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在miRNA的PCR定量检测实验中,由于miRNA的长度在22nt左右,而引物的的一般长度是15-30nt,无法做到根据其序列直接设计引物用于PCR扩增,因此实验的第一步通常是在miRNA的反转录中利用一些特定的方法使得得到的cDNA得以延长,从而更加有助于下游检测。以上便是如何基于PCR或NGS进行miRNA定量检测的实验方案介绍,通常在获得目标miRNA的表达量或... 阅322 转1 评0 公众公开 23-04-10 10:01 |
排雷文献中的垃圾引物。热腾腾的引物就这么出来了,下图显示的是该序列的整体信息及引物在整个序列中的位置。一般引物本事比较需要关注的就是红色标记的几个值尽量小于4,蓝色标记为引物跨的外显子的位置,这里边反应的是引物主观上的好坏。输入想要验证的引物序列,选择对应的数据库,如果研究的是编码蛋白的数据库就选择mRNA数据库,如果研究... 阅5 转0 评0 公众公开 23-02-24 10:03 |
PCR 实验汇总(新手指南)PCR,又称聚合酶链式反应,基本原理类似于 DNA 的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 实验基础篇?? PCR 实验原理及步骤?? PCR 引物设计原理与方法?? 怎样在线做 PCR 引物设计?? PCR 反应体系的循环参数?? 变性、退火温度对 PCR 热循环的影响PCR 实验结果篇从引物设计到结果分析,非常... 阅37 转0 评0 公众公开 23-01-14 20:02 |
对于circRNA探针设计,我们建议以下两点:1. 对于外显子环化circRNA,建议探针尽可能跨backsplice junction位点;circRNA过表达思想主要源于circRNA生物形成机制,已有多篇文章报道circRNA成环机制,目前比较公认的成环机制为circRNA侧翼序列的碱基互补配对,称之为Alu结构(如图2)。circRNA敲除思路主要针对circRNA backsplice junction处序... 阅1 转自Sj0824 公众公开 22-10-21 11:27 |
它一次最多计算25个miRNA的引物,所以,如果你的miRNA列表超过25个,需要分多次放入imput_miRs.txt文件当中。所有的引物对都在result_all_primer_pairs.txt文件里,相邻的两行是一对引物,例如,F_3和R_2是第一对引物,F_2和R_2是第二对引物。有个别miRNA的两对引物都有双峰,又合成了第三对引物,还是有双峰,这样的miRNA就得换实验方法了。9u... 阅1 转自钕51 公众公开 22-10-21 11:24 |
【求助】MCF-7细胞培养用的胰岛素配制方法【求助】MCF-7细胞培养用的胰岛素配制方法浏览 5468 ·讨论 4.重组人胰岛素、牛胰岛素、猪胰岛素是不是都可以使用?用0.01M柠檬酸缓冲液(PH2.0)溶解胰岛素,边溶解边用PH试纸检测PH,并将PH缓慢调节至2~3之间,4度放置半小时,若有沉淀析出,重新调节PH,若无,过滤,1ml分装冻存。 阅348 转1 评0 公众公开 22-06-22 09:51 |
DMSO在多肽溶解中的使用及细胞毒性耐受建议 在我们溶解多肽的时候,经常会遇到一些疏水性序列,这就导致了多肽很难以我们想要的浓度溶解于水中,这个时候,我们可以考虑使用DMSO。但DMSO可增加细胞的通透性,若多肽溶解于DMSO中则会对细胞产生毒性作用。下面是我们对于细胞对DMSO毒性耐受性的一些经验: · 对几乎所有的细胞来说... 阅140 转0 评0 公众公开 22-04-26 10:21 |
我在这里跟大家分享一下自己的经验,最常用,最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法,该法最最简单的说就是:首先将一次实验的所有基因Ct值整理好,之后用每一组样本自身的目的基因Ct值减去自身内参基因Ct值,得到的数就是△Ct;换成公式就是:△Ct=Ct(目的基因)-Ct(内参基因);附上R的完整公式: R=(1+E1)^△Ct1(Control-Sample)/(1+E2)^△... 阅1 转自Amazing427 公众公开 21-12-21 17:34 |
ΔCt test=实验组目的基因 Ct 值-实验组内参基因 Ct 值。ΔCt con=实验组目的基因 Ct 值-实验组内参基因 Ct 值。=2(实验组内参 Ct‐实验组目的基因 Ct)/ 2(对照组内参 Ct‐对照组目的基因 Ct)=2‐[(实验组目的基因 Ct‐实验组内参基因 Ct)‐ (对照组目的基因 Ct‐对照组内参基因 Ct)]ΔCt ref=对照组内参基因 Ct‐实验组内参基因 Ct.=2(对照组... 阅1 转自解螺旋 公众公开 21-12-20 20:18 |
有多少科学实验是拿娃哈哈做的。传说进了实验室的娃哈哈,就不只是简单的饮用水了,它见证了很多实验结果的诞生,就像经历过风浪的老水手。纯水机一坏,就去买娃哈哈或屈臣氏的纯净水,这是实验室里的公开秘密。很可能上学时每天娃哈哈,毕业工作了之后还是天天娃哈哈,难免导致有的朋友在生活中一喝它就感觉自己在喝试剂,形成了某种特有的PTS... 阅37 转0 评0 公众公开 21-11-29 16:01 |