他的首页
他的馆藏
他的动态
馆友反馈
关于他
| 共 22 篇文章 |
|
Exon,CDS,UTR，ORF你分清了吗？以ENST00000583352.1 为例 (GENCODE hg19)，其中涉及以下两行信息（基因组位置后部分信息已省去）chr17 HAVANA stop_codon 46053014 46053016chr17 HAVANA UTR 46053014 46053016结论：可以看出此转录本stop_codon和UTR基因组位置相同。chr1 HAVANA UTR 879531 879955 结论：可以看出此... 阅1492 转10 评0 公众公开 17-11-26 10:52 |
PCR 实用技巧：七大方法消除引物二聚体。引物二聚体其实就是一对引物或者引物自身的 3’ 端部分碱基互补结合，在 Taq 酶的作用下从 3’ 末端延伸所形成的小分子量的双链 DNA 片段。当我们对引物二聚体形成的本质了解了之后，想要区分二者其实并不难，我相信大家看到这里的时候已经知道了引物二聚体形成的本质了，但是我还要强调一遍：引物二聚... 阅29917 转87 评0 公众公开 17-11-20 08:31 |
分子克隆的正确打开方式 | 质粒专题（二）之前在推文中讲述了分子克隆的有关培养基的问题，那么在分子克隆实验中还有有关质粒的问题是实验研究的必备技能之一，原始质粒的扩增或者外源片段与载体连接的克隆质粒都需要进行质粒转化，使其繁殖，筛选阳性质粒后得到就能获得大量质粒。因此将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化，目的就是增加质粒的... 阅504 转12 评0 公众公开 17-11-01 08:12 |
5. 当你把实验组对照组转完病毒后 24 h 就可以进行嘌呤筛选，因为病毒转完之后转染效率不可能达到 100%，而慢病毒在构建的时候就含有嘌呤抗性基因，一旦转入细胞，嘌呤抗性基因就能表达嘌呤抗性蛋白，可以抵抗嘌呤对细胞的杀伤作用。还有一种是 4～6 小时换液的时候用的等量的有血清新鲜培养基稀释原有的无血清的培养基，不撤掉病毒，继续培养 ... 阅10259 转83 评0 公众公开 17-10-28 07:38 |
分子克隆的正确打开方式 | 培养基专题（一）今天为大家介绍下分子克隆的必备液体-LB培养基，又可分为LB肉汤培养基以及LB固体培养基。LB肉汤培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。可分为液体培养基和固体培养基。1 LB培养基的配制体系。取出平板，标好平板抗生素名称，如氨苄霉素AMP ，或者卡那霉素KAN... 阅241 转6 评0 公众公开 17-10-20 13:15 |
保护碱基只是为了PCR产物酶切的过程中，避免内切酶的空间位阻，其实只要简单地把产物连到T载体上再切就可以不加保护碱基，轻松又快乐……2、选了半天的酶切位点，插入片段里竟然也有。莫愁：构建前看质粒图谱是非常重要的，没有酶切位点也是可以补救的，有这样几种方法：1）更换引物上的酶切位点，2）看看有没有可以利用的同尾酶（就是粘性末端... 阅272 转4 评0 公众公开 17-09-01 12:56 |
原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆位点中。一般挑菌之后在EP管中摇个3到5个小时就可以进行菌液PCR了，一般来说这样的摇菌时间能最保证接近真实的阳性结果，菌液PCR之前有人建议说要煮沸几分钟再P... 阅324 转4 评0 公众公开 17-08-29 22:28 |
再叙质粒构建方法 | 重组酶连接。下面介绍一下质粒无缝连接方法-重组酶连接方法。重组酶构建质粒，基于同源基因重组原理，适用于向几乎任何载体在任何位点进行定向克隆，无需考虑插入片段自身携带的酶切位点可高效克隆50 bp～10 kb片段，同时构建时间也大大缩短。对于使用重组方式连接来说，PCR要设计引物,设计引物时要根据质粒载体和基因序列... 阅1124 转11 评0 公众公开 17-08-24 12:58 |
原理依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。质粒构建方式多样，常规的T4连接酶，下面就介绍下T4连接酶构建质粒方法，T4连接酶可用于平末端也可用于粘性末端连接，但一般推荐适用黏性末端。质粒载体的制... 阅1111 转8 评0 公众公开 17-08-15 11:55 |
强烈推荐NEB的内切酶，记得有一次用别家的酶切过夜，结果质粒都被切碎了（当然当时质粒浓度也不高），而用NEB的酶，切个七十二小时仍旧一切OK，尤其现在NEB还推出了HF的内切酶，没有星活性而且统一都用Buffer4。想要快速鉴定，建议用菌液PCR，菌液PCR是有一定讲究的，很多人做菌液PCR鉴定假阳性特多，为什么？因为你PCR引物选的都在载体上，注... 阅96 转4 评0 公众公开 17-07-29 23:01 |
