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一步一步教你做PCR.而体外PCR反应同样需要类似的成分，有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。引物稀释的方法：配制时首先将合成的引物12000r/min离心5min，室温静置１分钟，然后再慢慢打开管盖，根据引物合成单（或储存引物的离心管）说明加入一定量的灭菌水（引物说明是加入Buffer，此处加入无菌水即可）以达到10uM的浓度，在漩涡振荡器上... 阅3640 转8 评0 公众公开 19-09-19 18:02 |
样本盐浓度较高，应对策略---样本进行除盐或者将样本盐浓度调成一致。二抗的HRP活性太强，将底物消耗光，应对策略---降低二抗的浓度。ECL底物中H2O2不稳定，失活，应对策略---更换ECL。ECL底物没有覆盖到相应的位置，应对策略---重新洗膜之后再次曝光。封闭不彻底，应对策略---提高封闭液的浓度，孵育时间，保证封闭液完全浸没转印膜。抗体非特... 阅263 转1 评0 公众公开 19-09-18 16:45 |
PCR反应条件如何选择？对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法，除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸(此温度TaqDNA酶仍有较高的催化活性)。在Tm值允许范围内，选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间... 阅244 转1 评0 公众公开 19-09-17 16:26 |
那些大家都在问的SCI难题，你都能解决吗？(5)定期关注稿件状态-Status：Submit New Manuscript、Submissions Sent Back to Author、Icomplete Submissions、Sbmissions Waiting for Author''s Approval、Submissions Being Processed、Submissions Needing Revision、Rvisions Sent Back to Author、Icomplete Submissions Being Revis... 阅53 转2 评0 公众公开 19-09-10 17:28 |
养好细胞注意点。培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，培养基内的 CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性，而培养基中的酸碱指示剂 （通常为 phenol red） 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向... 阅168 转0 评0 公众公开 19-08-22 16:33 |
免疫荧光双标实验操作方法与注意事项。此方法有几种类型，包括免疫酶组织化学和免疫荧光细胞化学法结合;同一切片的再度染色法(先对第一种抗原染色，阳性部位拍照，再用酸处理使抗原抗体解离，继之，对第二种抗原染色、拍照);两种酶标抗体3又重染色(分别用辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶标记第二抗体.用间接法分别显示A和B抗原，如两种一抗来自同一... 阅109 转1 评0 公众公开 19-08-20 16:33 |
PCR引物设计。引物确定以后，可以对引物进行必要的修饰，例如可以在引物的5′端加酶切位点序列；对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功，但遵循某些原则，则有助于引物的设计。某些引物无效的主要原因是引物重复区DNA二级结构的影响，选择扩增片段时最好避开二级结构区域。引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹... 阅43 转0 评0 公众公开 19-08-19 18:01 |
实验时间 | WB 详解（原理、试剂、步骤及问题解答）B. 做线粒体膜 UCP2 蛋白的 Western Blot（以下简写成 Western Blot），提取线粒体后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上样量已加到 120 μg，换了个 santa cloz 的一抗仍不行。C. 细胞水平要做 Western Blot，多少细胞提的蛋白够 Western Blot？D... 阅307 转0 评0 公众公开 19-08-07 17:02 |
本期主要内容包括：EV扩散免疫反应、HSC活化、2型糖尿病、携带功能性gRNA和Cas9蛋白、EV-lncRNA的定量分析、CD4（+）T细胞介导的免疫抑制、拉曼探针、巨噬细胞微泡向肾脏递送地塞米松、椎间盘退变、单囊泡成像分析、β-2微球蛋白、集成ExoID芯片等方面内容。在癌症中，来自肿瘤细胞或非肿瘤细胞的外泌体可被相邻或远处的靶细胞吸收，并且外泌体... 阅612 转3 评0 公众公开 19-08-06 17:03 |
按这个顺序写论文更高效！一篇论文的炼成 论文小白写论文实在太愁了，图书馆憋一天，才写 10 个词，憋好多天，也才几行字！其实我想说，也许是因为没有掌握合适的论文写作顺序。我们都知道，论著类科研论文包括的几个基本部分――摘要，引言，材料方法，图片，结果和讨论，致谢，参考文献。推荐的写作顺序：统计作图―材料方法―图注―结果―讨... 阅60 转2 评0 公众公开 19-08-05 16:20 |
