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| 共 18 篇文章 |
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核酸的纯化_林林1_新浪博客 核酸的纯化。用酚：氯仿抽提。目前最好的办法是通过轻轻吸气移出DNA沉淀和离心管边缘上的乙醇，在实验台上敞口放置约15min挥去残余的乙醇，当DNA沉淀仍有些潮湿的时候用适当缓冲液溶解便可溶得快速而且完全。iii一般用乙醇从溶液中沉淀出来的DNA重溶于低离子强度的缓冲液如TE(pH8.0)中比较容易，偶尔在... 阅90 转自bengua1985 公众公开 10-07-12 12:24 |
酶切位点前加保护碱基 1，两个酶切点至少隔上3个碱基，在做载体构建的时候设计引物扩增片段进行定向连接，除了酶切位点，还要在两端加一个三个核苷酸的保护序列，否则PCR产物很难被酶切，因此就会导致连接失败，因为内切酶需要一定的辅助性碱基才能顺利切割，在没有辅助碱基的情况下，有的酶是可以切割的，比如：SalI和SpeI，他们不需要辅助性... 阅393 转自bengua1985 公众公开 10-06-08 23:05 |
无菌操作基本技术无菌操作基本技术。在具备无菌环境和获得无菌材料后，还要始终保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。无菌操作非常重要，无论是倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到"无菌"，只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能... 阅9787 转160 评0 公众公开 10-06-05 20:03 |
总mRNA的提取（自己的经验）：摘自生物在线一、 关于Trizol Reagent需要的试剂。（2） 加氯仿0.2ml（每1ml Trizol试剂加入氯仿0.2ml），盖好，剧烈震荡15s，置室温2-3分钟。（5） 加0.5ml异丙醇，以沉淀RNA（每1ml Trizol试剂加入0.5ml异丙醇），置室温10min。（7） 弃上清液，加入预冷的75%乙醇1ml（每1ml Trizol试剂加入75%乙醇至少1ml... 阅1713 转44 评0 公众公开 10-05-31 22:35 |
TRIZOL提取注意事项RNA降解。RNA的再溶解在操作的最后，简单干燥RNA沉淀（空气干燥或真空干燥5—10分钟）不要在真空管里离心干燥RNA。用移液管尖分几次移取无RNA酶的水或0.5% SDS溶液来溶解RNA，并在55—60.C下孵育10分钟（当RNA以后要用于酶切反应时，避免使用SDS。）RNA还能被100%甲酰胺（除去离子）再溶解并保存在-70.C。RNA沉淀（步骤4，RN... 阅2639 转20 评0 公众公开 10-05-31 22:09 |
1. 提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；3. 在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8... 阅1333 转42 评0 公众公开 10-05-31 21:55 |
RNA extraction buffer:4M Guanidine thiocyanate 20 mM EDTA 20 mM MES Adjust pH to 7.0 Add RNase-free water to final volume 400 ml, filtrate and autoclave, store at R.T. Add 1.7ml (the final concentration is 50 mM) 2-mercaptoethanol to each 400ml solution and store at 4oC.2M Lithium Chloride 10mM Sodium Acetate Adjust f... 阅107 转4 评0 公众公开 10-05-31 21:49 |
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核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液中，其碱基不解离，而磷酸基团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。3 电泳将电泳仪的正极与电泳槽的正极相连，负极与负极相连，核酸带负电荷，从负极向正极移动。电泳槽中电泳缓冲液与制胶用电泳缓冲液应相同，电泳缓冲液刚好没过凝胶1 mm 为好，电泳缓冲液太多则电流加大，... 阅173 转自bengua1985 公众公开 10-05-22 15:15 |
trizolRNA抽提指南(TRIZOL)2010-03-25 20:14.实验所需但试剂未提供的物品：* 氯仿 *异丙醇* 75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)*无RNA酶的水或0.5% SDS溶液［配无RNA酶的水，将水加入无RNA酶的玻璃瓶中，加入DEPC至0.01% (v/v)。用移液管尖分几次移取无RNA酶的水或0.5% SDS溶液来溶解RNA，并在55—60.C下孵育10分钟（当RNA以后要用于酶切反应时，避... 阅16 转自bengua1985 公众公开 10-05-22 15:14 |
