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(b)外泌体装载过程的流程图:Cy3标记的hsiRNA和外泌体共孵育,通过超速离心提取Cy3 hsiRNA加载的外泌体。(c) 柱状图表示超速离心后的沉淀物(黑色)和上清液(白色)的Cy3 hsiRNA或Cy3 hsiRNA-外泌体的百分比(n = 3的;平均值±SD)。(d) hsiRNA负载不会影响外泌体大小分布(无载外泌体,实线; hsiRNA装载的外泌体,虚线)。(e) 无hsiRNA(...
4.将HEK-293细胞悬浮液添加到生物反应器烧瓶的细胞室中,使用连接到钝性填充针的20 ml注射器(见材料表),小心去除可能形成的任何气泡。2通过用总体积为90μL(45μL样品,45μL PBS)的PBS对样品进行1:2稀释来制备外泌体样品。注:为了尽量减少重复之间的偏差,在将蛋白质分析工作试剂添加到另一个样品/标准的第一次重复之前,先将其添加到标...
【新手福利】初识 外泌体 七.1、通过BCA等方法对分离得到的外泌体进行蛋白定量,用测得的蛋白量来反映外泌体的量,也就是我们经常看到的文章中所谓的使用了多少ug的外泌体。2、通过纳米粒子计数仪对外泌体的粒子数进行计算,使用粒子数目来反映外泌体的数量,这就是文章中可以看到的使用了多少数目的外泌体。1、一定体积的细胞上清和体液(根据...
引入热点:外泌体,在通过PASMC验证了microRNA143的功能后,作者进一步研究了外泌体中的microRNA143在PASMC与PAEC细胞通讯中的作用,在对外泌体进行大小、电镜、Marker等方式进行鉴定后,通过共培养体系、条件性培养基两方面验证外泌体在PASMC与PAEC细胞通讯中的作用,实验设计和方法都很经典,所以做microRNA研究的小伙伴,除了常规实验外,可...
在某些原发性肿瘤上,EVs能通过沉积胞外基质中的如纤连蛋白这样的物质到小胞外囊泡中(sEVs),稳定细胞的突出物从而增加肿瘤细胞的运动,促进细胞迁移。此外,肿瘤细胞分泌的EVs能激活成纤维细胞,导致胞外基质降解并诱导肿瘤促进的细胞因子。当肿瘤微环境是缺氧状态时,肿瘤细胞会分泌血管新生诱导EVs,激活内皮细胞,刺激血管形成,帮助肿瘤...
1、染料-PKH67.SYTO RNASelect:绿色荧光细胞染料,一种细胞通透性的核酸染料,可选择性对RNA进行染色,当与RNA结合是可发出绿色荧光,可标记外泌体中的RNA内容物。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族(CD63, CD81 和CD9)、热休克蛋白家族(HSP60, HSP70和HSP90),示踪病毒使用CD63或CD81作为生物标记,通过将CD63或CD81与荧光蛋...
分情况吧,如果组里很有钱,那就捡着贵的试剂盒买,八九不离十,你会拿到不错的RNA抽提结果。如果组内经费紧张,那hzangs推荐使用trizol来搞定外泌体RNA抽提。说到trizol抽提外泌体RNA肯定很多人鄙视我,认为我在胡扯,很多人尝试trizol抽提外泌体RNA都没有成功。其实我没有胡扯,原因很简单,你们用trizol抽提外泌体RNA的姿势不对。如何使用tr...
今天在这里分享一份“外泌体之家”的调查投票结果。相信大家看后会对国内外泌体领域研究人员常用的主流分离方法有一定的认识。可以看到,超速离心的方法依旧是主流方案。同时这也是高影响力文章常用的方法,感兴趣的看我们之前的推送《【套路】耀眼的文章都用什么方法分离外泌体!目前国内最主流的分离方法是超速离心,这与国际细胞外囊泡协会...
今天主要介绍内容包括细胞外囊泡的研究意义、细胞外囊泡的分类、细胞外囊泡含有的成分、细胞培养上清的制备、细胞外囊泡的保存、细胞外囊泡的鉴定实验要求。根据国际细胞外囊泡协会于2014年发表的一个指导手册(MISEV),鉴定外泌体首先需要通过WB来鉴定细胞外囊泡的标志蛋白是否存在于样品中,通过电子显微镜来观察样品中细胞外囊泡的形态特征...
在这些项目中,与外泌体结合的方向有:miRNA 90项,干细胞 67项,lncRNA21项,自噬 9项,标志物 9项,circRNA 8项,外泌体载药:6项。长链非编码RNA(Long non-codingRNA, lncRNA)是长度大于 200 个核苷酸的非编码RNA, 研究表明,lncRNA 在剂量补偿效应(Dosagecompensation effect)、表观遗传调控、细胞周期调控和细胞分化调控等众多生命活动中...
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