。成体干细胞的进一步分化是成年机体组织损伤修复和再生的保证，维持组织细胞功能的稳态。干细胞广泛存在于各种组织中。
三、 成体干细胞胚胎干细胞与成体干细胞的比较相同点：成体干细胞和胚胎干性细胞一样，具有自我更新的能力，并可在适宜条件下分化形成特
殊形态和特定功能的子细胞（分化潜能）。 不同点：①两者的来源不同。这是最根本的区别。胚胎性干细胞来源清楚，成体干细胞来源有待进一步
研究证明。②两者增殖能力有差别。胚胎性干细胞可无限增殖；而成体干细胞的增殖能力则很有限。 ③两者分化潜能有差别。胚胎性干细胞的分化
潜能高于成体干细胞。 第三节 肿瘤干细胞一、肿瘤干细胞和肿瘤干细胞学说肿瘤干细胞(cancer stem cell，CSC)
:存在于肿瘤组织中的具有干细胞性质的肿瘤细胞群体。肿瘤干细胞学说：肿瘤组织中存在极少量在肿瘤中充当干细胞角色的肿瘤细胞，具有无限增殖的潜能，在启动肿瘤形成和生长中起着决定性作用；而其余大多数细胞，经过短暂的分化，最终死亡。第四节 肿瘤干细胞二、肿瘤干细胞的来源 1、干细胞起源假说：成体干细胞突变而来。 2、分化祖细胞和成熟体细胞起源假说：在特定条件（致癌因子作用）下，已分化祖细胞及发生去分化的成熟体细胞也可能演变为肿瘤干细胞。三、肿瘤干细胞的生物学特性 1、增殖自主性和分化失控 ； 2、生存的独立性； 3、侵袭生长和转移性（恶性肿瘤的重要标志）； 4、表型不稳定性； 5、异质性（单一手段难以治愈肿瘤的症结所在）。四、将肿瘤治疗的重心从全体肿瘤细胞转向肿瘤干细胞。小 结掌握：干细胞的概念、干细胞的生物学特征；胚胎干细胞与成体干细胞的区别。熟悉：胚胎干细胞的概念和特征；肿瘤细胞的生物学特性。了解：干细胞增殖和分化的调控、干细胞的定向诱导分化；成体干细胞特征；肿瘤干细胞的来源。1. 干细胞的概念、分类、生物学特征2. 胚胎干细胞的概念、生物学特征复习思考题 |
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